可扩大的灵长类动物多能干细胞聚集体悬浮培养物及其分化制造技术

本发明专利技术涉及从未分化的或分化的胚胎干细胞单细胞悬浮液制备未分化的或分化的胚胎干细胞聚集体悬浮培养物的方法，以及其分化的方法。

Expanded primate pluripotent stem cell suspension cultures and their differentiation

The present invention relates to a method for the preparation of undifferentiated or differentiated embryonic stem cell aggregate suspension cultures from a single cell suspension of undifferentiated or differentiated embryonic stem cells and a method for its differentiation.

【技术实现步骤摘要】
可扩大的灵长类动物多能干细胞聚集体悬浮培养物及其分化关于联邦政府赞助的研究或开发的声明本专利技术研发期间所进行的部分工作利用了来自国立卫生研究院批准号为5R24RR021313-05的美国政府基金。美国政府享有本专利技术的某些权利。专利
本专利技术涉及实质上无血清和饲养层的悬浮细胞聚集体组合物，以及用于分化该细胞聚集体悬浮液的方法。专利技术背景迄今为止，对于哺乳动物多能细胞(pluripotentcell)如本文所描述的人胚胎干细胞(hESC)，还没有提供大规模生产方法(“扩大的”)的有效系统。为了体外维持hESC处于未分化状态，一般将hESC维持在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上，并且通过人工机械解离(例如，显微解离)和转移单独的克隆碎片(pieces)来传代。这些方法对于不需要大规模生产未分化的hESC或分化的hESC的探讨性研究是足够的，基因靶向、药物开发、体外毒理学、将来的临床应用需要改进的方法以用于稳定地大规模扩增hESC，包括酶促传代。可以实施hESC的酶促扩增，但这些方法具有技术缺陷，因为hESC的存活依赖于细胞-细胞相互作用以及旁分泌信号和自分泌信号。因此，与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单腔室滚瓶，其包含悬浮于生理上可接受的培养基中的灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体，其中所述灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体来自通过以约3rpm至约30rpm的速度旋转搅动的灵长类动物多能干细胞的单细胞悬液。

【技术特征摘要】
2012.11.08 US 13/672,6881.单腔室滚瓶，其包含悬浮于生理上可接受的培养基中的灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体，其中所述灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体来自通过以约3rpm至约30rpm的速度旋转搅动的灵长类动物多能干细胞的单细胞悬液。2.根据权利要求1所述的单腔室滚瓶，其中所述灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体在所述滚瓶中形成。3.根据权利要求1所述的单腔室滚瓶，其中所述灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体基本上是定形内胚层谱系细胞聚集体。4.根据权利要求3所述的单腔室滚瓶，其中所述定形内胚层谱系细胞聚集体基本上是胰腺内胚层细胞或基本上是定形内胚层细胞。5.根据权利要求3所述的单腔室滚瓶，其中所述定形内胚层谱系细胞聚集体表达选自以下的至少一种标志物：Sox17,HNF3β,HNF1β,PDX1,NKX6.1,PTF1A,NGN3和NKX2.2。6.根据权利要求3所述的单腔室滚瓶，其中所述定形内胚层谱系细胞聚集体不显著表达PAX6,SOX7或ZIC1。7.根据权利要求1所述的单腔室滚瓶，其还包含有效量的视黄酸受体(RAR)激动剂。8.制备包含灵长类动物多能细胞衍生的悬浮细胞聚集体的单腔室滚瓶的方法，所述方法包括：(a)提供包含灵长类动物多能细胞聚集体的单腔室滚瓶，所述灵长类动物多能细胞聚集体来自灵长类动物多能干细胞的单细胞悬浮液；以及(b)将所述灵长类动物多能细胞聚集体与分化因子接触，从而得到包含灵长类动物多能细胞衍生的悬浮细胞聚集体的滚瓶，其中通过以约3rpm至约30rpm的速度旋转来搅动所述灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述灵长类动物多能细胞衍生的细胞聚集体表达选自以下的至少一种标志物：Sox17,HNF3β,HNF1β,PDX1,NKX6.1,PTF1A,NGN3...

【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯·C·斯库尔兹，
申请(专利权)人：韦尔赛特公司，
类型：发明
国别省市：美国,US