一种大鲵皮胶原蛋白提取方法和由该方法提取得到的胶原蛋白产品技术

本发明专利技术涉及一种大鲵皮胶原蛋白提取方法和由该方法提取得到的胶原蛋白产品。所述方法包括：获取大鲵皮、去除脂肪、去除色素、柠檬酸提取、一次析出、二次析出、透析并冷冻干燥等步骤。采用本发明专利技术的酸法提取方法得到的胶原蛋白的量与酶法提取得到的胶原蛋白的量相当或者更多，并且工艺更加简单。由本发明专利技术方法提取得到的胶原蛋白产品包含全面的氨基酸，营养价值更高。

A method for extracting collagen from giant salamander skin and collagen product extracted by this method.

The invention relates to a method for extracting collagen from giant salamander skin and collagen product extracted by the method. The methods include obtaining the skin of the giant salamander, removing fat, removing pigment, extracting citric acid, first precipitation, two precipitation, dialysis and freeze-drying. The amount of collagen obtained by the acid extraction method of the invention is equal to or more in the amount of collagen extracted by the enzyme method, and the process is simpler. The collagen product extracted from the invention contains a comprehensive amino acid with higher nutritional value.

【技术实现步骤摘要】
一种大鲵皮胶原蛋白提取方法和由该方法提取得到的胶原蛋白产品
本专利技术涉及
，尤其涉及。
技术介绍
大鲵(Giant)，又被叫做娃娃鱼，属两栖纲有尾目，隐鳃鲵科大鲵属，是世界上最大的两栖动物，是一种处于水生到陆生之间的过渡物种大鲵几乎是和恐龙同一个时代的物种，进化十分原始，被称为“活化石”。大鲵在我国分布地域也比较广泛，主要栖息于长江、黄河及珠江中上游的各支流中，是我国特有的珍稀野生动物，野生的大鲵被列为国家二级保护动物，不得捕杀，但人工饲养的子二代大鲵可作为一种食用性水产。我国已经开始人工繁殖和驯养大鲵，如今大大鲵数量已经有了大量的增加，并且人工养殖的子二代大鲵是允许食用的。由于各项保护措施和技术的改进，大鲵资源如今处在快速的增长阶段，这给大鲵资源今后的发展利用提供了强有力的保障。胶原蛋白(collagen)是一种具有三条肽链结构的细胞外蛋白，在生物体内分布广泛，在动物体内所有的蛋白质当中胶原蛋白的含量最高，达到了粗蛋白含量的80％以上，是动物体生命活动的重要参与者。在生物体内，胶原蛋白不仅在含量上有很大的比重，种类也各有不同，目前发现的就有28种之多。胶原蛋白的应用非常广泛，在医学上，可作为生物医学材料。胶原蛋白对皮肤有着及其强的附着性和平滑性，在医学上被用作伤口愈合的缝合线，而且胶原蛋白具有良好的平滑性，使得其在医疗缝合的结头不易松散，这样可以是的伤口在短时间内愈合。医学界还在积极地研究胶原蛋白药物，这些药物大多是在青光眼治疗和眼科中抗感染等方面，也有多用在创伤中的局部治疗及控制伤口的感染，以及妇科的宫颈发育异常和外科的局部麻醉等。在组织工程上，胶原蛋白和细胞外的其他物质构成了成组织细胞外基质，因此是生物体内的一种天然外支架材料。在食品上，胶原蛋白可以用于肉类的烹饪以提高肉质硬度；可以作为天然的肠衣制品；而且胶原蛋白具有固定化酶的功能，具有抗氧化性，这对肉制品的风味和质量都有极大的改善作用。另外，胶原蛋白在化妆品、营养添加剂等领域也有大量应用。胶原蛋白提取的基本原理是根据胶原蛋白的特性改变蛋白质所在的外界环境，从而把胶原蛋白从其他蛋白质中分离出来。提取方法依据提取介质的不同主要可以分为4种：即热水提取、酸法提取、碱法提取和酶法提取。此外，还有酸、碱结合热水提取，酸酶结合提取等。在从大鲵来源的材料中提取胶原蛋白时，一般认为热水法由于提取温度较高，得到的胶原蛋白大多变性为明胶；碱法迅速且彻底，但含羟基和巯基的氨基酸全部被破坏且产生消旋作用(结构变异)；酸法得率太低，且提取时间较长，而且色氨酸对酸不稳定。因此，一般多用酶法或者包括酶解步骤的提取方法提取以获得高得率。例如，CN201710501842.9公开了一种从大鲵中提取胶原蛋白的方法，该方法包括以下步骤：(1)杀菌处理、搅拌制浆、酸浸、水洗、碱浸、二次水洗、盐浸、酶解、纯化等步骤。该专利申请披露，即使采用酸法再结合碱浸、盐浸、酶解中的一种，提取率为40％左右。又例如，CN201410630235.9公开了一种利用大鲵的蜕皮提取胶原蛋白的方法，该方法包括如下步骤：预处理、酶解粗提、过滤、浓缩、喷雾干燥等步骤，最后得到胶原蛋白，其分子量在3000道尔顿以下。然而，采用酶法提取同样存在不足。例如，水解不够彻底，由于蛋白酶切除了胶原蛋白的非螺旋端肽，可能会引起胶原蛋白结构部分发生变化。另外，对提取条件例如pH要求比较苛刻，并且使用比较昂贵的酶，对于大规模提取而言，提取方法的成本比较昂贵。本专利技术采用提供了一种优化的酸法来从大鲵皮中提取胶原蛋白，该方法能够以高提取率以及全氨基酸从大鲵皮中得到胶原蛋白。
