针对肺炎链球菌血清型2的合成疫苗制造技术

本发明专利技术涉及与肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)血清型2荚膜多糖有关的通式(I)的合成糖、其缀合物以及所述糖和缀合物用于在人和/或动物宿主中产生保护性免疫应答的用途。此外，通式(I)的合成糖可用作用于检测针对肺炎链球菌2型细菌的抗体的免疫学测定中的标志物。

Synthetic vaccine against Streptococcus pneumoniae serotype 2

The present invention relates to a synthetic sugar, a conjugate of the general formula (I) related to the serotype 2 capsule polysaccharide (I) of Streptococcus pneumoniae (pneumoniae), and the use of the sugar and conjugate to produce a protective immune response in human and / or animal hosts. In addition, synthetical sugars of general formula (I) can be used as markers in immunoassays to detect antibodies against Streptococcus pneumoniae type 2 bacteria.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对肺炎链球菌血清型2的合成疫苗专利
本专利技术涉及与肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)血清型2荚膜多糖有关的通式(I)的合成糖、其缀合物以及所述糖和缀合物用于在人和/或动物宿主中产生保护性免疫应答的用途。此外，通式(I)的合成糖可用作用于检测针对肺炎链球菌2型细菌的抗体的免疫学测定中的标志物。专利技术背景通常称为肺炎球菌或双球菌的肺炎链球菌是用荚膜多糖包封的人致病性革兰氏阳性菌。基于多糖胶囊的化学性质，肺炎球菌已被分类为90多种血清型。肺炎球菌是一种共生细菌，其无症状地定植于人的上呼吸道，并且导致肺炎、败血症、脑膜炎和中耳炎。肺炎球菌是全球<5岁以下儿童和老年人群中可接种疫苗可预防死亡的最常见原因。全球估计表明，5岁以下儿童死亡总数的18％是由于肺炎造成的。荚膜多糖是导致肺炎球菌发病的主要毒力因子之一。虽然常见的血清型在全世界范围内一致性地得以鉴定，但流行的荚膜类型的范围随着年龄、时间和地理区域的不同而变化。全球约有20种血清型与所有年龄组中>80％的侵袭性肺炎球菌病发生相关；13种最常见的血清型导致儿童中至少70-75％的侵袭性疾病。目前可用的肺炎球菌疫苗是基于荚膜多糖的，并且设计用于覆盖与侵袭性肺炎球菌病最频繁相关的血清型。可用的23-价多糖疫苗(23-PPV)对2岁以下的儿童无效，而7-价结合疫苗(7-PCV)对儿童有效，但血清型覆盖率有限。为增加血清型覆盖率，将含有来自肺炎链球菌1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F型荚膜多糖与蛋白质D(一种不可分型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)蛋白)、破伤风类毒素和白喉类毒素蛋白的缀合物的10-价结合疫苗以及含有来自肺炎链球菌1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F型荚膜多糖与白喉CRM197蛋白的缀合物的13-价结合疫苗已被许可使用。目前可用的结合疫苗对2岁以下的儿童非常有效，并且这些疫苗的应用已导致严重肺炎球菌疾病的显著减少。然而，新出现的抗生素耐药性和用非疫苗夹膜类型的血清型替换显示了未来的问题，并且需要解决疫苗领域需要改变的问题，而且其高成本降低了许多发展中国家的采购和可用性。国际专利申请WO2007116028A2公开了来自与载体蛋白缀合的不同肺炎链球菌血清型的荚膜糖的9价或更高价的肺炎链球菌免疫原性组合物，其中该组合物包含缀合的荚膜糖18C，其具有小于80、70、60、50、40、30、20、15或10％的O-乙酰化。该申请教导了血清型18C的荚膜糖的去O-乙酰化可能有利于将免疫应答集中在主链表位上，这可能有利于产生针对高度O-乙酰化的18C菌株和较差O-乙酰化的那些菌株的保护性免疫应答。国际专利申请WO2014097099A2公开了一种通过用稳定的硝酰基如四甲基哌啶-N-氧化物氧化糖并随后与载体蛋白的氨基偶联来制备包含与载体蛋白缀合的糖的糖缀合物的方法。所述糖可以是来源于肺炎链球菌的细菌荚膜多糖。Pozsgay描述了几种寡糖抗原的蛋白质缀合物(CurrentTopicsinMedicinalChemistry2008，8，p.126-140)。其中有肺炎链球菌血清型3、6B和14的糖缀合物。Joosten等人报告了血清型14的夹膜多糖的丁-、戊-和己糖片段的化学-酶合成(CarbohydrateResearch2003，338，p.2629-2651)。通过化学合成、随后酶半乳糖基化(galatosylation)合成直链中间体。最近的研究显示，SAARC(南亚区域合作联盟(TheSouthAsianAssociationforRegionalCooperation))国家出现了2型肺炎链球菌，这是一种目前商业上可用的疫苗尚未涵盖的血清型。肺炎链球菌2型在尼泊尔儿童中造成4.54％的侵袭性肺炎球菌病，而在孟加拉国儿童中8.9％为侵袭性肺炎球菌病(以医院为基础的研究)(生活在SAARC国家的儿童中肺炎链球菌血清型、疫苗覆盖率和抗菌药物敏感性模式的分布：系统评价(DistributionofSerotypes，VaccineCoverageandAntimicrobialSusceptibilityPatternofStreptococcusPneumoniaeinChildrenLivinginSAARCCountries：ASystematicReview)Jaiswal，N.等人PLOSONE2014，9)。进一步的基于人群的有关肺炎球菌血清型分布的研究证实2型肺炎链球菌是孟加拉国最普遍的血清型，其导致12.2％的侵袭性肺炎球菌病(亚洲肺炎球菌血清型分布当前趋势(CurrentTrendinPneumococcalSerotypeDistributioninAsia)，LeC.等人JVaccinesVaccin2011)。因此，高度需要提供针对2型肺炎链球菌的疫苗，所述肺炎链球菌2型是目前商业化疫苗未覆盖的血清型。本专利技术的目的在于提供与肺炎链球菌血清型2荚膜多糖有关的通式(I)的糖，以及通式(I)的糖与免疫原性载体例如载体蛋白的缀合物。通式(I)的糖，且特别是所述糖与免疫原性载体的缀合物能够在人和/或动物宿主中产生针对肺炎链球菌血清型2的保护性免疫应答。因此，提供了包含通式(I)的糖和/或其缀合物的用于免疫2型肺炎链球菌的疫苗组合物。此外，通式(I)的合成糖在用于检测针对肺炎链球菌血清型2细菌的抗体的免疫学测定中可用作标志物。通过独立权利要求的教导解决了本专利技术的目的。从本专利技术的从属权利要求、说明书附图和实施例中，本专利技术的其它有利特征、方面和细节是显而易见明显的。本专利技术的描述定义如本文所用的术语“接头”涵盖能够任选地通过结合至少一个互连分子将糖的还原端单糖与免疫原性载体或固体支持物连接的分子片段。因此，接头本身或与互连分子一起的功能在于建立、保持和/或桥接还原端单糖与免疫原性载体或固体支持物之间的特定距离。更具体地，接头的一端与还原-端单糖的端基异构中心的环外氧原子相连，而另一端通过氮原子与互连分子连接，或直接与免疫原性载体或固体支持物连接。如本文所用，术语“互连分子”是指包含官能团X和官能团Y的双官能团分子，其中官能团X能够与接头L上的末端氨基反应并且官能团Y能够与存在于免疫原性载体或固体支持物上的官能团反应。图1显示了商业上可用的互连分子的实例，但是并不将本专利技术使用的互连分子限制到本文显示的实例。如本文所用，术语“佐剂”是指免疫佐剂，即用于疫苗组合物中的物质，其通过增强对疫苗中所含的指定抗原的免疫应答而在抗原方面不与其之相关地修饰或增强所述疫苗的作用。对于本领域技术人员而言，传统上公认的佐剂实例包括：-含有矿物质的组合物，包括钙盐和铝盐(或其混合物)。钙盐包括磷酸钙。铝盐包括氢氧化物，磷酸盐，硫酸盐等，其盐呈任何适合的形式(例如凝胶，结晶，无定形物等)。对这些盐的吸附是优选的。也可以将含矿物质的组合物配制成金属盐颗粒。也可以使用称为氢氧化铝和磷酸铝的佐剂。本专利技术可以使用通常用作佐剂的任何“氢氧化物”或“磷酸盐”佐剂。称为“氢氧化铝”的佐剂典型地为羟基氧化铝盐，其通常为至少部分结晶的。称为“磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.通式(I)的糖V*‑Ux+3‑Ux+2‑Ux+1‑Ux‑O‑L‑NH2(I)其中x是选自1、2、3和4的整数；

