一株娄彻氏链霉菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株娄彻氏链霉菌（Streptomyces rochei）Z331‑A，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.15348。上述娄彻氏链霉菌Z331‑A及其发酵产物可用于制备农用和医药抗生素、杀菌剂、肥料。本发明专利技术提供的娄彻氏链球菌Z331‑A易于培养，发酵产物可广谱抗细菌和抗植物病原真菌；尤其是对海洋副溶血弧菌和抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有优异的生物活性；而且发酵产物耐紫外线辐射、耐酸碱、耐热，非常稳定，具有工业开发价值。

A strain of Streptomyces loucher and its application

The invention provides a Z331 A of Streptomyces rochei, which is preserved in the management center for the preservation of common microbial strains in China, and the preservation is CGMCC No.15348. Streptomyces Roche Streptomyces Z331 A and its fermentation products can be used for the preparation of agricultural and medical antibiotics, fungicides and fertilizers. The Z331 A is easy to cultivate, and the fermentation product can be broad-spectrum resistant to bacteria and plant pathogenic fungi; especially, it has excellent biological activity for Vibrio parahaemolyticus and methicillin resistant Staphylococcus aureus, and the fermentation product is resistant to ultraviolet radiation, acid alkali resistance and heat resistance, and is very stable, and is very stable. It has the value of industrial development.

【技术实现步骤摘要】
一株娄彻氏链霉菌及其应用
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一株娄彻氏链霉菌及其在防治病菌细菌和真菌方面的应用。
技术介绍
目前的抗生素成药市场，来自微生物的抗生素占67%，其中放线菌产生的占2/3。由于微生物所产抗生素多是天然的、绿色药剂，具有抗性机制多样、对环境安全等特点，而且相比人工化学制剂更不易产生耐药从而倍受关注。MRSA是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的缩写，被称为“超级病菌”，具有广谱耐药性，对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、磺胺类、利福平均产生不同程度的耐药，唯对万古霉素敏感。已成为院内和社区感染的重要病原菌之一。自1961年在英国发现了首例病人，之后以惊人的速度在世界范围内蔓延，据估计每年大约有十万人因严重感染住院治疗。目前，临床上有效控制治疗的抗生素只有万古霉素，但随着抗生素的泛滥使用，导致了耐药抗药问题的出现。2002年美国疾控中心公布了世界第一例耐万古霉素的金黄色葡萄球菌。开发有效治疗MRSA的药物势在必行。目前，农用抗生素已开发出各种杀细菌、杀真菌、杀虫、杀螨、杀病毒、除草、植物生长调节剂等领域品种。但随着农用抗生素大剂量的使用，也不可避免出现了耐药，所以开发新的更安全的农用抗生素成为必要。副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus,Vp)是一种革兰氏阴性嗜盐菌，广泛存在于沿岸海水、海河交界处及水生动物中，能引起鱼、虾、蟹和贝类等多种养殖动物的疾病，给水产养殖业带来严重的经济损失。此外，副溶血弧菌能导致食物中毒，严重危害人类健康。人类食用被副溶血弧菌污染的水产品会引起急性肠胃炎，严重时引发败血症甚至死亡。近年来，在亚洲、欧洲和北美洲均多次爆发Vp导致的食源性疾病。我国食源性疾病监测网统计显示，Vp引起的食源性疾病已居微生物食源性疾病的首位，如何对副溶血性弧菌有效防控，成为水产养殖业及食品安全领域亟待解决的问题。目前杀灭副溶血弧菌的主要采用抗生素，但副溶血弧菌已对水产养殖业中常用多种抗生素具有不同程度的抗性，多药耐受情况十分严重，发现找到新的抗生素对抗副溶血弧菌成为必然。
技术实现思路
针对缺乏有效控制MRSA、副溶血弧菌的抗生素和农用抗生素种类匮乏等问题，本专利技术提供一株娄彻氏链霉菌，其发酵产物具有广谱抗菌性，能够对多种植物病原真菌、革兰氏阳性及阴性菌及抗药性MRSA菌株有抑制作用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。一株娄彻氏链霉菌（Streptomycesrochei）Z331-A，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.15348；其16SrRNA序列如SEQNo.1所示。一种上述娄彻氏链霉菌Z331-A及其发酵产物在制备医药抗生素，农用抗生素和杀菌剂和肥料上的用途。一种上述娄彻氏链霉菌Z331-A发酵产物的制备方法，包括以下步骤：（1）将保存的菌种接种到基础培养基中摇瓶发酵获得活化菌液；（2）将活化菌液接种到种子培养基中摇瓶发酵获得种子液；（3）将种子液接种到发酵培养基中搅拌发酵获得含发酵产物的发酵液。步骤（1）中的接种量为1%；步骤（2）中的接种量为3%；步骤（3）中的接种量为3-5%。步骤（1）-（3）中，发酵温度为25-30℃；转速为180-200r/min。步骤（1）和（2）中，培养时间为2-3天；步骤（3）中，培养时间为7-10天。所述基础培养基、种子培养基和发酵培养基分别选自高氏一号、克氏、察氏、淀粉、葡萄糖天门冬酰胺、马铃薯葡萄糖、酵母膏麦芽汁、营养琼脂、甘油天门冬酰胺或ISP-2（链霉菌2号）液体培养基中的任一种；优选为高氏一号液体培养基或ISP-2液体培养基。作为优选，上述制备方法中，所述步骤（3）后还包括发酵液的去除菌体过程；优选为离心或者过滤；所述离心速度为8000-10000r/min。一种由上述娄彻氏链霉菌Z331-A或其发酵产物制备的医药抗生素，农用抗生素和杀菌剂。所述抗生素的防治对象包括镰刀菌属、刺盘孢属、腐霉属、疫霉属的植物病原真菌，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。植物病原真菌优选为禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、火龙果镰刀菌（Fusariumpitaya）、芒果畸形病菌（Fusariummangiferae）、盘长孢刺盘孢菌（ColletotrichumgloeosporioidesPenz）、葫芦科刺盘孢(Colletotrichumlagenarium)、棘腐霉(PythiumacanthicumDrechsler)和烟草疫病（Phytophtoraparasiticavar.nicotianaeTucker）；更优选为火龙果镰刀菌、芒果畸形病菌、葫芦科刺盘孢和烟草疫病。革兰氏阴性菌优选为副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus），变形杆菌（Bacillusproteus），大肠杆菌(Escherichiacoil)；革兰氏阳性菌优选为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，无乳链球菌（Streptococcusagalactiae），金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA,methicillin-resistantStaphylococcusaureus)。一种由上述娄彻氏链霉菌Z331-A或其发酵产物制备的肥料。所述肥料优选为菌肥和液体肥料。适用对象优选为茄科和葫芦科农作物，如茄子、辣椒、番茄、黄瓜和西葫。本专利技术具有以下优点：本专利技术提供的娄彻氏链球菌Z331-A易于培养，发酵产生的发酵产物可广谱抗细菌和抗植物病原真菌；尤其是对海洋副溶血弧菌和抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有优异的生物活性；而且发酵产物耐紫外线辐射、耐酸碱、耐热，非常稳定，具有工业开发价值。菌种保存信息娄彻氏链霉菌（Streptomycesrochei）Z331-A，于2018年2月8日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保存地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国北京中国科学院微生物研究所，保存编号为CGMCCNo.15348。附图说明图1为娄彻氏链霉菌Z331-A在高氏一号培养基上的形态（正反面）；图2为基于16SrRNA序列构建的Z331-A系统发育树；图3为Z331-A发酵液对不同细菌的抑菌圈；图4为Z331-A不同浓度发酵液对番茄幼苗的促生作用（30d）；图5为不同紫外线处理时间后抑菌圈大小；图6为紫外线对发酵液活性的影响；图7为不同pH处理后抑菌圈大小；图8为pH对发酵液活性的影响；图9为不同温度处理后抑菌圈大小；图10为加热对发酵液活性的影响。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。实施例1Z331-A的分离和鉴定1.1菌种分离取2015年6月采集自海南省海口市海甸岛近海沙地的土壤样品，风干7d后，用无菌水制成不同浓度稀释液，在高氏一号培养基中加入50g/mL重铬酸钾作为分离培养基，采用稀释平板法分离土壤样品。采用28℃培养4周，挑取不同的疑似放线菌，在平板上进行再次分离，得到Z331-A的纯培养。1.2菌种鉴定1.2.1形态学特征在高氏一号培养基上，Z331-A菌株生长良好，菌落略隆起，质地致密，干燥，呈微绒状，不透明，气生菌丝呈现白色或灰白色，基生菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株娄彻氏链霉菌（Streptomyces rochei）Z331‑A，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.15348。

