本发明专利技术公开了一株甲基营养型芽孢杆菌及其在防治白蜡褐斑病中的应用。该菌株是从烟台市莱州湾海泥中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14675。由该甲基营养型芽孢杆菌制备的生物防治制剂，不仅能够高效的防治白蜡褐斑病害(最后一次施药后14d其防治效果达到75％以上)，还能促进白蜡生长，可以作为生物农药或生物肥料，防治白蜡褐斑病。
A strain of Bacillus cereus and its application in controlling brown spot of Fraxinus chinensis
The invention discloses a methylation bacillus and its application in controlling brown spot of Fraxinus chinensis. The strain was isolated from the sea mud of Laizhou Bay, Yantai, and was preserved in the general microorganism center of the Chinese microbe preservation management committee in September 26, 2017, and the preservation number is CGMCC No.14675. The biological control preparation, prepared by Bacillus spore, not only can effectively prevent and control the disease of the brown spot of the wax, but also can promote the growth of the white wax, and can be used as a biological pesticide or biological fertilizer to prevent the brown spot of white wax.
【技术实现步骤摘要】
一株甲基营养型芽孢杆菌及其在防治白蜡褐斑病中的应用
本专利技术属于植物病害生物防治
具体而言，本专利技术涉及一株甲基营养型芽孢杆菌及其在防治白蜡褐斑病中的应用，以及采用该甲基营养型芽孢杆菌制备的生物防治制剂。
技术介绍
白蜡因其具有较强的适应能力，且生长快、抗性强、材质好、经济价值高，并具有耐干旱、耐盐碱、耐瘠薄等特点，而成为我国沿海湿地用材林、防护林、风景林等造林的优良树种。近年来，随着城市绿化广泛推广使用，地区间树种苗木的调运，环境条件的恶化等诸多因素造成白蜡树病害的增多，其中白蜡褐斑病(CercosporafraxinitesEll.etEv.)是白蜡常见病害之一。白蜡褐斑病由梣假尾孢菌(CercosporafraxinitesEll.etEv.)引起，危害白蜡叶片，6～7月爆发。白蜡褐斑病的发生可使白蜡在早期出现落叶现象，导致白蜡树的生长量下降，严重影响着园林绿化美化效果。目前生产上常采用化学药剂防治白蜡褐斑病。化学防治极易造成农药残留，污染环境，并且化学农药的长期使用，使得病原菌产生抗药性，导致防治效果下降甚至失败。生物防治，对人畜安全、环境兼容性好且病原菌不易产生抗药性，具有化学杀菌剂不具有的优势，正逐步成为代替化学杀菌剂的最佳方式。而获得高效拮抗菌是生物防治的基础。甲基营养型芽孢杆菌是一类嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌，该菌广泛存在于自然界及植物根茎等内部器官中，安全无毒，且具有广谱的抗菌活性和极强的抗逆能力。近年来，国内学者对甲基营养型芽孢杆菌在植物生防、促生等方面应用研究较多。已有研究指出，该菌对水稻青枯病、香蕉枯萎病等具有较强的抑制作用，并能促进作物生长。可见，甲基营养型芽孢杆菌在防治病害发生和促进作物生长等方面显示出广阔的应用前景。也正因如此，甲基营养型芽孢杆菌被越来越多的企业看中，作为生产生物菌剂的功能菌所用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于高效防治白蜡褐斑病的新的微生物——甲基营养型芽孢杆菌菌株TJ2。本专利技术的甲基营养型芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产量大、抗逆性强，在植物(尤其是白蜡)表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术所提供的菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)菌株TJ2，是从烟台市莱州湾海泥中分离获得的，已于2017年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.14675。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB(Luria-Bertani)培养基上该菌株形状为杆状，鞭毛特征明显，单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性(以大肠杆菌为对照)。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。本专利技术甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)菌株TJ2的培养方法或繁殖方法包括：(1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。(2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。(3)固体培养基配方：包括固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.5∶0.5；所述固料按质量比计为，稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝53∶27∶15∶5；所述无机盐的组分及质量比为：磷酸二氢钾16％，硫酸镁5％，硫酸铵10％，轻质碳酸钙69％。(4)大量发酵培养配方：同(3)中固体培养基配方。本专利技术还提供一种用于防治白蜡褐斑病的生物防治制剂，所述生物防治制剂包括所述的甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)菌株TJ2。并且，本专利技术还提供了一种用于防治白蜡褐斑病的生物防治方法，所述生物防治方法包括向具有褐斑病的白蜡植株施用上述甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)菌株TJ2或者上述生物防治制剂。本专利技术也提供了上述甲基营养型芽孢杆菌菌株或者上述生物防治制剂在防治白蜡褐斑病中的用途。本专利技术所述的生物防治制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)制备所述甲基营养型芽孢杆菌菌株TJ2的种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，28～30℃下恒温培养；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，用灭菌纱布过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28～30℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述制备方法包括以下步骤：(1)将所述甲基营养型芽孢杆菌菌株TJ2的孢子移植到LB液体培养基，28～30℃摇床振荡培养3～5d得到种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液按质量比10％的比例接种到固体培养基中，28～30℃下振荡培养3～5d；(3)将步骤(2)培养的培养物用无菌水按质量比1∶15的比例混合，用灭菌纱布过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至大量发酵培养基，室温28～30℃、相对湿度85％以上的发酵室中发酵培养8～9d。其中，步骤(1)中的LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0～7.2。步骤(2)中的固体培养基包括固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.5∶0.5；所述固料按质量比计为，稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝53∶27∶15∶5；所述无机盐的组分及质量比为：磷酸二氢钾16％，硫酸镁5％，硫酸铵10％，轻质碳酸钙69％。步骤(3)中的大量发酵培养基同步骤(2)的固体培养基。实验表明，本专利技术的甲基营养型芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产量大、抗逆性强，在植物表面(尤其是白蜡)能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该甲基营养型芽孢杆菌制备的生物防治制剂，不仅能够高效的防治白蜡褐斑病害，还能促进白蜡生长，是一种极具应用前景的生物防治制剂。该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治白蜡褐斑病。试验结果表明：甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)菌株TJ2固体发酵培养物防治白蜡褐斑病效果显著，防治效果达到75.93％，且白蜡长势良好，无药害产生。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均在本专利技术的保护范围内。实施例11、甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)TJ2的分离与纯化本专利技术的甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)TJ2是从海泥中采用稀释平板法和平板划线法分离获得的，分离方法为：(1)芽孢杆菌菌株的分离海泥样品是于2013年11月2日取自烟台市莱州湾。称取1g海泥于100mL无菌水中，置于30℃摇床中150rpm震本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)菌株TJ2，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.14675。
【技术特征摘要】
1.甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)菌株TJ2，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.14675。2.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌株TJ2在防治白蜡褐斑病中的应用。3.一种包括权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌株TJ2的生物防治制剂。4.权利要求3所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，包括以下步骤：(1)制备甲基营养型芽孢杆菌菌株TJ2的种子液；(2)将步骤(1)制备的种子液接种到固体培养基中，28～30℃下恒温培养；(3)将步骤(2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28～30℃、相对湿度85％以上的发酵室中进行发酵培养。5.如权利要求4所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，所述步骤(2)中的固体培养基包括固料和无机盐，所述固料和无机盐的质量比为98.5∶0.5；所述固料按质量比计为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮＝53∶27∶15∶5；所述无机盐的组分及质量比为...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘德玺，杨庆山，刘贵民，张淑静，刘盛芳，刘幸红，牛赡光，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37
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