经修饰的酵母-Brachyury免疫治疗组合物制造技术

公开了改进的基于酵母的免疫治疗组合物，其包含经修饰的Brachyury抗原，以及预防和/或治疗以Brachyury的表达或过表达为特征的癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的酵母-Brachyury免疫治疗组合物对相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2015年8月3日提交的美国临时申请流水号62/200,497的优先权权益。所述2015年8月3日提交的美国临时申请流水号62/200,497的全部公开内容通过引用并入本文。政府的权利本专利技术是在执行与卫生与人类服务部的机构国立卫生研究院之间的合作研究和开发协议产生的。美国政府对本专利技术具有某些权利。关于联合研究协议的声明本专利技术是由2008年5月8日执行的合作研究和开发协议的缔约方作出的。合作研究和开发协议的缔约方为全球免疫股份有限公司(GlobeImmune,Inc.)和美国卫生与人类服务部，其由国家癌症研究所，国立卫生研究院的研究所，中心或分部代表。对序列表的引用本申请含有通过EFS-Web以文本文件电子提交的序列表。命名为“7797-3-PCT_ST25”的文本文件具有50KB的大小，于2016年7月26日记录。该文本文件包含的信息根据37CFR§1.52(e)(5)通过引用全部并入本文。专利
本专利技术一般地涉及改进的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，和用于预防和/或治疗以Brachyury的表达或过表达为特征的癌症的方法，以及用于改进酵母-Brachyury免疫治疗组合物的制造和使用的方法。专利技术背景Brachyury，又称为“T”，是一种中胚层转录因子和T-box基因复合体的成员。编码Brachyury的基因(在人中表示为T基因或Brachyury基因)最初是由Nadine在1927年通过小鼠中影响杂合动物中尾长度和骶椎的突变鉴定到的。Brachyury基因在1990年由Hermann及其同事在小鼠中克隆(Herrmannetal.,1990,Nature343:617-622)，在1996年由Edwards及其同事在人中克隆(Edwardsetal.,1996,GenomeRes.6:226-223)，他们还描述了推断的人Brachyury氨基酸序列。作为T-box家族转录因子的成员，Brachyury含有高度保守的DNA结合结构域基序，被称为“T-box”或T-结构域，其结合回文共有序列。与其它T-box蛋白一样，Brachyury被证实在早期发育中发挥作用，且对于脊椎动物中后部中胚层的形成和分化以及中轴发育非常关键(参见例如，Wilkinsonetal.,1990,Nature343(6259):657–659)；Beddingtonetal.,1992,Development(Suppl.):157-165；Schulte-Merkeretal.,1994,Development120:1009-1015；KispertandHerrmann,1994,Dev.Biol.161:179-193；Showelletal.,2004,DevDyn229:201-218)。近年，Palena和同事已经证明了Brachyury在多种人类肿瘤组织和癌细胞系中表达，并且显示了Brachyury的肽可以用于在正常供体和癌症患者中生成Brachyury特异性T细胞系(Palenaetal.,2007,Clin.CancerRes.13(8):2471-2478)。Fernando等人的研究显示，Brachyury促进人肿瘤细胞中的上皮细胞-间充质转化(EMT)，赋予肿瘤细胞以间充质表型，以及迁移和侵袭能力，同时减弱肿瘤细胞周期进展(Fernandoetal.,2010,J.Clin.Invest.120(2):533-544)。因此，Brachyury参与癌症的转移性进展。癌症在全世界是领先的致死原因，开发有效的癌症疗法一直是最活跃的研究和临床开发领域之一。虽然已提出了各种癌症治疗和预防的创新方法，但许多癌症仍然有高的死亡率，并且可以难以治疗或者对传统疗法相对不响应。与Brachyury表达相关的癌症可见于包括乳房、小肠、胃、肾、膀胱、子宫、卵巢、睾丸、肺、结肠、骨(包括脊索瘤)和前列腺的多种组织，且包括转移性和晚期癌症。此外，Brachyury在B细胞起源的肿瘤中表达，如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、Epstein-Barr病毒转化的B细胞、伯基特氏(Burkitt’s)和霍奇金淋巴瘤。因此，Brachyury似乎在许多人类癌症中有作用。虽然Brachyury曾被提议作为癌症免疫疗法的靶标(参见例如，Palenaetal.,同前，Fernandoetal.，同前和WO2008/106551)，由于其是一种相对较新的癌症靶标，本领域仍然需要能够有效地治疗和/或预防与Brachyury表达或过表达关联的癌症的新的免疫治疗产品。专利技术概述本专利技术的一个实施方案涉及酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其包含：a)酵母；和b)由所述酵母表达的至少一种经修饰的Brachyury抗原，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置42至229的任意一个或多个处的氨基酸的缺失或取代，其中所述Brachyury抗原相比于所述野生型Brachyury具有被破坏的DNA结合位点。在一方面，所述经修饰的Brachyury抗原相比于野生型Brachyury具有被破坏的DNA结合活性。在另一方面，所述酵母相比于表达野生型Brachyury的酵母具有降低的絮凝表型。在一方面，所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置66至217的任意一个或多个处的氨基酸缺失或取代。在一方面，所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置198至222的任意一个或多个处的氨基酸缺失或取代。在一方面，所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基的缺失或取代，所述氨基酸残基选自Lys66、Arg69、Arg70、Arg101、Lys103、Lys147、Asn150、Lys151、Ser162、Thr196、Ala197、Tyr198、Ile208、Asn211、Pro212、Phe213、Ala214、Lys215、Ala216和/或Phe217。