用于产生工程改造的人原代血液树突细胞系的方法技术

本文提供工程改造的原代血液和单核细胞源性树突细胞，其中所述树突细胞表达来自T细胞白血病病毒的功能性Tax蛋白；以及制备和使用所述树突细胞的方法。

Method for generating primary blood dendritic cell lines for engineering transformation

This article provides the engineered primary blood and monocyte derived dendritic cells, in which the dendritic cells express the functional Tax protein from the T cell leukemia virus; and the methods for preparing and using the dendrite cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生工程改造的人原代血液树突细胞系的方法相关申请的交叉引用本申请要求2015年10月19日提交的美国临时申请号62/243,177的权益，所述美国临时申请的内容据此以引用的方式整体并入。电子提交材料的引用并入以引用的方式整体并入本文的是随本文一起同时提交并如下标识的计算机可读序列表：一个于2016年10月19日创建的名为“sequence_listing_ST25.txt”的60,990字节ASCII(文本)文件。专利
本专利技术的领域大体上涉及生物学和医学领域。所述领域也涉及用于产生适用于治疗疾病诸如癌症的树突细胞和相关组合物的方法。专利技术背景在专职抗原递呈细胞(APC)之中，树突细胞(DC)在介导抗原特异性适应性免疫应答方面具有对原初T淋巴细胞进行致敏的独特能力。Palucka,K.和Banchereau,J.Cancerimmunotherapyviadendriticcells.NatureReviewsCancer12,265-277(2012)。DC也具有用以诱导γσT细胞和自然杀伤(NK)细胞的活化和增殖，从而使先天免疫性桥接于适应性免疫应答的能力。Tyler,C.J.,Doherty,D.G.,Moser,B.和Eberl,M.HumanVγ9/Vδ2Tcells:Innateadaptorsoftheimmunesystem.Cellularimmunology296,10-21(2015)；vanBeek,J.J.,Wimmers,F.,Hato,S.V.,deVries,I.J.M.和Skold,A.E.Dendriticcellcrosstalkwithinnateandinnate-likeeffectorcellsinantitumorimmunity:implicationsforDCvaccination.CriticalReviewsTMinImmunology34:517-536(2014)。DC由骨髓进化，并且通过血液循环迁移至淋巴组织和非淋巴组织。在血液中，大多数DC是不成熟的，并且能够吞噬来自入侵病原体的外来抗原。在摄取外来抗原后，不成熟DC经历通过许多病原体识别受体(PRR)诸如Toll样受体(TLR)和细胞因子受体的活化而达成的复杂的成熟和活化过程。Pradere,J.-P.,Dapito,D.H.和Schwabe,R.F.TheYinandYangofToll-likereceptorsincancer.Oncogene33,3485-3495(2014)；Dzopalic,T.,Rajkovic,I.,Dragicevic,A.和Colic,M.Theresponseofhumandendriticcellstoco-ligationofpattern-recognitionreceptors.ImmunologicResearch52,20-33(2012)；Hammer,G.E.和Ma,A.Molecularcontrolofsteady-statedendriticcellmaturationandimmunehomeostasis.AnnualReviewofImmunology31,743-791(2013)。成熟和活化的DC特征性地表达细胞表面共刺激性分子诸如CD80、CD83和CD86，装配抗原肽-MHC复合物，并且迁移至次级淋巴组织以促进抗原特异性T细胞扩增。DC占血液中免疫细胞的1％。已表征两种主要类型的血液DC，包括CD11c+髓样DC(mDC)和CD303+浆细胞样DC(pDC)。Mildner,A.和Jung,S.Developmentandfunctionofdendriticcellsubsets.Immunity40,642-656(2014)。尽管pDC通过在遭遇病原体后分泌大量干扰素α(IFNα)而在介导抗炎性应答方面至关重要，但mDC在进行抗原递呈以对原初T细胞进行致敏方面起主要作用。Osugi,Y.,Vuckovic,S.和Hart,D.N.MyeloidbloodCD11c+dendriticcellsandmonocyte-deriveddendriticcellsdifferintheirabilitytostimulateTlymphocytes.Blood100,2858-2866(2002)；Kassianos,A.J.,Jongbloed,S.L.,Hart,D.N.和Radford,K.J.IsolationofhumanbloodDCsubtypes.DendriticCellProtocols,45-54(2010)。mDC的CD11c+子组相对充足，并且次要子组或CD141+mDC展现用以向CD8T细胞交叉递呈MHC-I上的细胞外抗原，从而使得极化成细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的强效能力。Jongbloed,S.L.