一种香柚微芽嫁接的方法技术

本发明专利技术涉及果树脱毒繁殖技术领域，具体是一种香柚微芽嫁接的方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35‑40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8‑10min，然后在超净台上的解剖镜8‑40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖或珠心组织作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖或珠心组织再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3‑5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；本发明专利技术通过对外植体的灭菌、组培中各阶段培养基及激素的选择，建立一种香柚微芽嫁接的方法，为香柚组培苗工厂化生产提供理论依据和技术支持，为新品种选育提供一条新途径。

A method of grapefruit micro bud grafting

The invention relates to the technical field of virus-free propagation of fruit trees, in particular to a method of microbud grafting of citrus grandis, which comprises the following steps: (1) selection and disinfection of explants, germination of Citrus grandis tubers in spring or autumn indoors, regular spraying of fungicides when the buds grow up, two weeks later, taking the buds again and putting them after heat treatment at 35 40 C. After being treated with 5% sodium hypochlorite solution for 8 10 minutes, the apical tissue of the apical bud or nucellar tissue was selected as the reserve after stripping the apical tissue under 8 40 times of the anatomical microscope on the super-clean table. (2) After being treated with 5% sodium hypochlorite solution for 3 5 minutes, the selected shoot tip or nucellar tissue was put into the primary culture medium quickly. Through sterilization of explants, selection of culture medium and hormones at various stages in tissue culture, the invention establishes a method of microbud grafting of citrus grandis, provides theoretical basis and technical support for industrialized production of tissue culture seedlings of citrus grandis, and provides a new way for breeding new varieties.

