H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测试剂盒，包括分别单独装有各C1022T检测引物和各内控基因检测引物的试管，其中，所述C1022T检测引物包括如下序列的组分：C1022T检测引物一：5′‑GCAGACCTGT TCCGCACGTC‑3′；C1022T检测引物二：5′‑CAGACCTGTT CCGCACGAT‑3′；C1022T检测引物三：5′‑CACTCACAAC TATATTACA‑3′；所述内控基因检测引物包括如下序列的组分：内控引物一：5’‑AGCAAGCAGG AGTATGACG‑3'；内控引物二：5'‑GAAAGGGTGT AACGCAACT‑3'。与现有技术相比，本发明专利技术在检测新鲜血液等样本的SLC22A1基因突变时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。

H2 receptor blocking drug efficacy related gene SLC22A1 polymorphism detection kit

The present invention relates to a H2 receptor blocking drug effect related gene SLC22A1 polymorphism detection kit, including a test tube with separate C1022T detection primers and primers for each internal control gene, in which the C1022T detection primers include the components of the following sequence: a C1022T detection primer 1: 5 'GCAGACCTGT TCCGCACGTC TCCGCACGTC 3 '; C1022T detection primers two: 5' CAGACCTGTT CCGCACGAT 3 '; C1022T detection primers three: 5' CACTCACAAC TATATTACA 3 '; the internal controlled gene detection primers include the components of the following sequence: internal control primers: 5' AGCAAGCAGG AGTATGACG 3'; internal control two: 5' GAAAGGGTGT AACGCAACT GAAAGGGTGT AACGCAACT. Compared with the prior art, the invention has the advantages of high sensitivity, high specificity, and short time consumption in detecting the mutation of SLC22A1 gene in fresh blood and other samples.

