扁蓿豆SSR标记的检测引物组、试剂盒及其应用和扁蓿豆自交亲和基因型的筛选方法技术

本发明专利技术提供了一种扁蓿豆SSR标记的检测引物组、试剂盒及其应用和扁蓿豆自交亲和基因型的筛选方法，涉及生物技术领域，该扁蓿豆的SSR标记检测引物组和包含该引物组的试剂盒，能够特异性的扩增扁蓿豆的SSR标记，使用该引物组分别扩增母本和该母本子代的SSR标记可以比较子代与母本的SSR标记的异同，从而判断该子代为杂交子代或者自交子代。在使用上述引物组筛选扁蓿豆亲和基因型的方法中，通过比较母本与子代基因型得到母本的自交率，可发掘自交亲和基因型的母本，缓解了现有技术中存在的缺乏一种准确快速筛选扁蓿豆自交亲和基因型的方法的技术问题。

Detection primers, kits and application of SSR markers in alfalfa and screening methods of self-compatible genotypes in Alfalfa

The invention provides a detection primer group, a reagent kit and its application for SSR markers of Alfalfa beans and a method for screening selfing genotypes of Alfalfa beans. The invention relates to the field of biotechnology, the detection primer group of the alfalfa beans and a reagent kit containing the primer group can specifically amplify the SSR markers of Alfalfa beans, and the primer group is used. The SSR markers of the progeny amplified from the maternal parent and the progeny of the maternal parent can compare the similarities and differences of SSR markers between the progeny and the maternal parent, so that the progeny can be judged as hybrid or self-bred progeny. In the method of screening compatible genotypes of Alfalfa beans by using the primers mentioned above, the self-crossing rate of female parent was obtained by comparing the genotypes of female parent and offspring, and the female parent of the self-compatible genotype could be discovered, thus alleviating the technical problem of lacking an accurate and rapid method for screening self-compatible genotypes of Alfalfa beans in the existing technology.

【技术实现步骤摘要】
扁蓿豆SSR标记的检测引物组、试剂盒及其应用和扁蓿豆自交亲和基因型的筛选方法
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种扁蓿豆SSR标记的检测引物组、试剂盒及其应用和扁蓿豆自交亲和基因型的筛选方法。
技术介绍
扁蓿豆是一种多年生豆科牧草，在我国北方地区多有分布。它抗寒、耐旱、适应性强，是一种不可多得的重要基因资源。研究、改造、利用扁蓿豆，对提高草原生产能力，促进畜牧业发展，有着现实的生产意义。扁蓿豆是多年生异花授粉植物。目前，扁蓿豆品种的选育常采用轮回选育的方法。杂交育种与轮回选择育种相比，具有目的性状聚合快、育种周期短等优点。在扁蓿豆育种中，缺乏自交系和细胞质雄性不育系，限制了其利用杂交育种方法改良目的性状。随着生物技术的发展，分子标记广泛应用于分子育种和遗传分析，但是目前尚未有利用分子育种的方法筛选具有亲和自交基因型的扁蓿豆单株母本的方法。因此，目前需要一种利用分子育种有效筛选扁蓿豆自交亲和基因型的方法。