五味子醇甲在增强PEDV疫苗免疫应答中的应用制造技术

基于现有技术中，PEDV易突变以及疫苗难以适用新毒株等问题，本发明专利技术旨在提供一种增强PEDV疫苗免疫应答的方法，具体地，本发明专利技术创造性的将五味子醇甲应用于增强PEDV疫苗免疫应答。结果表明，五味子醇甲能够有效地激发母猪的免疫应答，乳汁中的sIgA浓度明显升高，对于哺乳仔猪的保护作用明显增强。

Application of schisandrin in enhancing immune response of PEDV vaccine

This invention aims to provide a method to enhance the immune response of the PEDV vaccine based on the easy mutation of PEDV and the difficulty in the application of the new vaccine. The invention specifically applies the invention to enhance the immune response of the PEDV vaccine. The results showed that Fructus Schisandrae could effectively stimulate the immune response of sow, and the concentration of sIgA in milk increased obviously, and the protective effect of suckling piglets was obviously enhanced.

【技术实现步骤摘要】
五味子醇甲在增强PEDV疫苗免疫应答中的应用
：本专利技术涉及生物
和兽药领域，具体涉及五味子醇甲在增强PEDV疫苗免疫应答中的应用。
技术介绍
：猪流行性腹泻（porcineepidemicdiarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV）引起的一种急性、高度接触性、病毒性肠道传染病，一直是严重威胁仔猪健康养殖的主要疫病之一。该病于1971年在英国首次被报道，不久相继在欧洲各国开始流行。其在亚洲流行情况较欧洲更为严重，并呈现出哺乳仔猪高发病率、高致死率的特点。我国于1976年首次报道该病，到2000年，该病已经在全国范围内流行。尤其自2010年末开始，我国猪场从南到北，从东到西陆续暴发了PEDV变异毒株引起的以新生仔猪严重呕吐、水样腹泻和高病死率为主要特征的腹泻疫情。目前PEDV变异毒株已是我国PEDV流行的优势毒株，变异毒株在我国猪群中的流行已不容忽视，甚至普遍认为变异型PED将是未来几年内危害仔猪最为严重的腹泻病之一。疫苗接种是预防控制PED的主要手段，自PEDV出现以来，针对PED疫苗的研究一直都在持续进行。目前我国商品化的PED疫苗主要有传统PEDV灭活苗和弱毒苗，但灭活疫苗存在对猪的免疫保护力较弱、灭活不完全导致病毒扩散风险等缺陷，弱毒疫苗存在毒力增强、易产生变异株等缺陷。就目前我国PED流行现状而言，疫苗免疫仍是控制该病发生、流行和降低高病死率的最佳方法，疫苗应用依然是PED预防和控制的主要途径。随着PEDV病原学和分子生物学研究的不断深入，其免疫机理日益清楚，PEDV以典型的局部黏膜免疫为主，存在于血清中的IgG不能提供完全保护，只有肠道黏膜免疫所产生的分泌型抗体（SIgA）才能抵抗PEDV感染，哺乳仔猪通过初乳获得母源SIgA，产生针对PEDV的被动免疫保护。PEDV灭活疫苗是最常规的疫苗，制造工艺简单，直接用人工繁殖获得病原微生物，经灭活后作为抗原，具有安全、可靠的特点。目前，已经商品化的灭活疫苗为猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻二联灭活疫苗。为筛选能用于变异型PEDV疫苗研发的流行毒株，代洪波等进行PEDV变异毒株的分离鉴定及灭活疫苗免疫保护效果研究，结果显示以PEDV-JX12分离株制备的灭活疫苗免疫母猪，对哺乳仔猪的保护率达93.75%，表明PEDV-JX12分离株能够适应细胞培养，免疫接种母猪能给哺乳仔猪提供有效保护，可用于变异型PEDV流行毒株的疫苗研发。灭活疫苗性质比较稳定，易于保存和运输，抗原含量达到一定水平后免疫母猪，可以有效防控哺乳仔猪PEDV的发生和流行。专利技术专利CN201710012967.5提供了一种猪流行性腹泻病毒变异株灭活疫苗，是由腹泻病毒变异株PEDV/CH/BJ/2014株灭活后制备取得。该疫苗具有良好的免疫原性，母猪产前接种该疫苗后中和抗体产生快、抗体滴度高、维持时间长，而且接种后的母猪所产仔猪能获得较好的被动免疫，能够有效保护仔猪抵抗流行性腹泻病毒的攻击，提高仔猪成活率。专利技术专利CN201510053897.9公开了一种猪流行性腹泻病毒PEDV鼻腔免疫疫苗及其制备方法，由猪流行性腹泻病毒的疫苗原液、佐剂溶液和叠氮钠溶液按特定的比例混合制得，其中所述的佐剂溶液含有TLR的激动剂、NOD样受体的激动剂、卡波姆和PVPK。其制备的PEDV鼻腔免疫疫苗相比现有的相关疫苗，其效价高、免疫效果好，通过鼻腔黏膜组织进行疫苗免疫，可以同时激发机体黏膜免疫和系统免疫，在母猪乳汁中产生大量的sIgA，通过乳汁将母源抗体传递给仔猪，使仔猪获得有效的免疫保护，预防仔猪流行性腹泻的危害。