等HumanCD141+(BDCA-3)+dendriticcells(DCs)representauniquemyeloidDCsubsetthatcross-presentsnecroticcellantigens.TheJournalofExperimentalMedicine207,1247-1260(2010)；Bachem,A.等Superiorantigencross-presentationandXCR1expressiondefinehumanCD11c+CD141+cellsashomologuesofmouseCD8+dendriticcells.TheJournalofExperimentalMedicine207,1273-1281(2010)。通过比较评估人DC子组和鼠DC子组来分析转录概况，提出人CD141+DC与鼠CD8+DC对应物(即在介导抗原交叉递呈方面的主要DC子组)密切相关。因为DC很少受入侵病原体感染，所以DC介导的交叉递呈和终末分化细胞毒性效应T细胞的诱导是产生针对病原性病毒和癌细胞的适应性免疫时的主要步骤。由于血液DC贫乏，所以当前DC方法经常通过用细胞因子和PRR刺激因子的混合物进行的复杂的成熟和活化过程来利用经抗原负载的单核细胞源性DC(MoDC)。Kvistborg,P.,M.,Pedersen,A.,Claesson,M.和Zocca,M.Fastgenerationofdendriticcells.Cellularimmunology260,56-62(2009)；Jolanda,I.,deVries,M.,Adema,G.J.,Punt,C.J.和Figdor,C.G.Phenotypicalandfunctionalcharacterizationofclinical-gradedendriticcells.AdoptiveImmunotherapy:MethodsandProtocols,113-125(2005)。这个方法已广泛用于临床癌症疫苗试验中，然而，所述方法的临床益处相当有限。在这个方法的情况下，明显存在若干缺点。相较于原代血液DC，MoDC与体外源性巨噬细胞更密切相关。Robbins,S.H.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种工程改造的原代血液树突细胞，其中所述树突细胞表达来自T细胞白血病病毒的功能性Tax蛋白，其中所述树突细胞为CD205+和CD11c+。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.19 US 62/243,1771.一种工程改造的原代血液树突细胞，其中所述树突细胞表达来自T细胞白血病病毒的功能性Tax蛋白，其中所述树突细胞为CD205+和CD11c+。2.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述Tax蛋白来自选自由HTLV-1、HTLV-2、HTLV-3和HTLV-4组成的组的人T细胞白血病病毒。3.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述Tax蛋白来自HTLV-2。4.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述树突细胞具有组成性成熟和活化表型。5.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述树突细胞是人细胞。6.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述树突细胞表达一种或多种树突细胞成熟和活化标志物。7.如权利要求6所述的树突细胞，其中所述树突细胞成熟和活化标志物选自由CD83、CD80、CD86、CD70、CCR7和HLA-DR组成的组。8.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述细胞能够在不存在外源添加的IL-2的情况下诱导原初淋巴细胞的增殖。9.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述细胞已被遗传修饰来表达一种或多种HLA蛋白。10.如权利要求9所述的树突细胞，其中所述细胞已被遗传修饰来表达HLA-A2.1。11.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述细胞递呈一种或多种抗原或其抗原片段或变体。12.如权利要求11所述的树突细胞，其中所述抗原是癌抗原。13.如权利要求12所述的树突细胞，其中所述抗原是人端粒酶逆转录酶或其抗原片段或变体。14.如权利要求13所述的树突细胞，其中所述抗原包括包含全长人IκBα和人端粒酶逆转录酶的包含SEQIDNO:9的氨基酸301-700的片段的融合蛋白。15.如权利要求14所述的树突细胞，其中所述融合蛋白包括SEQIDNO:13。16.如权利要求11所述的树突细胞，其中所述细胞以HLA限定的方式递呈所述抗原。17.如权利要求11所述的树突细胞，其中所述抗原通过病毒转导来引入。18.如权利要求17所述的树突细胞，其中所述病毒是慢病毒。19.如权利要求11所述的树突细胞，其中所述树突细胞能够对原初淋巴细胞进行致敏以产生识别抗原的细胞毒性淋巴细胞。20.如权利要求1所述的树突细胞，其中所述树突细胞能够对原初淋巴细胞进行致敏以产生能够以非HLA限定的方式杀灭细胞的细胞毒性淋巴细胞。21.一种工程改造的单核细胞源性树突细胞，其中所述树突细胞表达来自T细胞白血病病毒的功能性Tax蛋白，其中所述树突细胞为CD205+。22.如权利要求21所述的树突细胞，其中所述Tax蛋白来自选自由HTLV-1、HTLV-2、HTLV-3和HTLV-4组成的组的人T细胞白血病病毒。23.如权利要求21所述的树突细胞，其中所述树突细胞表达一种或多种选自由CD83、CD80、CD86和CD70组成的组的树突细胞成熟和活化标志物。24.一种产生工...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·程，
申请(专利权)人：巴尔的摩马里兰大学，
类型：发明
国别省市：美国,US