检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物、方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了用于检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物、检测方法及试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒根据检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的高度保守的特异性序列设计三重PCR引物，建立了单管、同步检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的检测方法。本发明专利技术试剂盒具有快速简便、特异性强、敏感性高、可靠性好的特点，可以同时进行大批量的样本分析，一次反应便能鉴别猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌三种临床症状相似的病原菌，能够精准的鉴别诊断出猪感染的病因，有利于对症下病实施正确的治疗方案，具有很好的应用前景。

Three PCR primers, methods and kits for detection of Streptococcus suis type 2, Pasteurella multocida and Haemophilus Haemophilus of pigs

The invention provides triple PCR primers, detection methods and kits for detecting Streptococcus suis type 2, Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis. The kit designed three PCR primers based on the highly conservative specific sequence of detecting Streptococcus suis 2, porcine Pasteurella pasteuricus and Haemophilus porcine, and established a single tube and synchronous detection method for detecting Streptococcus suis 2, porcine Pasteurella pasteurella and Haemophilus porcine. The kit has the characteristics of quick, simple, strong specificity, high sensitivity and good reliability. It can be used in large quantities of sample analysis at the same time. One reaction can identify the three clinical symptoms similar to the Streptococcus suis type 2, porcine Pasteurella pasteurella and Haemophilus porcine, and can accurately identify the pig. The etiology of infection is conducive to the correct treatment of symptomatic diseases, and has a good application prospect.

【技术实现步骤摘要】
检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物、方法及试剂盒
本专利技术属于动物疫病检测
，具体涉及一种用于检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物、检测方法及试剂盒。
技术介绍
猪链球菌2型：猪链球菌(Streptococcussuis，SS)属于革兰氏阳性菌，需氧或兼性厌氧，形态呈球状或卵圆状，常成对或以短链形式排列，无芽抱，可形成荚膜。根据其荚膜多糖(CPS)，将SS分为35个血清型，即1/2型和1～34型，其中猪链球菌2型是毒力最强、流行最广泛的血清型。主要引起猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、脑炎、流产、多浆膜炎、支气管肺炎、化脓性淋巴结炎型和呼吸道疾病等。临床上常突然发病，体温升高至40℃～43℃，呼吸急促，从鼻孔中流出浆液性分泌物，结膜潮红，流泪，耳尖、颈部、腹下及四肢末端皮肤发绀或有出血点等急性败血型表现，多在2～3d内死亡。短期内波及到大片地区，发病率和死亡率都很高。猪多杀性巴氏杆菌：猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida，Pm)为革兰氏阴性菌，属于巴氏杆菌科(Pasteurellaceae)巴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物，其特征在于，所述引物根据检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的高度保守的特异性序列设计三重PCR引物，其中，猪链球菌2型的检测引物，由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物组成；猪多杀性巴氏杆菌的检测引物，由SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列的反向引物组成，检测副猪嗜血杆菌的检测引物，由SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列的反向引物组成。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物，其特征在于，所述引物根据检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的高度保守的特异性序列设计三重PCR引物，其中，猪链球菌2型的检测引物，由SEQIDNO：1所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：2所示的核苷酸序列的反向引物组成；猪多杀性巴氏杆菌的检测引物，由SEQIDNO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：6所示的核苷酸序列的反向引物组成，检测副猪嗜血杆菌的检测引物，由SEQIDNO：9所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：10所示的核苷酸序列的反向引物组成。2.如权利要求1所述的检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物在制备检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的制品中的应用。3.一种用于检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR检测方法，包括以下步骤：1)从待检样品制备基因组总DNA；2)以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的三重PCR引物，在同一反应体系中进行三重PCR扩增，得到扩增产物；3)扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。4.如权利要求3所述的用于检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR检测方法，其特征在于，三重PCR的反应体系总体积为25μl，包括：1)SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：9、SEQIDNO：10所示核苷酸序列各0....

【专利技术属性】
技术研发人员：贺东生，熊景峰，苏丹萍，周霞，陈敏鸿，司广斌，梁伟放，李锦辉，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44