专利技术专利WO2016/038197A公开了用于保护母猪的后代免于猪流行性腹泻病毒的疫苗，所述疫苗包含非活PEDV抗原和含油佐剂，其用于通过以对应于至少3.0E6TCID50杀死的全PEDV的抗原的剂量向怀孕母猪施用所述疫苗而保护所述母猪的后代免于猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染。然而，新毒株的出现导致对目前CV777株疫苗毒免疫效力的质疑，然而目前没有更为合适的新的疫苗毒株出现，如何提高现有灭活疫苗保护力就成为防控PED的研究热点。五味子醇甲为五味子仁乙醇提取物中主要成分之一，其属于联苯环辛二烯类木脂素，化学分子式为Ｃ24Ｈ32Ｏ7，分子量为432.5，烙点为133℃，难溶于水，具有较高的生物活性。药典中指出，采用高效液相色谱法测定五味子药材中五味子醇甲的含量时，应不少于0.4%。研究表明，五味子醇甲具有镇静、抗惊厥、益智、保肝、抗菌抑菌等方面的功效。专利技术专利申请CN201110113859.X公开了五味子醇甲、五味子甲素及五味子醇提取物用于防治老年痴呆症的用途，结果表明五味子乙醇提取物、五味子醇甲、五味子甲素可显著改善小鼠工作记忆障碍及空间辨别学习记忆障碍。提高SOD和GSH-Px活性，减少MDA含量，增加GSH含量并降低GGSG含量，提示五味子醇提取物、五味子醇甲、五味子甲素可能通过多种途径清除体内氧化应激所产生的自由基，抑制脂质过氧化，提高机体抗氧化能力，从而改善Aβ1-42所致的氧化应激损伤。李海涛等（南京中医药大学药学院）研究五味子醇甲的神经保护作用并探索其作用机制，研究表明五味子醇甲对PC12细胞有保护作用,其保护作用机制可能与增强谷氨酸转运体的功能有关。王莹的研究表明，五味子醇甲可以改善果蝇攀爬能力,且攀爬能力的改善在一定范围内与时间、计量呈一定相关性。然而，尚未见到现有技术中任何报道表明五味子醇甲具有增强PEDV疫苗免疫应答方面的应用。
技术实现思路
：基于现有技术中，PEDV易突变以及疫苗难以适用新毒株等问题，本专利技术旨在提供一种增强PEDV疫苗免疫应答的方法，具体地，本专利技术创造性的将五味子醇甲应用于增强PEDV疫苗免疫应答。结果表明，五味子醇甲能够有效地激发母猪的免疫应答，乳汁中的sIgA浓度明显升高，对于哺乳仔猪的保护作用明显增强。为解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术请求保护五味子醇甲在增强PEDV疫苗免疫应答中的应用。优选的，所述五味子醇甲在增强哺乳母猪PEDV疫苗免疫应答中的应用。本专利技术还请求保护一种PEDV疫苗免疫应答增强剂，其特征在于，所述免疫增强剂包括五味子醇甲。优选的，所述免疫增强剂中包含质量百分含量为0.3%-0.5%的五味子醇甲。优选的，所述PEDV疫苗免疫应答增强剂由以下质量百分含量的成分组成：0.3-0.5%五味子醇甲，1.0-1.2%精氨酸，0.2-0.3%维生素C，2.5%吐温20，余量为无菌蒸馏水。优选的，所述PEDV疫苗免疫应答增强剂由以下质量百分含量的成分组成：0.4%五味子醇甲，1.0%精氨酸，0.2%维生素C，2.5%吐温20，95.9%无菌蒸馏水。优选的，所述PEDV疫苗免疫应答增强剂由以下质量百分含量的成分组成：0.5%五味子醇甲，1.2%精氨酸，0.2%维生素C，2.5%吐温20，95.6%无菌蒸馏水。优选的，所述PEDV疫苗免疫应答增强剂由以下质量百分含量的成分组成：0.3%五味子醇甲，1.0%精氨酸，0.3%维生素C，2.5%吐温20，95.9%无菌蒸馏水。所述PEDV疫苗免疫应答增强剂的制备方法包括如下步骤：步骤一，按质量百分含量称取五味本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.五味子醇甲在制备增强PEDV疫苗免疫应答的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.五味子醇甲在制备增强PEDV疫苗免疫应答的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述五味子醇甲在制备增强哺乳母猪PEDV疫苗免疫应答的药物中的应用。3.一种PEDV疫苗免疫应答增强剂，其特征在于，所述免疫应答增强剂包括五味子醇甲。4.根据权利要求3所述的免疫应答增强剂，所述免疫应答增强剂中包含质量百分含量为0.3%-0.5%的五味子醇甲。5.根据权利要求3或4所述的免疫应答增强剂，所述免疫应答增强剂由以下质量百分含量的成分组成：0.3-0.5%五味子醇甲，1.0-1.2%精氨酸，0.2-0.3%维生素C，2.5%吐温20，余量为无菌蒸馏水。6.根据权利要求5所述的免疫应答增强剂，其特征在于，由以下质量百分含量的成分组成：0.4%五味子醇甲，1.0%精氨酸，0.2%维生素C，2.5%吐温20，95.9%无菌蒸馏水。7.根据权利要求5所述的免疫应答增强剂，其特征在于，由以下质量百分含量的成分组成：0.5%五味子醇甲，1.2%精氨酸，0.2%维...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞，张志刚，张磊，
申请(专利权)人：江西牧威利元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36