【技术实现步骤摘要】
H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测试剂盒
本专利技术属于生物

，涉及一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测的引物组合物、试剂盒和方法。
技术介绍
H2受体阻断药物包括西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁等，具有对抗组织胺刺激胃细胞壁分泌盐酸的作用，广泛应用于消化性溃疡。雷尼替丁口服吸收迅速但不完全，生物利用度仅为50％。而在雷尼替丁的转运过程中，有机阳离子转运体(OCT1)起到了关键的作用。SLC22A1是OCT1的编码基因，其1022C>T基因多态性在人体内能显著影响雷尼替丁的药代动力学过程。研究发现，携带SLC22A1突变杂合子以及突变纯合子的人群对雷尼替丁的生物利用度较野生型人群更为高效，尤其是突变纯合子携带者。因此，SLC22A1突变杂合子以及突变纯合子的检出在医生对预测个体的H2受体阻断药物的利用率进而针对性用药具有指导性作用。但是，目前仍缺乏快速有效的检测SLC22A1突变杂合子以及突变纯合子有关突变点的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测的引物组合物、试剂盒和方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：本专利技术的目的之一在于提供一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测的引物组合物，包括C1022T检测引物和内控基因检测引物，其中，所述C1022T检测引物包括如下序列的组分：C1022T检测引物一：5′-GCAGACCTGTTCCGCACGTC-3′；C1022T检测引物二：5′-CAGACCTGTTCCGCACGAT-3′；C1022T检测引物三：5′-CACTCACAACTATATTACA-3′；所述内控基因检测引物包括如下序列的组分：内控引物一：5’-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3'；内控引物二：5'-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3'。本专利技术的目的之二在于提供一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测试剂盒，包括分别单独装有各C1022T检测引物和各内控基因检测引物的试管，其中，所述C1022T检测引物包括如下序列的组分：C1022T检测引物一：5′-GCAGACCTGTTCCGCACGTC-3′；C1022T检测引物二：5′-CAGACCTGTTCCGCACGAT-3′；C1022T检测引物三：5′-CACTCACAACTATATTACA-3′；所述内控基因检测引物包括如下序列的组分：内控引物一：5’-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3'；内控引物二：5'-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3'。在本专利技术的一种优选的实施方式中，所述的试剂盒中还包括分别采用试管盛装的蒸馏水、PCR反应预混液、阳性质控SLC22A1基因C1022T突变质粒和阳性质控SLC22A1基因C1022T野生质粒。在本专利技术的一种更优选的实施方式中，所述的阳性质控SLC22A1基因C1022T突变质粒通过以下方法提取得到：采用PCR技术，获取SLC22A1基因C1022T位点的突变型片段，然后，将突变型片段与pEASY-BluntCloningKit载体连接，转化，再转入大肠杆菌感受态细胞培养，最后，提取质粒，即得到。在本专利技术的一种更优选的实施方式中，所述的阳性质控SLC22A1基因C1022T野生质粒通过以下方法提取得到：采用PCR技术，获取SLC22A1基因C1022T位点的野生型片段，然后，将野生型片段与pEASY-BluntCloningKit载体连接，转化，再转入大肠杆菌感受态细胞培养，最后，提取质粒，即得到。在本专利技术的一种更优选的实施方式中，所述的试剂盒采用挡板分隔为两个独立腔体，每个腔体中安装有海绵，在海绵上还加工有用于放置试管的容器孔，所述试剂盒的两个腔体中，其中一个腔体中放置装有蒸馏水与PCR反应预混液的试管，另一个腔体中放置装有各阳性质控质粒、C1022T检测引物和内控基因检测引物的试管。在本专利技术的一种更进一步优选的实施方式中，所述的容器孔在试剂盒内平行排列布置。本专利技术在具体检测过程中，即利用ARMS-PCR方法，如果引物的3′端碱基与模板碱基不互补，则用一般耐热DNA聚合酶无法延伸。因此根据已知点突变设计3条引物(见引物设计)，其3′端碱基分别与突变和正常的模板碱基互补，从而将有某种点突变的模板与正常模板区分开来。本专利技术的目的之三在于提供了一种检测H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1的C1022T突变的方法，其具体包括以下步骤：(1)样本处理和核酸提取：利用商品化的DNA提取试剂盒处理样本，所提DNA需用紫外分光光度计测定浓度和纯度，其DNAOD260/OD280的值应在1.8～2.0，浓度应在5～50ng/μL之间，样本DNA质量不合格者不得用于检测，建议低于5ng/μL者重新进行核酸提取，高于50ng/μL者予以适当稀释至规定的浓度范围，提取完的DNA建议立即进行检测，否则请于-20℃以下保存，保存时间不要超过6个月。试剂盒质控品使用前室温融化，涡旋振荡10秒，2000rpm离心15秒待用。(2)PCR反应体系的构建：提前30分钟将各试剂取出，室温融化，涡旋振荡10s，2000rpm离心15秒待用，然后，将PCR反应预混液、对应的引物和水混合均匀后配制得到对应检测位点的反应混合液，然后将其置于PCR反应管中。(3)然后将已处理样本、阳性质控品和阴性质控品加入PCR反应管中，盖紧管盖(避免气泡产生)，离心后将管壁上液体全部甩至管底，然后立即进行PCR扩增反应。(4)设置PCR扩增反应程序，其依次分为预变性、变性和退火、信号采集三个阶段，其中，预变性阶段的温度设置为95℃，处理时间为15min，循环次数为1次，变性阶段为在95℃下处理10s，退火、信号采集阶段则在60℃下保持30s，且变性与信号采集阶段循环40次。(5)利用ARMS引物区分野生型和突变型基因序列，通过SYBRGreen染料和扩增产物的杂交，检测反应体系的SYBR荧光强度来判定检测结果。SYBR为检测信号，以SYBR信号达到设定的阈值所需的的循环次数Ct值作为判断标准，Ct值小于32为阳性，Ct值大于35为阴性，Ct值介于32到35之间为弱阳性。与现有技术相比，本专利技术具有以下特点：(1)本专利技术了提供了用于检测新鲜血液等样本中SLC22A1基因的C1022T突变检出的具有特异性的引物组合物，在具体检测时具有敏感性高、特异性强、耗时短等优点。(2)本专利技术的试剂盒结构设计简单，使用方便，分区设计使得检测过程不易受污染，检测结果更为精确。(3)检测方法耗时短，敏感性高、特异性强。附图说明图1为本专利技术的试剂盒的结构示意图；图2为本专利技术的基因多态性检测结果图；图中标记说明：1-盒体，2-海绵，3-挡板，4-装有蒸馏水的试管，5-装有PCR反应预混液的试管，6-装有阳性质控SLC22A1基因C1022T突变质粒的试管，7-阳性质控SLC22A1基因C1022T野生质粒的试管，8-装有内控基因检测引物的试管，9-装有SLC22A1基因检测引物的试管，10-容器孔。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测的引物组合物，其特征在于，包括C1022T检测引物和内控基因检测引物，其中，所述C1022T检测引物包括如下序列的组分：C1022T检测引物一：5′‑GCAGACCTGT TCCGCACGTC‑3′；C1022T检测引物二：5′‑CAGACCTGTT CCGCACGAT‑3′；C1022T检测引物三：5′‑CACTCACAAC TATATTACA‑3′；所述内控基因检测引物包括如下序列的组分：内控引物一：5’‑AGCAAGCAGG AGTATGACG‑3'；内控引物二：5'‑GAAAGGGTGT AACGCAACT‑3'。

【技术特征摘要】
1.一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测的引物组合物，其特征在于，包括C1022T检测引物和内控基因检测引物，其中，所述C1022T检测引物包括如下序列的组分：C1022T检测引物一：5′-GCAGACCTGTTCCGCACGTC-3′；C1022T检测引物二：5′-CAGACCTGTTCCGCACGAT-3′；C1022T检测引物三：5′-CACTCACAACTATATTACA-3′；所述内控基因检测引物包括如下序列的组分：内控引物一：5’-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3'；内控引物二：5'-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3'。2.一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测试剂盒，其特征在于，包括分别单独装有各C1022T检测引物和各内控基因检测引物的试管，其中，所述C1022T检测引物包括如下序列的组分：C1022T检测引物一：5′-GCAGACCTGTTCCGCACGTC-3′；C1022T检测引物二：5′-CAGACCTGTTCCGCACGAT-3′；C1022T检测引物三：5′-CACTCACAACTATATTACA-3′；所述内控基因检测引物包括如下序列的组分：内控引物一：5’-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3'；内控引物二：5'-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3'。3.根据权利要求2所述的一种H2受体阻断药物疗效相关基因SLC22A1多态性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括分别采用试管盛装的蒸馏水、PCR反应预混液...

【专利技术属性】
技术研发人员：田晓丽，
申请(专利权)人：上海美丽人生医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31