技术实现思路
为了解决本领域中是上述问题，本专利技术在第一方面提供了一种从大鲵皮提取胶原蛋白的方法，其中，所述方法包括如下步骤：(1)获取大鲵皮；(2)使用异丙醇浸泡大鲵皮以去除大鲵皮中的脂肪，获得无脂肪大鲵皮；(3)使用碱液浸泡无脂肪大鲵皮以去除大鲵皮中的色素，获得无色素大鲵皮；(4)使用第一酸液浸提无色素大鲵皮，然后进行固液分离，获得包含胶原蛋白的粗提液；(5)向所述粗提液中加入第一盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得一次析出胶原蛋白；(6)使用第二酸液将胶原蛋白完全溶解，再加入第二盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得二次析出胶原蛋白；(7)将二次析出胶原蛋白进行透析，然后进行冷冻干燥，得到胶原蛋白粉末产品。本专利技术在第二方面提供了一种由本专利技术第一方面所述的方法制得的大鲵胶原蛋白产品。本专利技术具有如下技术效果：(1)高得率。采用本专利技术的方法可以以高达20％的得率从大鲵皮中提取得到胶原蛋白。(2)工艺简单。由于无需采用酶解步骤，因此不需要苛刻的反应条件，使得操作工艺简单得到。(3)氨基酸全面，营养价值高。很多酸法提供从大鲵皮中根本无法提取得到含量少的丙氨酸和对酸不稳定的色氨酸，然而采用本专利技术可以得到含有高达0.4mg/g的色氨酸和5.0mg/g的丙氨酸。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术具体实施方式对本专利技术的技术方案进行更清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本专利技术的一部分实施方式，而不是全部的实施实施方式。基于本专利技术中的实施实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。如上所述，本专利技术在第一方面提供了一种从大鲵皮提取胶原蛋白的方法，其中，所述方法包括如下步骤：(1)获取大鲵皮；(2)使用异丙醇浸泡大鲵皮以去除大鲵皮中的脂肪，获得无脂肪大鲵皮；(3)使用碱液浸泡无脂肪大鲵皮以去除大鲵皮中的色素，获得无色素大鲵皮；(4)使用第一酸液浸提无色素大鲵皮，然后进行固液分离，获得包含胶原蛋白的粗提液；(5)向所述粗提液中加入第一盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得一次析出胶原蛋白；(6)使用第二酸液将胶原蛋白完全溶解，再加入第二盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得二次析出胶原蛋白；(7)将二次析出胶原蛋白进行透析，然后进行冷冻干燥，得到胶原蛋白粉末产品。优选的是，在步骤(1)中，大鲵皮为0.4-0.5cmX0.4-0.6cm的小片。在一些优选的实施方式中，所有步骤均在2-4℃优选为4℃的环境中完成。优选的是，在步骤(2)中，异丙醇为8重量％至12重量％的异丙醇水溶液中，料液比为1:10，浸泡24小时，每6小时换液一次，浸泡结束后，用水漂洗至中性pH，获得无脂肪大鲵皮。优选的是，步骤(3)中，所述碱液为0.08-0.12M(即克/升，下同)(例如为0.09、0.10或0.11M)的氢氧化钠水溶液，料液比为1:20，浸泡时间为24小时，每6小时换一次碱液，浸泡结束后，用水漂洗至中性pH，获得无色素大鲵皮。优选的是，在步骤(4)中，所述第一酸液为0.1-0.5M(例如0.2、0.3或0.4M)的柠檬酸水溶液，浸提时间为6-24小时(例如6、12、18或24小时)；固液分离通过如下方式进行：用纱布粗过滤，然后将滤液于5000r/min离心20分钟，获得粗提液。在一些优选的实施方式中，柠檬酸水溶液的浓度为0.1-0.4M(例如为0.1、0.2、0.3M或0.4M)并且浸提时间为6-18小时(例如6、12或18小时)；更优选的是，柠檬酸水溶液的浓度为0.1-0.3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从大鲵皮提取胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)获取大鲵皮；(2)使用异丙醇浸泡大鲵皮以去除大鲵皮中的脂肪，获得无脂肪大鲵皮；(3)使用碱液浸泡无脂肪大鲵皮以去除大鲵皮中的色素，获得无色素大鲵皮；(4)使用第一酸液浸提无色素大鲵皮，然后进行固液分离，获得包含胶原蛋白的粗提液；(5)向所述粗提液中加入第一盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得一次析出胶原蛋白；(6)使用第二酸液将胶原蛋白完全溶解，再加入第二盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得二次析出胶原蛋白；(7)将二次析出胶原蛋白进行透析，然后进行冷冻干燥，得到胶原蛋白粉末产品。

