抗LAG3抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了结合T细胞共抑制子淋巴细胞活化基因3(LAG3)的抗体及其使用方法。在本发明专利技术的多个实施方案中，抗体是与特异性结合LAG3的全人抗体。在一些实施方案中，本发明专利技术的抗体用于抑制或中和LAG3活性，从而提供治疗疾病或病症如癌症或病毒感染的手段。

Anti LAG3 antibody and its use

The present invention provides an antibody combined with T cell co suppression lymphocyte activation gene 3 (LAG3) and a method of using the same. In the multiple embodiments of the invention, antibodies are human antibodies that bind specifically to LAG3. In some implementations, the antibodies of the present invention are used to inhibit or neutralize LAG3 activity, thereby providing a means of treating diseases or diseases such as cancer or viral infection.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗LAG3抗体及其用途专利
本专利技术涉及特异性结合免疫调节性受体淋巴细胞活化基因-3(LAG3)的抗体和抗体的抗原结合片段，以及使用这些抗体的治疗和诊断方法。序列表通过EFS-Web方式同时电子提交了ASCII格式的序列表的正式副本和说明书，序列表文件名为2016_10_07_10176WO01_SEQ_LIST_ST25.txt，创建日期为2016年10月07日，大小约为240千字节。在本ASCII格式文件中包含的序列表是本说明书的一部分并且其全部内容通过引用并入本申请。
技术介绍
T细胞共刺激和共抑制分子(统称为共信号分子)在调节T细胞活化、亚群分化、效应功能和存活中发挥关键作用(Chen等，2013,NatureRev.Immunol.13:227-242)。在T细胞受体识别抗原递呈细胞上的同源肽-MHC复合物之后，信号共传导受体和T细胞受体共定位于免疫突触处，在此处其与TCR信号传导协同以促进或抑制T细胞活化和功能(Flies等，2011,YaleJ.Biol.Med.84:409-421)。最终的免疫应答由共刺激和共抑制信号之间的平衡(“免疫检验点”)所调控(Pardoll2012,NatureReviewsCancer12:252-264)。淋巴细胞活化基因-3(LAG3)的功能在外周T细胞耐受的介导中是一个这样的“免疫检验点”。LAG3(也称为CD223)是在活化的CD4和CD8T细胞、γδT细胞、自然杀伤T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、浆细胞样树突状细胞和调节性T细胞上表达的503个氨基酸的跨膜蛋白受体。LAG3是免疫球蛋白(Ig)超家族成员。LAG3的主要功能是削弱免疫应答。LAG3与MHCII类分子结合导致向表达LAG3的细胞递送负面信号并下调抗原依赖性的CD4和CD8T细胞应答。LAG3负向调节T细胞的增殖、产生细胞因子和裂解靶细胞的能力，称为T细胞的“耗竭”。据报道，LAG3在增强调节性T(Treg)细胞功能方面发挥作用(Pardoll2012,NatureReviewsCancer12:252-264)。由于LAG3在肿瘤免疫和感染免疫中具有重要作用，因而其是免疫疗法的理想靶点。在癌症和慢性病毒感染的治疗中已对使用包括单克隆抗体在内的拮抗剂对LAG3的阻断进行了研究(Turnis等，2015,Eur.J.Immunol.45:1892-1905)。针对LAG3的单克隆抗体是本领域公知的并且其已在例如参见美国专利/公开号5976877、6143273、6197524、8551481、20110070238、20110150892、20130095114、20140093511、20140127226、20140286935和WO95/30750、WO97/03695、WO98/58059、WO2004/078928、WO2008/132601、WO2010/01957、WO2014/008218、EP0510079B1、EP0758383B1、EP0843557B1、EP0977856B1、EP1897548B2、EP2142210A1和EP2320940B1中被描述。当开发一种用于治疗人类的免疫疗法时，需要显示具有诸如低免疫原性、适宜的结合动力学参数、与猴靶点的交叉反应性、适宜的体外活性和/或适宜的体内活性性质的抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了结合LAG3的抗体及其抗原结合片段。本专利技术的抗体尤其适用于靶向表达LAG3的免疫细胞，以及用于调节LAG3的活性。在某些实施方式中，本专利技术的抗体用于抑制或中和LAG3的活性和/或用于刺激T细胞活化(例如，在T细胞介导的杀伤是有益的或所期望的情况下)。在某些实施方式中，抗体用于抑制调节性T细胞的功能和/或逆转耗竭的T细胞的失能状态。可以将本专利技术的抗-LAG3抗体或其抗原结合部分作为多特异性抗原结合分子所包括的一部分，例如用以调节免疫应答和/或将抗体靶向特定细胞类型(如肿瘤细胞或病毒感染的细胞)。