一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒，所述检测试剂盒包括抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体预包被酶标板、样品稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶结合物、洗涤液、底物显色液和终止液。抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体是通过以下方法制备的：首先用RT‑PCR扩增EgAgB8/2基因cDNA，克隆EgAgB8/2基因，构建原核表达载体pET‑EgAgB8/2，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，用IPTG诱导原核表达载体表达，离心收集菌体，用细菌裂解液溶解后超声破碎，离心收集上清，用Ni‑NTA胶进行纯化，用纯化的EgAgB8/2蛋白免疫BALB/c小鼠，获得能稳定分泌抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，选择优异的单抗，生产抗体并进行纯化。本发明专利技术公开的试剂盒能够用于动物细粒棘球蚴病抗原的定性检测，具有抗体来源稳定、特异性好、灵敏度高、重复性好的优点。

ELISA antigen detection kit for animal echinococcosis

The present invention discloses an ELISA antigen detection kit for echinococcosis of animals. The detection kit includes a monoclonal antibody prepack, a sample diluent, a positive control solution, a negative control liquid, an enzyme conjugate, a washing liquid, a substrate chromogenic solution and a terminating solution for the monoclonal antibody against the EgAgB8/2 protein. The monoclonal antibodies against EgAgB8/2 protein were prepared by the following methods: first, the EgAgB8/2 gene cDNA was amplified by RT PCR, and the EgAgB8/2 gene was cloned and the prokaryotic expression vector pET EgAgB8/2 was constructed and expressed in the Escherichia coli BL21 (DE3). It was used for IPTG induction of the prokaryotic expression vector and centrifugally collected the mycelium and dissolved in the bacterial lysate. After ultrasound breakage, centrifuge collection and purification, purified by Ni NTA glue, immunized BALB/c mice with purified EgAgB8/2 protein to obtain monoclonal antibody hybridoma cell lines that secrete anti EgAgB8/2 protein stable, and select excellent monoclonal antibodies, produce antibodies and purify them. The kit disclosed by the invention can be used for the qualitative detection of the antigen of echinococcosis of animals, and has the advantages of stable antibody source, good specificity, high sensitivity and good repeatability.

【技术实现步骤摘要】
一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒
本专利技术属于基因工程技术和诊断试剂领域，具体涉及一种动物细粒棘球蚴ELISA抗原检测试剂盒。
技术介绍
棘球蚴病又称包虫病是多发性人兽共患寄生虫病，呈世界性分布，是危害我国西部地区发展和人民健康的最严重的寄生虫病。棘球绦虫的成虫寄生于食肉类动物犬、狐狸、狼等的小肠上段，利用顶突小钩及吸盘固定于肠绒毛基部隐窝内。中间宿主为偶蹄类如羊、牛、骆驼、鹿、鼠、某些啮齿类等以及灵长类(包括人)动物。犬、狐狸和狼等动物是棘球蚴病的主要传播者。全世界流行的棘球绦虫有5中，我国有其中3种流行，分别为细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫和石渠棘球绦虫，细粒棘球绦虫引起细粒棘球蚴病，严重危害人和动物的健康。目前，棘球蚴病常用的血清学诊断抗原是棘球蚴囊液,由于其成分复杂,与其他蠕虫病患者血清有严重的交叉反应和非特异性反应,因此假阳性问题难以克服,诊断特异性不理想且来源有限、不稳定。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒，能够用于动物细粒棘球蚴病抗原的定性检测，具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点。抗原B(AgB)被公本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒,其特征在于：所述检测试剂盒包括抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体预包被酶标板、样品稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶结合物、洗涤液、底物显色液和终止液。

【技术特征摘要】
1.一种动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒,其特征在于：所述检测试剂盒包括抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体预包被酶标板、样品稀释液、阳性对照液、阴性对照液、酶结合物、洗涤液、底物显色液和终止液。2.根据权利要求1所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒,其特征在于：所述抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体是通过以下方法制备的：首先用RT-PCR扩增EgAgB8/2基因cDNA，克隆EgAgB8/2基因，构建原核表达载体pET-EgAgB8/2，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，用IPTG诱导原核表达载体表达，离心收集菌体，用细菌裂解液溶解后超声破碎，离心收集上清，用Ni-NTA胶进行纯化，用纯化的EgAgB8/2蛋白免疫BALB/c小鼠，获得能稳定分泌抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，选择优异的单抗，生产抗体并进行纯化。3.根据权利要求2所述的动物细粒棘球蚴病ELISA抗原检测试剂盒,其特征在于：将纯化的抗EgAgB8/2蛋白的单克隆抗体用pH8-10的碳酸盐缓冲液稀释至8-12ug/ml，包被酶标板,每孔60-120ul/孔，3-8℃过夜,用洗涤液洗2-5次，每次3-5min，甩干，加入含2-8％脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液，每孔100-300ul/孔，并置于30-40℃温箱内封闭0.5-1.5h，取出甩干，洗涤液洗涤2-...

【专利技术属性】
技术研发人员：朵红，付永，何轶群，沈秀英，郭志宏，彭毛，李伟，
申请(专利权)人：青海省畜牧兽医科学院，
类型：发明
国别省市：青海,63