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.17 EP 15200729.0;2016.04.28 EP 16167505.31.通式(I)的糖V*-Ux+3-Ux+2-Ux+1-Ux-O-L-NH2(I)其中x是选自1、2、3和4的整数；V*-表示H-、H-Ux-、H-Ux+1-Ux-、H-Ux+2-Ux+1-Ux-或H-Ux+3-Ux+2-Ux+1-Ux-；L表示接头；或其药学上可接受的盐。2.权利要求1的糖或其药学上可接受的盐，其中x表示1。3.权利要求1或2的糖或其药学上可接受的盐，其中4.权利要求1-3任一项的糖或其药学上可接受的盐，其中5.合成权利要求1的通式(I)的糖的方法，其中x表示1，V*-表示H-，且且该方法包括下列步骤：A)使通式(II)的二糖，其中P1-P3表示保护基，且LG1表示离去基，与通式(III)的二糖反应，其中P4-P8表示保护基，且L具有如权利要求1中所定义的含义，得到通式(IV)的四糖，其中P1-P8表示保护基；并且B)使通式(IV)的四糖进行选择性脱保护，得到通式(V)的四糖，其中P1-P4、P6-P8表示保护基，且L具有权利要求1中所定义的含义；并且C)使通式(V)的四糖与通式(VI)的二糖反应，其中P9和P10表示保护基，且LG2表示离去基，得到通式(VII)的己糖，其中P1-P4、P6-P10表示保护基，且L具有权利要求1中所定义的含义；并且D)除去通式(VII)的化合物上的保护基P1-P4、P6-P10。6.通式(V)的中间体其中P1...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·H·西伯戈尔，C·L·佩雷拉，C·安尼史，N·克汉，M·艾默迪，
申请(专利权)人：马普科技促进协会，
类型：发明
国别省市：德国,DE