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种扁蓿豆SSR标记的检测引物组，缓解了现有技术中缺少一种扩增能够筛选扁蓿豆自交亲和基因型分子标记的引物组的问题；本专利技术的第二目的在于提供一种包含上述检测引物组的试剂盒；缓解了现有技术中存在的缺乏一种能够检测扁蓿豆的自交亲和基因型的试剂盒的技术问题；本专利技术的第三目的在于提供了一种上述检测引物组和上述试剂盒在筛选扁蓿豆自交亲和基因型中的应用，可广泛应用于扁蓿豆自交亲和基因型、自交子代和杂交子代的筛选；本专利技术的第四目的在于提供一种扁蓿豆自交亲和基因型的筛选方法，缓解了现有技术中存在的缺乏一种能够有效筛选扁蓿豆自交亲和基因型的方法的问题。为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：一种扁蓿豆SSR标记的检测引物组，所述检测引物组包含如下引物对中至少两组引物对：引物对MrE-SSR190：包含MrE-SSR190-F和MrE-SSR190-R，其中MrE-SSR190-F具有如SEQIDNO.1所示序列，MrE-SSR190-R具有如SEQIDNO.2所示序列；引物对MrE-SSR-578：包含MrE-SSR-578-F和MrE-SSR-578-R，其中MrE-SSR-578-F具有如SEQIDNO.3所示序列，MrE-SSR-578-R具有如SEQIDNO.4所示序列；引物对MrE-SSR137：包含MrE-SSR137-F和MrE-SSR137-R，其中MrE-SSR137-F具有如SEQIDNO.5所示序列，MrE-SSR137-R具有如SEQIDNO.6所示序列；引物对MrE-SSR492：包含MrE-SSR492-F和MrE-SSR492-R，其中MrE-SSR492-F具有如SEQIDNO.7所示序列，MrE-SSR492-R具有如SEQIDNO.8所示序列；引物对MrE-SSR-669：包含MrE-SSR-669-F和MrE-SSR-669-R，其中MrE-SSR-669-F具有如SEQIDNO.9所示序列，MrE-SSR-669-R具有如SEQIDNO.10所示序列；引物对MrE-SSR200：包含MrE-SSR200-F和MrE-SSR200-R，其中MrE-SSR200-F具有如SEQIDNO.11所示序列，MrE-SSR200-R具有如SEQIDNO.12所示序列；引物对MrE-SSR-534：包含MrE-SSR-534-F和MrE-SSR-534-R，其中MrE-SSR-534-F具有如SEQIDNO.13所示序列，MrE-SSR-534-R具有如SEQIDNO.14所示序列；引物对MrE-SSR-650：包含MrE-SSR-650-F和MrE-SSR-650-R，其中MrE-SSR-650-F具有如SEQIDNO.15所示序列，MrE-SSR-650-R具有如SEQIDNO.16所示序列；引物对MrE-SSR-676：包含MrE-SSR-676-F和MrE-SSR-676-R，其中MrE-SSR-676-F具有如SEQIDNO.17所示序列，MrE-SSR-676-R具有如SEQIDNO.18所示序列；引物对MrE-SSR143：包含MrE-SSR143-F和MrE-SSR143-R，其中MrE-SSR143-F具有如SEQIDNO.19所示序列，MrE-SSR143-R具有如SEQIDNO.20所示序列；引物对MrE-SSR140：包含MrE-SSR140-F和MrE-SSR140-R，其中MrE-SSR140-F具有如SEQIDNO.21所示序列，MrE-SSR140-R具有如SEQIDNO.22所示序列；引物对MrE-SSR-614：包含MrE-SSR-614-F和MrE-SSR-614-R，其中MrE-SSR-614-F具有如SEQIDNO.23所示序列，MrE-SSR-614-R具有如SEQIDNO.24所示序列；引物对MrE-SSR256：包含MrE-SSR256-F和MrE-SSR256-R，其中MrE-SSR256-F具有如SEQIDNO.25所示序列，MrE-SSR256-R具有如SEQIDNO.26所示序列；引物对MrE-SSR101：包含MrE-SSR101-F和MrE-SSR101-R，其中MrE-SSR101-F具有如SEQIDNO.27所示序列，MrE-SSR101-R具有如SEQIDNO.28所示序列；引物对MrE-SSR539：包含MrE-SSR539-F和MrE-SSR539-R，其中MrE-SSR539-F具有如SEQIDNO.29所示序列，MrE-SSR539-R具有如SEQIDNO.30所示序列；引物对MrE-SSR727：包含MrE-SSR727-F和MrE-SSR727-R，其中MrE-SSR727-F具有如SEQIDNO.31所示序列，MrE-SSR727-R具有如SEQIDNO.32所示序列。一种扁蓿豆SSR标记检测的试剂盒，所述试剂盒包含上述检测引物组。一种上述检测引物组或上述试剂盒在筛选扁蓿豆自交亲和基因型中的应用。一种扁蓿豆的自交亲和基因型的筛选方法，所述筛选方法包括扩增扁蓿豆单株母本和所述扁蓿豆单株母本的子代的DNA，通过比较扩增产物电泳后谱带的带型得到所述扁蓿豆单株母本的子代的类型的分布，筛选出所述自交亲和基因型；所述扩增为使用上述检测引物组或者上述试剂盒扩增所述扁蓿豆单株母本与所述扁蓿豆单株母本的子代的DNA。