一种丙酮酸钠用作治疗宫颈癌的药物及制备方法技术

一种丙酮酸钠用作治疗宫颈癌的药物及制备方法，它是由丙酮酸钠溶于PBS缓冲液所组成。丙酮酸钠药物使用摩尔浓度为5mM～100mM；丙酮酸钠纯度为试剂纯。本发明专利技术的优点是：丙酮酸钠都是常见药物、易于制备而且安全性高；不仅丙酮酸钠单独给药对宫颈癌细胞有抑制作用，丙酮酸杀死人宫颈癌细胞的细胞试验，结果表明：丙酮酸钠药物治疗宫颈癌细胞具有显著的效应，提高了药物疗效减小的副作用，效果显著，具有医学上的统计学意义。

Sodium pyruvate as medicine for treating cervical cancer and preparation method thereof

The invention relates to a sodium pyruvate used as a medicine for treating cervical cancer and a preparation method thereof, which is composed of sodium pyruvate dissolved in PBS buffer solution. The dosage of sodium pyruvate is 5mM to 100mM, and the purity of pyruvate is pure reagent. The advantages of the invention are: sodium pyruvate is a common drug, easy to prepare and high safety; not only sodium pyruvate alone can inhibit cervical cancer cells, but also pyruvate kills human cervical cancer cells. The results show that sodium pyruvate has a significant effect on cervical cancer cells and improves the drug quality. The side effect of reducing the efficacy of the drug is remarkable and has statistical significance in medicine.