在一方面，所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的至少1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸残基的缺失或取代，所述氨基酸残基选自Met87、Pro127、Asp128、Ser129、Pro130、Asn131、Phe132和/或Val175。在另一方面，所述修饰是缺失。在再一方面，所述经修饰的Brachyury抗原通过1、2、3、4、5、6、7、8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.酵母‑Brachyury免疫治疗组合物，其中所述免疫治疗组合物包含:a)酵母；b)由所述酵母表达的至少一种经修饰的Brachyury抗原，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置42至229的任意一个或多个处的氨基酸缺失或取代，其中所述Brachyury抗原相比于所述野生型Brachyury具有被破坏的DNA结合位点。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.03 US 62/200,4971.酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述免疫治疗组合物包含:a)酵母；b)由所述酵母表达的至少一种经修饰的Brachyury抗原，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置42至229的任意一个或多个处的氨基酸缺失或取代，其中所述Brachyury抗原相比于所述野生型Brachyury具有被破坏的DNA结合位点。2.权利要求1的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原相比于所述野生型Brachyury具有被破坏的DNA结合活性。3.权利要求1的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述酵母相比于表达野生型Brachyury的酵母具有降低的絮凝表型。4.权利要求1-3中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置66至217的任意一个或多个处的氨基酸缺失或取代。5.权利要求1-3中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的位置198至222的任意一个或多个处的氨基酸缺失或取代。6.权利要求1-3中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基的缺失或取代，所述氨基酸残基选自Lys66、Arg69、Arg70、Arg101、Lys103、Lys147、Asn150、Lys151、Ser162、Thr196、Ala197、Tyr198、Ile208、Asn211、Pro212、Phe213、Ala214、Lys215、Ala216和/或Phe217。7.权利要求1-3中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有通过至少一个修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同的氨基酸序列，所述修饰选自野生型Brachyury的至少1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸残基的缺失或取代，所述氨基酸残基选自Met87、Pro127、Asp128、Ser129、Pro130、Asn131、Phe132和/或Val175。8.权利要求1-7中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述修饰是缺失。9.权利要求1-7中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原通过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个所述修饰与野生型Brachyury氨基酸序列不同。10.权利要求1-7中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有以下氨基酸序列，所述氨基酸序列通过野生型Brachyury的位置66和217之间的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个连续氨基酸的缺失与野生型Brachyury氨基酸序列不同。11.权利要求1-7中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有以下氨基酸序列，所述氨基酸序列通过野生型Brachyury的位置198和222之间的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个连续氨基酸的缺失与野生型Brachyury氨基酸序列不同。12.权利要求1-7中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有以下氨基酸序列，所述氨基酸序列通过野生型Brachyury的位置198-222的缺失与野生型Brachyury氨基酸序列不同。13.权利要求1-7中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有还包含至少一个激动性T细胞表位的氨基酸序列。14.权利要求13的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述激动性表位具有SEQIDNO:6的氨基酸序列。15.权利要求1-14中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有与SEQIDNO:10或SEQIDNO:13至少80％相同的氨基酸序列。16.权利要求1-14中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有与SEQIDNO:10或SEQIDNO:13至少90％相同的氨基酸序列。17.权利要求1-14中任一项的酵母-Brachyury免疫治疗组合物，其中所述经修饰的Brachyury抗原具有与SEQIDNO:10或SEQIDNO:13至少95％相同的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：TH金，Z郭，J施洛姆，C帕莱纳，
申请(专利权)人：全球免疫股份有限公司，美利坚合众国，由健康及人类服务部部长代表，
类型：发明
国别省市：美国,US