进一步的，扩增所述扁蓿豆单株母本的子代的数量为25-30个。进一步的，所述子代的类型包括杂交子代和自交子代。进一步的，在至少任意六组引物对的扩增产物中，所述自交子代的谱带的带型与母本的谱带的带型完全相同；或，母本的谱带包含两条带，所述自交子代的谱带中的一条带与母本的谱带中的一条带相同。进一步的，在至少任意两组引物对的扩增产物中，所述杂交子代的谱带中有一条带与母本的谱带中的一条带相同，另一条带与母本的任何一条带均不相同。进一步的，所述扩增包括多重PCR扩增，所述多重PCR扩增的反应至少包括两组引物对；优选地，引物对MrE-SSR190和引物对MrE-SSR-578在同一PCR体系内进行多重PCR扩增；优选地，引物对MrE-SSR137和引物对Mr本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种扁蓿豆SSR标记的检测引物组，其特征在于，所述检测引物组包含如下引物对中至少两组引物对：引物对MrE‑SSR190：包含MrE‑SSR190‑F和MrE‑SSR190‑R，其中MrE‑SSR190‑F具有如SEQ ID NO.1所示序列，MrE‑SSR190‑R具有如SEQ ID NO.2所示序列；引物对MrE‑SSR‑578：包含MrE‑SSR‑578‑F和MrE‑SSR‑578‑R，其中MrE‑SSR‑578‑F具有如SEQ ID NO.3所示序列，MrE‑SSR‑578‑R具有如SEQ ID NO.4所示序列；引物对MrE‑SSR137：包含MrE‑SSR137‑F和MrE‑SSR137‑R，其中MrE‑SSR137‑F具有如SEQ ID NO.5所示序列，MrE‑SSR137‑R具有如SEQ ID NO.6所示序列；引物对MrE‑SSR492：包含MrE‑SSR492‑F和MrE‑SSR492‑R，其中MrE‑SSR492‑F具有如SEQ ID NO.7所示序列，MrE‑SSR492‑R具有如SEQ ID NO.8所示序列；引物对MrE‑SSR‑669：包含MrE‑SSR‑669‑F和MrE‑SSR‑669‑R，其中MrE‑SSR‑669‑F具有如SEQ ID NO.9所示序列，MrE‑SSR‑669‑R具有如SEQ ID NO.10所示序列；引物对MrE‑SSR200：包含MrE‑SSR200‑F和MrE‑SSR200‑R，其中MrE‑SSR200‑F具有如SEQ ID NO.11所示序列，MrE‑SSR200‑R具有如SEQ ID NO.12所示序列；引物对MrE‑SSR‑534：包含MrE‑SSR‑534‑F和MrE‑SSR‑534‑R，其中MrE‑SSR‑534‑F具有如SEQ ID NO.13所示序列，MrE‑SSR‑534‑R具有如SEQ ID NO.14所示序列；引物对MrE‑SSR‑650：包含MrE‑SSR‑650‑F和MrE‑SSR‑650‑R，其中MrE‑SSR‑650‑F具有如SEQ ID NO.15所示序列，MrE‑SSR‑650‑R具有如SEQ ID NO.16所示序列；引物对MrE‑SSR‑676：包含MrE‑SSR‑676‑F和MrE‑SSR‑676‑R，其中MrE‑SSR‑676‑F具有如SEQ ID NO.17所示序列，MrE‑SSR‑676‑R具有如SEQ ID NO.18所示序列；引物对MrE‑SSR143：包含MrE‑SSR143‑F和MrE‑SSR143‑R，其中MrE‑SSR143‑F具有如SEQ ID NO.19所示序列，MrE‑SSR143‑R具有如SEQ ID NO.20所示序列；引物对MrE‑SSR140：包含MrE‑SSR140‑F和MrE‑SSR140‑R，其中MrE‑SSR140‑F具有如SEQ ID NO.21所示序列，MrE‑SSR140‑R具有如SEQ ID NO.22所示序列；引物对MrE‑SSR‑614：包含MrE‑SSR‑614‑F和MrE‑SSR‑614‑R，其中MrE‑SSR‑614‑F具有如SEQ ID NO.23所示序列，MrE‑SSR‑614‑R具有如SEQ ID NO.24所示序列；引物对MrE‑SSR256：包含MrE‑SSR256‑F和MrE‑SSR256‑R，其中MrE‑SSR256‑F具有如SEQ ID NO.25所示序列，MrE‑SSR256‑R具有如SEQ ID NO.26所示序列；引物对MrE‑SSR101：包含MrE‑SSR101‑F和MrE‑SSR101‑R，其中MrE‑SSR101‑F具有如SEQ ID NO.27所示序列，MrE‑SSR101‑R具有如SEQ ID NO.28所示序列；引物对MrE‑SSR539：包含MrE‑SSR539‑F和MrE‑SSR539‑R，其中MrE‑SSR539‑F具有如SEQ ID NO.29所示序列，MrE‑SSR539‑R具有如SEQ ID NO.30所示序列；引物对MrE‑SSR727：包含MrE‑SSR727‑F和MrE‑SSR727‑R，其中MrE‑SSR727‑F具有如SEQ ID NO.31所示序列，MrE‑SSR727‑R具有如SEQ ID NO.32所示序列。...