【技术实现步骤摘要】
一种香柚微芽嫁接的方法
本专利技术涉及微芽嫁接
，具体是一种香柚微芽嫁接的方法。
技术介绍
香柚果营养价值高，味道香甜，是很具有特色的地方特色农产品，种植香柚对增加农民收入，改善人民的生活水平具有十分重要的意义。黄龙病是柚类的代表性病害，已造成我国数以百万计柚果园的毁灭。对优良品种进行脱毒处理是目前防治这些病害的主要措施。茎尖微芽嫁接脱毒技术主要是利用植物茎尖分生组织无病毒，细胞分裂速度快的原理发展起来的一种快繁脱毒技术。自从Murashige等提出微体嫁接技术后，引起了各国科研人员的重视。上世纪八十年代以来，发达国家利用茎尖微芽嫁接脱毒技术建立了完整的柑橘良种无病毒苗木繁育体系。我国的柑橘良种无病毒苗木繁育体系建设虽然有一定基础，但不完善，柑橘良种无病毒苗木的生产能力仅能满足需要的5％左右。马凤桐等通过几个柑橘品种的茎尖微芽嫁接，分别成功获得甜橙的微芽嫁接苗，但未对脱毒情况进行检测鉴定。姜玲等通过微芽嫁接得到大量嫁接苗，然后鉴定、证明成功脱除目标病原体。茎尖微芽嫁接脱毒技术是一种将嫁接和组培相结合的技术，巳被证实可以脱除柑橘黄龙病、裂皮病、衰退病、碎叶病等病害。但是，目前，此技术在香柚无毒苗繁殖方面的应用还是一片空白。香柚的繁殖方法主要为高压繁殖和嫁接繁殖，这两种繁殖方式使得病毒极易传播，运用茎尖微芽嫁接脱毒技术应该接能够去除病毒，加快柑橘繁殖速度，缩短生育周期，为生产提供优质种源。永州香柚种植业的快速发展，使得对脱毒苗的需求越来越大，而香柚茎尖快繁脱毒微芽嫁技术的建立是解决脱毒苗需求的有效途径。因此，充分利用湖南市香柚种质资源，深入开展香柚茎尖快繁脱毒微芽嫁技术研究，一方面为香柚种苗工厂化、规模化生产提供理论与技术基础，另一方面也可以为香柚育种、引种及种质保存等提供依据，具有广阔的应用前景。香柚茎尖快繁脱毒微芽嫁技术的建立，有利于改造江永香柚传统种植业，提高地区特色农业产品的竞争力。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供了一种香柚微芽嫁接的方法，通过对外植体的灭菌、组培中各阶段培养基及激素的选择，建立一种香柚微芽嫁接的方法，为香柚组培苗工厂化生产提供理论依据和技术支持，为新品种选育提供一条新途径。为解决以上技术问题，本专利技术现提出以下技术方案：一种香柚微芽嫁接的方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35-40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8-10min，然后在超净台上的解剖镜8-40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖或珠心组织作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖或珠心组织再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3-5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；(3)次代培养，将长大后的茎尖或珠心组织接种在次代培养基上培养，诱导分化为愈伤组织或者不定芽；(4)基本培养，将愈伤组织或者不定芽接种在基本培养基上培养，发育成完整的试管苗；(5)试管苗的脱毒检测；(6)试管苗的嫁接，将步骤(4)培养的试管苗嫁接在砧木上，形成嫁接苗；(7)炼苗，对嫁接苗进行光、温锻炼；(8)移栽定植，采用单芽茎段或双芽茎段扦插式移栽，边剪取边扦插，扦插基质可采用灭过菌的珍珠岩或疏松土壤；(9)看护培养，扦插成活后每隔2-3d喷1次营养液，后期每隔10d喷一次，以促进扦插苗健壮和顺利成长；(10)无毒种苗，将扦插苗移植于田间，大规模种植。进一步的，所述步骤(1)中的杀菌剂为0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液。进一步的，所述茎尖或珠心组织为顶芽的前端0.3-0.5mm的部分，所述茎尖或珠心组织带有1-2个叶原基。进一步的，所述初代培养基的组成为：MS培养基+0.1-0.5mg/L的NAA和/或0.1-0.5mg/L的BA，PH为5.6-6.0。进一步的，所述初代培养的初期的光照强度为1000lx，4周后增加到2000lx，6周后增加到4000lx，培养温度为21-25℃，光照时间为14-18h/d。进一步的，所述次代培养基的组成为：MS培养基+0.1-0.5mg/L的NAA和/或0.1-0.5mg/L的BA+0.6-1.0mg/L的GA，PH为5.6-6.0。进一步的，所述基本培养基的组成为：MS培养基+6-BA0.2-0.5mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+蔗糖28-32g/L+琼脂6-8g/L，PH5.6-7.0。进一步的，所述初代培养基、次代培养基和所述基本培养基均是经过巴氏杀毒冷却后再使用的。进一步的，所述试管苗通过PCR病毒检测方法确定是否含有香柚病毒的。进一步的，所述步骤(7)炼苗的具体做法是：移植前7d左右，将长有3～5片叶、高2～3cm的嫁接苗摆放在温室内的驯化畦内，畦内浇上水，畦上方半遮阳进行驯化，以防止强光、高温灼伤嫁接苗和维持嫁接苗周围的温度，炼苗期温室内的温度要求白天23～27℃，夜间不低于10℃。与现有技术相比较，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术通过对外植体的灭菌、组培中各阶段培养基及激素的选择，建立一种香柚微芽嫁接的方法，为香柚组培苗工厂化生产提供理论依据和技术支持，为新品种选育提供一条新途径；2、本专利技术通过对外植体选择使用茎尖或者珠心组织，并对其进行消毒，提高了成活率，降低了病毒感染率，实现了脱毒的目的；3、通过在培养基上培养，提供了合适的营养素，提高了存活率，避免了外界因素的影响，实现了快速繁殖的目的；4、整个培养过程严格控制，有利于对香柚组培技术的进一步研究；5、对试管苗进行了病毒检测，确保了香柚的脱毒率，从而为香柚种苗优质、安全、高产和大面积推广奠定了基础。具体实施方式为使对本专利技术的结构特征及所达成的功效有更进一步的了解和认识，用以较佳的实施例说明，具体说明如下：(一)培养基的配制实施例11)初代培养基：MS培养基+0.1mg/L的NAA和/或0.1mg/L的BA，PH为5.6。2)次代培养基：MS培养基+0.1mg/L的NAA和/或0.1mg/L的BA+0.6mg/L的GA，PH为5.6。3)基本培养基：MS培养基+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖28g/L+琼脂6g/L，PH5.6。以配置1L的初代培养基为例，其具体配制过程是：称取1L培养基所需的MS培养基的各质量份依次溶解、混合；然后依次称取初代培养基配方中的NAA0.1mg和/或BA0.1mg，分别加入到MS溶液中依次溶解，定容，调节PH值为5.6；最后进行分装，在高温121℃、高压0.1MPa灭菌15-20分钟，培养基冷却后使用。实施例21)初代培养基：MS培养基+0.3mg/L的NAA和/或0.3mg/L的BA，PH为5.8。2)次代培养基：MS培养基+0.3mg/L的NAA和/或0.3mg/L的BA+0.8mg/L的GA，PH为5.8。3)基本培养基：MS培养基+6-BA0.3mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH5.8。以配置1L的初代培养基为例，其具体配制过程是：称取1L培养基所需的MS培养基的各质量份依次溶解、混合；然后依次称取初代培养基配方中的NAA0.3mg和/或BA0.3mg，分别加入到MS溶液中依次溶解，定容，调节PH值为5.8；最后进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种香柚微芽嫁接的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35‑40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8‑10min，然后在超净台上的解剖镜8‑40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖或珠心组织作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖或珠心组织再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3‑5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；(3)次代培养，将长大后的茎尖或珠心组织接种在次代培养基上培养，诱导分化为愈伤组织或者不定芽；(4)基本培养，将愈伤组织或者不定芽接种在基本培养基上培养，发育成完整的试管苗；(5)试管苗的脱毒检测；(6)试管苗的嫁接，将步骤(4)培养的试管苗嫁接在砧木上，形成嫁接苗；(7)炼苗，对嫁接苗进行光、温锻炼；(8)移栽定植，采用单芽茎段或双芽茎段扦插式移栽，边剪取边扦插，扦插基质可采用灭过菌的珍珠岩或疏松土壤；(9)看护培养，扦插成活后每隔2‑3d喷1次营养液，后期每隔10d喷一次，以促进扦插苗健壮和顺利成长；(10)无毒种苗，将扦插苗移植于田间，大规模种植。