抗体用于治疗疾病或病症，如癌症和病毒感染。本专利技术的抗体可以是全长的(例如，IgG1或IgG4抗体)或者可以仅包含抗原结合部分(例如，Fab、F(ab’)2或scFv片段)，且可经修饰以影响功能性，例如，消除残留的效应功能(Reddy等，2000,J.Immunol.164:1925-1933)。在一些实施方式中，抗体可以是双特异性的。在第一个方面中，本专利技术提供了与LAG3特异性结合的分离的重组单克隆抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，抗体是全人抗体。本专利技术的示例性抗-LAG3抗体列于本申请的表1-3中。表1列出了示例性的抗-LAG3抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补性决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补性决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识。表2列出了示例性的抗-LAG3抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识。表3列出了示例性的抗-LAG3抗体的重链和轻链序列的氨基酸序列标识。本专利技术提供了包含HCVR的抗体或其抗原结合片段，所述HCVR含有选自表1中列出的任意HCVR氨基酸序列或者与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性的基本相似序列的氨基酸序列。本专利技术提供了包含LCVR的抗体或其抗原结合片段，所述LCVR含有选自表1中列出的任意LCVR氨基酸序列或者与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性的基本相似序列的氨基酸序列。本专利技术还提供了包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的抗体或其抗原结合片段，所述HCVR/LCVR包括表1中列出的任意HCVR氨基酸序列与表1中列出的任意LCVR氨基酸序列的配对。根据某些实施方式，本专利技术提供了包含HCVR和LCVR氨基酸序列对的抗体或其抗原结合片段，所述HCVR和LCVR氨基酸序列对包含在表1中列出的任意示例性抗-LAG3抗体中。在某些实施方式中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自下组：SEQIDNO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410、418/426、434/442、450/522、458/522、466/522、474/522、482/522、490/522、498/530、506/530、514/530、538/546和554/562。在某些实施方式中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自下列之一：SEQIDNO：386/394(例如，H4sH15479P)、418/426(例如，H4sH15482P)或538/546(例如，H4sH14813N)。在某些实施方式中，本专利技术提供了抗-LAG3抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含HCVR和L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人淋巴细胞活化基因3(LAG3)蛋白特异性结合，其中所述抗体或其抗原结合片段与LAG3的胞外域(SEQ ID NO：588的氨基酸28‑71)中所含的一个或多个氨基酸相互作用，所述相互作用通过氢/氘交换所确定。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.09 US 62/239,524;2015.11.20 US 62/257,791;1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人淋巴细胞活化基因3(LAG3)蛋白特异性结合，其中所述抗体或其抗原结合片段与LAG3的胞外域(SEQIDNO：588的氨基酸28-71)中所含的一个或多个氨基酸相互作用，所述相互作用通过氢/氘交换所确定。2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与SEQIDNO：589中所含的一个或多个氨基酸相互作用，所述相互作用通过氢/氘交换所确定。3.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与选自下组的氨基酸序列相互作用：(a)SEQIDNO:588的氨基酸28至69；(b)SEQIDNO:588的氨基酸28至71；(c)SEQIDNO:588的氨基酸31至52；以及(d)SEQIDNO:588的氨基酸32至69。4.根据权利要求2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与SEQIDNO：589中所含的至少10个氨基酸相互作用。5.根据权利要求2或4所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与SEQIDNO：589中所含的至少20个氨基酸相互作用。6.根据权利要求1-5中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与SEQIDNO：589所示的氨基酸序列相互作用。7.