【技术特征摘要】
1.一种扁蓿豆SSR标记的检测引物组，其特征在于，所述检测引物组包含如下引物对中至少两组引物对：引物对MrE-SSR190：包含MrE-SSR190-F和MrE-SSR190-R，其中MrE-SSR190-F具有如SEQIDNO.1所示序列，MrE-SSR190-R具有如SEQIDNO.2所示序列；引物对MrE-SSR-578：包含MrE-SSR-578-F和MrE-SSR-578-R，其中MrE-SSR-578-F具有如SEQIDNO.3所示序列，MrE-SSR-578-R具有如SEQIDNO.4所示序列；引物对MrE-SSR137：包含MrE-SSR137-F和MrE-SSR137-R，其中MrE-SSR137-F具有如SEQIDNO.5所示序列，MrE-SSR137-R具有如SEQIDNO.6所示序列；引物对MrE-SSR492：包含MrE-SSR492-F和MrE-SSR492-R，其中MrE-SSR492-F具有如SEQIDNO.7所示序列，MrE-SSR492-R具有如SEQIDNO.8所示序列；引物对MrE-SSR-669：包含MrE-SSR-669-F和MrE-SSR-669-R，其中MrE-SSR-669-F具有如SEQIDNO.9所示序列，MrE-SSR-669-R具有如SEQIDNO.10所示序列；引物对MrE-SSR200：包含MrE-SSR200-F和MrE-SSR200-R，其中MrE-SSR200-F具有如SEQIDNO.11所示序列，MrE-SSR200-R具有如SEQIDNO.12所示序列；引物对MrE-SSR-534：包含MrE-SSR-534-F和MrE-SSR-534-R，其中MrE-SSR-534-F具有如SEQIDNO.13所示序列，MrE-SSR-534-R具有如SEQIDNO.14所示序列；引物对MrE-SSR-650：包含MrE-SSR-650-F和MrE-SSR-650-R，其中MrE-SSR-650-F具有如SEQIDNO.15所示序列，MrE-SSR-650-R具有如SEQIDNO.16所示序列；引物对MrE-SSR-676：包含MrE-SSR-676-F和MrE-SSR-676-R，其中MrE-SSR-676-F具有如SEQIDNO.17所示序列，MrE-SSR-676-R具有如SEQIDNO.18所示序列；引物对MrE-SSR143：包含MrE-SSR143-F和MrE-SSR143-R，其中MrE-SSR143-F具有如SEQIDNO.19所示序列，MrE-SSR143-R具有如SEQIDNO.20所示序列；引物对MrE-SSR140：包含MrE-SSR140-F和MrE-SSR140-R，其中MrE-SSR140-F具有如SEQIDNO.21所示序列，MrE-SSR140-R具有如SEQIDNO.22所示序列；引物对MrE-SSR-614：包含MrE-SSR-614-F和MrE-SSR-614-R，其中MrE-SSR-614-F具有如SEQIDNO.23所示序列，MrE-SSR-614-R具有如SEQIDNO.24所示序列；引物对MrE-SSR256：包含MrE-SSR256-F和MrE-SSR256-R，其中MrE-SSR256-F具有如SEQIDNO.25所示序列，MrE-SSR256-R具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，黄帆，李鸿雁，李志勇，刘磊，师文贵，
申请(专利权)人：中国农业科学院草原研究所，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15