【技术特征摘要】
1.一种香柚微芽嫁接的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒，在春季或者秋季取香柚块茎在室内发芽，芽长大后定期喷洒杀菌剂，两周后，再次取芽，芽经过35-40℃热处理后放在5％的次氯酸钠溶液处理8-10min，然后在超净台上的解剖镜8-40倍下进行茎尖剥离，选取顶芽的茎尖或珠心组织作为备用；(2)初代培养，将选取的茎尖或珠心组织再次放入5％的次氯酸钠溶液处理3-5min后，放入初代培养基中快速繁殖长大；(3)次代培养，将长大后的茎尖或珠心组织接种在次代培养基上培养，诱导分化为愈伤组织或者不定芽；(4)基本培养，将愈伤组织或者不定芽接种在基本培养基上培养，发育成完整的试管苗；(5)试管苗的脱毒检测；(6)试管苗的嫁接，将步骤(4)培养的试管苗嫁接在砧木上，形成嫁接苗；(7)炼苗，对嫁接苗进行光、温锻炼；(8)移栽定植，采用单芽茎段或双芽茎段扦插式移栽，边剪取边扦插，扦插基质可采用灭过菌的珍珠岩或疏松土壤；(9)看护培养，扦插成活后每隔2-3d喷1次营养液，后期每隔10d喷一次，以促进扦插苗健壮和顺利成长；(10)无毒种苗，将扦插苗移植于田间，大规模种植。2.根据权利要求1所述的一种香柚微芽嫁接的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的杀菌剂为0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液。3.根据权利要求1所述的一种香柚微芽嫁接的方法，其特征在于，所述茎尖或珠心组织为顶芽的前端0.3-0.5mm的部分，所述茎尖或珠心组织带有1-2个叶原基。4.根据权利要求1所述的一种香柚微芽嫁接的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张斌，袁志辉，何福林，刘小文，刘伟，刘春霖，
申请(专利权)人：湖南科技学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43