【技术实现步骤摘要】
一种丙酮酸钠用作治疗宫颈癌的药物及制备方法
本专利技术涉及医药领域，特别是一种丙酮酸钠用作治疗宫颈癌的药物及制备方法。
技术介绍
宫颈癌可分为外生型宫颈癌和内生型宫颈癌。外生型宫颈癌症状为息肉状、菜花状赘生物，常伴感染，肿瘤质脆易出血；内生型宫颈癌症状为宫颈肥大、质硬。子宫颈癌是全球妇女最常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌，位居全球前列。据报道，如不采取相应治疗措施，因子宫颈癌导致的死亡病例将上升25％。医学的发展使很多癌症已有了较好的治疗效果，尽管手术、放化疗等治疗手段已经日趋成熟，但对晚期或转移性宫颈癌疗效仍不尽人意，宫颈癌的药物治疗已经成为当前研究热点之一。丙酮酸钠(SodiumPyruvate)丙酮酸钠是最常见的丙酮酸盐，别名焦葡萄酸钠、2-羰基丙酸钠盐，分子式为C3H3NaO3，是一类内源性小分子物质。丙酮酸钠在医学上、诊断试剂以及医疗器械中被广泛用作缓冲剂、赋形剂和抗氧化剂。已有结果证明丙酮酸钠可能有助于改善甚至防止肝细胞功能障碍发生后的出血性休克，丙酮酸钠能够通过抑制细胞caspase-3以及改善GSH/GSSG比率，抑制细胞凋亡，证明外源性丙酮酸钠具有改善细胞氧化还原状态的作用；根据之前的报道，丙酮酸药物在治疗肝癌上有一定的积极作用，但是至今未见其在治疗宫颈癌方面的作用。目前，将丙酮酸钠作为治疗宫颈癌药物还未见相关报道；本专利技术将丙酮酸钠用药对宫颈癌细胞HeLa细胞系的抑制效果显著，并通过实验证明，丙酮酸钠通过抑制宫颈癌细胞组蛋白H3、H4的表达进而抑制宫颈癌细胞的增殖，具有深远的医学应用价值和意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术分析和存在问题，提供一种丙酮酸钠的抗宫颈癌药物，该药物在应用于宫颈癌治疗中特异性强、活性高、更有效。本专利技术的技术方案：一种将丙酮酸钠用作抗宫颈癌药物，它是由丙酮酸钠溶于PBS缓冲液所组成。丙酮酸钠药物浓度为5mM～200mM。丙酮酸钠纯度为试剂纯。配制1M丙酮酸钠母液，即称取0.5562g丙酮酸钠(sigma公司)溶于5mLPBS缓冲液中；使用时现用现稀释。本专利技术的优点是；1)丙酮酸钠都是常见药物，价格实惠、易于制备且安全性高；2)通过使用丙酮酸钠抑制人宫颈癌细胞增殖的试验，结果表明：该丙酮酸钠药物治疗宫颈癌有显著的疗效，效果显著，具有医学上的统计学意义。附图说明图1为丙酮酸钠作用于宫颈癌细胞给药方式图。图2为丙酮酸钠治疗对人宫颈癌细胞增殖活性的抑制效果(***P＜0.001VSCON)。图3为丙酮酸钠对宫颈癌细胞组蛋白H4和H3蛋白表达的影响，即丙酮酸钠治疗前后，人宫颈癌细胞中组蛋白H4、H3蛋白表达情况及定量分析(*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001VSCON)。具体实施方式实施例1：丙酮酸钠治疗对人宫颈癌细胞增殖活性的抑制作用。1.所用材料：人宫颈癌细胞系为HeLa细胞；丙酮酸钠为购买于Sigma公司，用无菌PBS溶解配制为1M母液，使用时稀释，现配现用；配制含10％胎牛血清、1％双抗(青霉素和链霉素)的DMEM高糖培养基用于培养细胞，CCK8细胞增殖与活性检测试剂盒。2.应用方法：1)取对数生长期的细胞，以5×104个/mL的浓度接种于在96孔板(100μL/孔)；2)贴壁培养12h后，弃掉培养基，向96孔培养板单独加入含不同浓度丙酮酸钠(0mM、10mM、50mM、100mM、150mM、200mM)的DMEM培养基，培养24h；3)弃掉旧培养基，向每孔中加入含有10％的CCK-8溶液的培养基100μL；4)将96孔板放在CO2浓度为5％的细胞培养箱中孵育3小时5)用酶标仪测定在450nm处的吸光度A450；6)细胞增殖活力计算：细胞活力(％)＝[A450(加药)－A450(空白)]/[A450(0加药)－A450(空白)]×100A450(加药)：具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度；A450(空白)：具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度；A450(0加药)：具有细胞、CCK8溶液而没有药物的孔的吸光度。3.检测结果采用CCK8法检测不同细胞和不同药物处理组的细胞生长情况，从图1和图2结果可以看出，使用不同浓度的丙酮酸钠(0mM、10mM、50mM、100mM、150mM、200mM)处理HeLa细胞24h后各组细胞存活率为99.16％、88.18％、73.74％、61.08％、38.56％、27.59％，与对照组99.16％(0mM)相比，丙酮酸钠(10mM、50mM、100mM、150mM、200mM)存在统计学意义(P＜0.001)；表1丙酮酸钠0mM10mM50mM100mM150mM200mM细胞生存率％99.1688.1873.7461.0838.5627.594.结论一定浓度的丙酮酸钠可以抑制宫颈癌细胞的增殖，丙酮酸钠能够有效的抑制宫颈癌细胞的增殖。实例2：丙酮酸钠分别对人宫颈癌HeLa细胞组蛋白H4、H3表达的影响。使用不同浓度丙酮酸钠(0mM、50mM、100mM)处理HeLa细胞24小时后收细胞检测组蛋白H4、H3的表达变化；1.所用材料：细胞，同实施例1；药物，同实施例1，丙酮酸钠浓度为(0mM、50mM、100mM)；H4、H3抗体购买于ABcam公司；β-actin购买于Abclonal公司，兔二抗购买于ABclonal公司，westernboltECL显色液购买于BIO-RAD公司。2.所用方法：1)提取蛋白，聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、转膜2)蛋白免疫印迹：①从转膜夹板中取出PVDF膜，根据目的蛋白大小裁剪PVDF膜，TBST在脱色摇床上清洗5min；②封闭：5％脱脂牛奶室温封闭1h；③孵育一抗：H4抗体1：:2000稀释配制一抗工作液，将PVDF膜放置于抗体孵育盒，加入适当体积抗体没过PVDF膜，4℃100rmp3D摇床孵育过夜，TBST清洗10min/3次；④孵育二抗：1:5000稀释比配制二抗工作液，室温100rmp3D摇床孵育1h，TBST清洗10min/3次；⑤显色：配制显色液，A液B液1:1混合，避光保存。将膜放置在成像板上，加入适当显色液，反应两分钟后，操作蛋白成像仪曝光。3.检测结果为探讨丙酮酸钠诱导宫颈癌细胞凋亡效应的可能机制，我们采用WesternBlotting方法检测细胞组蛋白H4的表达情况。图3为丙酮酸钠对宫颈癌HeLa细胞系组蛋白H4、H3表达的影响，图3使用丙酮酸钠(0、50、100mM)处理HeLa细胞24小时后，通过WesternBlotting检测了组蛋白H3、H4的蛋白表达情况，与对照组相比，作用结果显示：丙酮酸钠可以显著下调组蛋白H3、H4的表达(P＜0.05)。4.结论丙酮酸钠可以显著降低组蛋白H4、H3的表达，进而影响宫颈癌细胞基因组表达，调控宫颈癌细胞的死亡。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种丙酮酸钠用作治疗宫颈癌的药物，它是由丙酮酸钠溶于PBS缓冲液所组成，其特征在于丙酮酸钠药物浓度为5mM～100mM；丙酮酸钠纯度为试剂纯。

【技术特征摘要】
1.一种丙酮酸钠用作治疗宫颈癌的药物，它是由丙酮酸钠溶于PBS缓冲液所组...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珊珊，余希岚，翟彦生，马瑞，吴银盛，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42