根据权利要求1-6中任意一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包含在重链可变区(HCVR)中含有的三个重链互补性决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和在轻链可变区(LCVR)中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中所述HCVR包含：(i)SEQIDNO：418所示的氨基酸序列，(ii)与SEQIDNO：418具有至少90％同一性的氨基酸序列，(iii)与SEQIDNO：418具有至少95％同一性的氨基酸序列；或者(iv)与SEQIDNO：418有不超过5个氨基酸取代的氨基酸序列；以及所述LCVR包含：(i)SEQIDNO：426所示的氨基酸序列，(ii)与SEQIDNO：426具有至少90％同一性的氨基酸序列，(iii)与SEQIDNO：426具有至少95％同一性的氨基酸序列；或者(iv)与SEQIDNO：426有不超过5个氨基酸取代的氨基酸序列。8.根据权利要求1-7中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段具有一个或多个选自下组的特性：(a)以小于约1.5nM的结合解离平衡常数(KD)结合单体人LAG3，所述KD由表面等离子体共振测定在25℃下测量；(b)以小于约2nM的KD结合单体人LAG3，所述KD由表面等离子体共振测定在37℃下测量；(c)以小于约20pM的KD结合二聚体人LAG3，所述KD由表面等离子体共振测定在25℃下测量；(d)以小于约90pM的KD结合二聚体人LAG3，所述KD由表面等离子体共振测定在37℃下测量；(e)以小于约2nM的EC50结合至表达hLAG3的细胞，所述EC50在流式细胞术测定中测量；(f)以小于约2.3nM的EC50结合至表达mfLAG3的细胞，所述EC50在流式细胞术测定中测量；(g)以小于约20nM的IC50阻断hLAG3与人II类MHC的结合，所述IC50通过细胞粘附测定所确定；(h)以小于约15nM的IC50阻断hLAG3与小鼠II类MHC的结合，所述IC50通过细胞粘附测定所确定；(i)对hLAG3与II类MHC的结合阻断超过90％，所述结合阻断通过细胞粘附测定所确定；(j)以小于约2.5nM的EC50挽救LAG3介导的T细胞活性抑制，所述EC50在荧光素酶报告测定中所确定；以及(k)以小于约1.2nM的EC50结合至活化的CD4+和CD8+T细胞，所述EC50在荧光素酶报告测定中所确定。9.根据权利要求7或8所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含HCVR，所述HCVR含有与SEQIDNO：418有不超过5个氨基酸取代的氨基酸序列。10.根据权利要求7-9中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含LCVR，所述LCVR含有与SEQIDNO：426有不超过5个氨基酸取代的氨基酸序列。11.根据权利要求7-9中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含HCVR和LCVR，所述HCVR含有与SEQIDNO：418有不超过5个氨基酸取代的氨基酸序列和所述LCVR含有与SEQIDNO：426有不超过5个氨基酸取代的氨基酸序列。12.根据权利要求7或8所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述HCDR1含有SEQIDNO：420所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：420有1个氨基酸不同的氨基酸序列，所述HCDR2含有SEQIDNO：422所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：422有1个氨基酸不同的氨基酸序列，所示HCDR3含有SEQIDNO：424所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：424有1个氨基酸不同的氨基酸序列，所示LCDR1含有SEQIDNO：428所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：428有1个氨基酸不同的氨基酸序列，所示LCDR2含有SEQIDNO：430所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：430有1个氨基酸不同的氨基酸序列，所示LCDR3含有SEQIDNO：432所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：432有1个氨基酸不同的氨基酸序列。13.根据权利要求7-12中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR，所述HCVR具有SEQIDNO：418所示的氨基酸序列。14.根据权利要求7-13中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含LCVR，所述LCVR具有SEQIDNO：426所示的氨基酸序列。15.根据权利要求7或8所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCD...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·乌尔曼，A·赫尔曼，E·约费，E·布罗瓦，G·瑟斯顿，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US