一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法技术

本发明专利技术属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，所述方法步骤包括：S1、种子细胞的制备；S2、三级在线放大培养；S3、病毒接种；S4、病毒培养与收获。与现有技术相比，本发明专利技术能显著降低生产成本，大规模生产高滴度的鸡传染性法氏囊病病毒，同时还能使细胞在传代时保持较高的细胞增殖速率，减少血清残留对终产品的不良影响。

An online amplification method for producing infectious bursal disease virus

The invention belongs to the technical field of animal biological products, in particular to a method of on-line amplification of the production of avian infectious bursal disease virus. The methods include: S1, preparation of seed cells; S2, three stage amplification and culture; S3, virus inoculation; S4, virus culture and harvest. Compared with the existing technology, the invention can significantly reduce the production cost, the large-scale production of high titer of the chicken infectious bursal disease virus, at the same time, can keep the cell proliferation rate and reduce the adverse effects of serum residue on the final product.

【技术实现步骤摘要】
一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法。
技术介绍
鸡传染性法氏囊病(IBD)又称甘波罗病，是由传染性法氏囊病毒引起的以破坏鸡的中枢免疫器官法氏囊为主要发病机制的病毒性传染病。由于该病发病突然、病程短、传染性高、死亡率高，且可引起免疫抑制，是养鸡业的主要传染病之一。目前，对鸡传染性法氏囊病尚无特别有效的治疗药物，对鸡群进行免疫接种是预防该病的最佳方法。可以对雏鸡进行疫苗接种以产生主动免疫，也可给种鸡强化免疫以使其后代获得被动免疫，并在出壳后的最关键的2～3周免受感染，因此，病毒疫苗的制备至关重要。中国专利技术专利CN103316334B公开了一种鸡传染性法氏囊病活疫苗及其生产方法，该专利技术通过研究，筛选出具有免疫原性好和抗原谱较广的鸡传染性法氏囊病病毒毒株，研制出鸡传染性法氏囊病三价活疫苗。该疫苗制备方法为：将病毒接种于SPF鸡胚制成的成纤维细胞，培养72-96h，待细胞病变70％时收获毒液。该疫苗免疫原性好、能够突破较高水平母源抗体、免疫持续期长达3个月以上、对不同毒株均具有良好保护，但该本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、种子细胞的制备：取贴壁细胞进行转瓶培养得到种子细胞，当细胞数量达到0.65‑1.30×1010cells时进行三级在线放大培养；S2、三级在线放大培养：取步骤S1所得种子细胞或单层细胞至生物反应器进行三级在线放大培养，添加微载体3‑5g/L，培养液占生物反应器总体积65‑75％，设置细胞贴壁参数为：DO：40‑50、pH：7.2‑7.3、温度：32‑37℃、转速：30‑100转/min、O2：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min、CO2：0.2‑0.6MPa/(L/min)/min、Air：0.2‑0.4M...

【技术特征摘要】
1.一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、种子细胞的制备：取贴壁细胞进行转瓶培养得到种子细胞，当细胞数量达到0.65-1.30×1010cells时进行三级在线放大培养；S2、三级在线放大培养：取步骤S1所得种子细胞或单层细胞至生物反应器进行三级在线放大培养，添加微载体3-5g/L，培养液占生物反应器总体积65-75％，设置细胞贴壁参数为：DO：40-50、pH：7.2-7.3、温度：32-37℃、转速：30-100转/min、O2：0.2-0.4MPa/(L/min)/min、CO2：0.2-0.6MPa/(L/min)/min、Air：0.2-0.4MPa/(L/min)/min；3-4h后切换为细胞培养参数：DO：40-60、pH：7.0-7.5、温度：35-38℃、转速：30-80转/min、O2：0.2-0.4MPa/(L/min)/min、CO2：0.2-0.6MPa/(L/min)/min、Air：0.2-0.4MPa/(L/min)/min、灌流量为生物反应器总体积25-65％每天；S3、病毒接种：当细胞密度为2.58-4.73×108cells/g微载体时，用PBS清洗载体，去除培养液和血清，将病毒液及清洗后的细胞液加入到含有无牛血清DMEM/F12培养液的罐体中，感染细胞，设置病毒吸附参数：DO：30-40、pH：7.40-7.80、温度：33-37℃、转速：30-50转/min、O2：0.2-0.3MPa/(L/min)/min、CO2：0.2-0.4MPa/(L/min)/min、Air：0.2-0.4Mpa/(L/min)/min；S4、病毒培养与收获：病毒吸附1-2h后换成病毒培养参数，设置病毒培养参数：DO：30-50、pH：7.35-7.40、温度：33-37℃、转速：40-60转/min、O2：0.2-0.3MPa/(L/min)/min、CO2：0.2-0.4MPa/(L/min)/min、Air：0.2-0.4MPa/(L/min)/min，当出现70-85％细胞病变时收获病病毒液。2.如权利要求1所述在线放大生...

【专利技术属性】
技术研发人员：李祖成，尹顺义，伍活镰，蒋东阳，任政华，
申请(专利权)人：广州齐志生物工程设备有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44