【技术特征摘要】
1.一种从大鲵皮提取胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)获取大鲵皮；(2)使用异丙醇浸泡大鲵皮以去除大鲵皮中的脂肪，获得无脂肪大鲵皮；(3)使用碱液浸泡无脂肪大鲵皮以去除大鲵皮中的色素，获得无色素大鲵皮；(4)使用第一酸液浸提无色素大鲵皮，然后进行固液分离，获得包含胶原蛋白的粗提液；(5)向所述粗提液中加入第一盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得一次析出胶原蛋白；(6)使用第二酸液将胶原蛋白完全溶解，再加入第二盐液使胶原蛋白析出并进行固液分离，获得二次析出胶原蛋白；(7)将二次析出胶原蛋白进行透析，然后进行冷冻干燥，得到胶原蛋白粉末产品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(1)中，大鲵皮为0.4-0.5cmX0.4-0.6cm的小片；和/或所有步骤均在2-4℃的环境中完成。3.根据权利要求1所述的，其特征在于：在步骤(2)中，异丙醇为8重量％至12重量％的异丙醇水溶液中，料液比为1:10，浸泡24小时，每6小时换液一次，浸泡结束后，用水漂洗至中性pH，获得无脂肪大鲵皮。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述碱液为0.08-0.12M的氢氧化钠水溶液，料液比为1:20，浸泡时间为24小时，每6小时换一次碱液，浸泡结束后，用水漂洗至中性pH，获得无色素大鲵皮。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述第一酸液为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：孟永禄，李灿，曹宇，白禹，王勇，唐金明，吴隆艳，罗暄巾，许抗抗，
申请(专利权)人：贵阳学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52