雌马酚产生能力的测定方法技术

本发明专利技术提供一种测定被测验者是否具有雌马酚产生能力的方法。一种被测验者的雌马酚产生能力的测定方法，其特征在于，使用以下的a)～c)的3种引物组检测来自被测验者的肠内细菌的雌马酚转化酶基因。a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对；b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对；c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。

Determination of the production capacity of the female horse

The invention provides a method for determining whether the tested person has the ability to produce equol. A method for determining the ability of the testers to determine the capacity of the female is characterized by the determination of the 3 primer groups using the following a ~ C) to detect the female equine invertase gene from the enteric bacteria in the examinees. A) the oligonucleotides made up of the base sequences shown by the sequence number 1 and the oligonucleotides made up of the base sequences shown by the sequence number 2, or primer pairs composed of the complementary sequences corresponding to the sequence of the base sequence; b) the oligonucleotides composed of the base sequence shown by the sequence number 3 and the base order shown by the sequence number 4. A primer pair made up of oligonucleotides, or a primer pair composed of a complementary sequence corresponding to the sequence of the base sequence; c) the oligonucleotides made up of the base sequence shown by the sequence number 5 and the oligonucleotides made up of the nucleotide sequences shown by the sequence number 6 or 7, or by the interaction with the sequence of the base sequence. The primer pairs made up of the supplementation sequence.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】雌马酚产生能力的测定方法
本专利技术涉及测定被测验者的雌马酚产生能力的方法。
技术介绍
大豆食品中大量含有的异黄酮已知为对原因不明的身体不适等更年期障碍的改善、骨质疏松的预防、高脂血症、动脉硬化的预防、乳腺癌、前列腺癌的预防等有效果的功能性成分。据近年的研究已经明确，作为异黄酮之一的黄豆苷元(Daidzein)由体内的肠内细菌代谢为雌激素作用、抗氧化作用更强的雌马酚(Equol)(参照图1)，雌马酚作为在体内发挥上述作用的主要的有效成分之一而备受关注。在体内由黄豆苷元产生雌马酚并不是在所有人中同样进行，其产生能力存在个体差异，据报告，30～50％的人具有雌马酚产生能力。于是，大力进行了对具有雌马酚产生能力的肠内细菌(雌马酚产生菌)的探索，作为雌马酚产生菌，已报告有卵形拟杆菌、中间链球菌、星群链球菌、格氏乳球菌、Slackiaspp.TM-30株(斯莱克氏菌属TM-30株)、青春双歧杆菌TM-1株、短双歧杆菌JCM1273、费氏丙酸杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸乳球菌、屎肠球菌、干酪乳杆菌、唾液乳杆菌、SNU-Julong732、grampositivebacteriumdo03(革兰氏阳性细菌do03)、Slackiasp.YIT11861(斯莱克氏菌属YIT11861)(FERMBP-11231)(专利文献1)。如上所述，雌马酚具有各种作用，可期待对于乳腺癌、前列腺癌等性激素依赖性疾病的预防效果，因此，测定是否具有雌马酚产生能力是很重要的。作为测定被测验者是否具有雌马酚产生能力的方法，目前进行从血液中或者尿中检测、测定由雌马酚产生菌从黄豆苷元代谢而成的雌马酚的方法。然而，该方法存在由采血、尿检前的大豆摄取量的多少而导致血液中或者尿中的黄豆苷元量、以及雌马酚量发生变化的问题。特别是当被测验者不摄取大豆时，就无法从血液中或者尿中检测出雌马酚，因此，存在尽管具有雌马酚产生菌，但错误地判断为不具有雌马酚产生能力这样的危险性。另一方面，考虑根据是否存在雌马酚产生菌来测定是否具有雌马酚产生能力的方法，但是，能够正确检测所有雌马酚产生菌的存在的方法尚未确立，没有关于该方法的报道。现有技术文献专利文献专利文献1：国际专利公开第2010/098103号
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题本专利技术涉及提供一种测定被测验者是否具有雌马酚产生能力的方法。用于解决技术问题的方法本专利技术的专利技术人鉴于上述技术问题进行了研究，结果发现，通过使用特定的3种引物组检测来自被测验者的肠内细菌的四氢黄豆苷元(THD)－雌马酚转化酶基因，能够以高灵敏度测定被测验者是否具有雌马酚产生能力。本专利技术为以下的1)～7)所涉及的专利技术。1)一种被测验者的雌马酚产生能力的测定方法，其特征在于，使用以下的a)～c)的3种引物组检测来自被测验者的肠内细菌的THD－雌马酚转化酶基因。a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对2)如1)所记载的方法，其中，使用来自被测验者的粪便检测THD－雌马酚转化酶基因。3)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。4)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。5)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。6)以下的a)～c)的3种引物组。a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对7)一种用于测定被测验者的雌马酚产生能力的试剂盒，其包括以下的a)～c)的3种引物组。a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对专利技术的效果根据本专利技术的方法，无论是否摄取大豆等含有黄豆苷元的食品，都能够以良好的灵敏度测定被测验者是否保有雌马酚产生菌、即被测验者的雌马酚产生能力。附图说明图1是表示由黄豆苷元的代谢产生雌马酚的路径的图。图2是表示各引物的定量性的图表(标准曲线)。左：A型基因群检测用引物(SL-F2/SL-R2)、右：B型基因群检测用引物(Eght-F2/Egkm-R1)图3是表示各引物的定量性的图表(标准曲线)。左：C型基因群－1检测用引物(Adht-F1/Adht-R1)、右：C型基因群－2检测用引物(Adht-F1/Adkm-R1)具体实施方式在本专利技术的被测验者的雌马酚产生能力的测定方法中，使用以下的a)～c)的3种引物组检测来自被测验者的肠内细菌的THD－雌马酚转化酶基因。其中，该检测中包括定性的和定量的检测，定量的检测中包括THD－雌马酚转化酶基因数(拷贝数)的定量。a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对a)～c)所示的3种引物组均为用于扩增编码雌马酚转化酶E3(下文中称为“THD－雌马酚转化酶”)的基因(下文中称为“THD－雌马酚转化酶基因”)的引物对，上述雌马酚转化酶E3是在黄豆苷元代谢中参与由顺式/反式－四氢黄豆苷元(THD)向雌马酚的转化反应(参照图1)的酶。THD－雌马酚转化酶存在若干种同源物，因此THD－雌马酚转化酶基因也存在若干种不同的序列。本专利技术的专利技术人发现，THD－雌马酚转化酶基因根据其碱基序列的相同性的差异而分类成3种类型(基因群。是指后述的A型基因群、B型基因群、C型基因群)。此外，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种被测验者的雌马酚产生能力的测定方法，其特征在于：使用以下的a)～c)的3种引物组检测来自被测验者的肠内细菌的THD－雌马酚转化酶基因，a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对；b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对；c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.29 JP 2015-2127681.一种被测验者的雌马酚产生能力的测定方法，其特征在于：使用以下的a)～c)的3种引物组检测来自被测验者的肠内细菌的THD－雌马酚转化酶基因，a)由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对；b)由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对；c)由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号6或7所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：使用来自被测验者的粪便检测THD－雌马酚转化酶基因。3.由序列号1所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号2所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。4.由序列号3所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由序列号4所示的碱基序列构成的寡核苷酸所构成的引物对、或者由与该碱基序列对应的互补序列构成的引物对。5.由序列号5所示的碱基序列构成的寡核苷酸和由...

【专利技术属性】
技术研发人员：辻浩和，森山薰，野本康二，
申请(专利权)人：株式会社益力多本社，
类型：发明
国别省市：日本,JP