【技术特征摘要】
1.一株娄彻氏链霉菌（Streptomycesrochei）Z331-A，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.15348。2.一种如权利要求1所述的娄彻氏链霉菌Z331-A及其发酵产物在制备医药抗生素，农用抗生素和杀菌剂，肥料上的用途。3.一种由如权利要求1所述娄彻氏链霉菌Z331-A或其发酵产物制备的医药、农用抗生素和杀菌剂。4.根据权利要求3所述的抗生素和杀菌剂，其特征在于，防治对象包括镰刀菌属、刺盘孢属、腐霉属、疫霉属的植物病原真菌，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌；植物病原真菌优选为禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、火龙果镰刀菌（Fusariumpitaya）、芒果畸形病菌（Fusariummangiferae）、盘长孢刺盘孢菌（ColletotrichumgloeosporioidesPenz）、葫芦科刺盘孢(Colletotrichumlagenarium)、棘腐霉(PythiumacanthicumDrechsler)和烟草疫病（Phytophtoraparasiticavar.nicotianaeTucker）；更优选为火龙果镰刀菌（Fusariumpitaya）、芒果畸形病菌（Fusariummangiferae）、葫芦科刺盘孢(Colletotrichumlagenarium)和烟草疫病（Phytophtoraparasiticavar.nicotianaeTucker）；革兰氏阴性菌优选为副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus），变形杆菌（Bacillusproteus），大肠杆菌(Escherichiacoil)；更优选为副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）；革兰氏阳性菌优选为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtili...

【专利技术属性】
技术研发人员：范丽霞，缪卫国，胡晓苹，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南,46