一种乳酸菌添加剂及其应用、制备方法技术

本发明专利技术公开一种乳酸菌添加剂，所述乳酸菌添加剂组分包括：组分A和组分B，所述组分A和所述组分B容积比为(1～2):(1～2)；所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A和所述组分B不相同；所述乳酸菌添加剂作为牧草青贮添加剂，提升牧草青贮饲料的品质，具有广泛的应用前景。

Lactobacillus additive and its application and preparation method

The present invention discloses a lactic acid bacteria additive, which includes component A and component B, the component A and the B volume ratio of the component is (1~2): (1~2), and the component A is selected from pentose pentanus, wyssie sinuses and Lactobacillus plantarum, and the component B is selected from pentose pentanus and feeding sinus Weiss One of the strains of Lactobacillus and Lactobacillus plantarum, the component A is different from that of the component B, and the lactic acid bacteria additive, as a herbage silage additive, improves the quality of forage silage, and has a wide application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种乳酸菌添加剂及其应用、制备方法
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种乳酸菌添加剂其应用、制备方法。
技术介绍
青贮是通过乳酸菌的增殖，将原料中的发酵底物转化成乳酸等酸性物质，维持酸性厌氧环境，以利于青贮作物长期保存的一种贮藏方式。青贮饲料颜色黄绿、气味酸香、柔软多汁、适口性好，在畜牧业生产中广泛应用，尤其在反刍动物饲养中，已成为重要的优质粗饲料来源。乳酸菌是近年来正在推广的青贮微生物添加剂，其主要作用是调节青贮物料内微生物组成，迅速成为优势菌群，竞争抑制有害微生物生长转化有限的糖分，降低青贮pH值，从而提高青贮饲料的质量，不同的青贮物料其发酵特性存在不同，而目前适用于青贮的乳酸菌品种单一，不能满足市场需求。
技术实现思路
有鉴于此，本申请提供了一种乳酸菌添加剂，所述乳酸菌添加剂作为牧草青贮添加剂，能快速降低牧草青贮pH值，使乳酸菌成为优势菌群，加快发酵成熟，增减少了氨态氮的产生以及增加了有机酸含量，提高了青贮饲料的发酵品质，从而提高牧草青贮饲料干物质含量，干物质回收率、粗蛋白含量，提升牧草青贮饲料的质量，具有广泛的应用前景。为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是一种乳酸菌添加剂，其特征在于，所述乳酸菌添加剂组分包括：组分A和组分B，所述组分A和所述组分B容积比为(1～2):(1～2)；所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A和所述组分B不相同；所述戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.15074，保藏日期为2017年12月18日；所述食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.15075，保藏日期为2017年12月18日；所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.15073，保藏日期为2017年12月18日。上述戊糖片球菌的16srDNA如SEQIDNO.1所示，上述食窦魏斯氏菌的16srDNA如SEQIDNO.2所示，上述植物乳杆菌的16srDNA如SEQIDNO.3所示。所述组分A和所述组分B容积比为2:1，或所述组分A为食窦魏斯氏菌，所述组分B为植物乳杆菌。优选的，所述乳酸菌添加剂组分还包括：组分C，所述组分A、所述组分B和所述组分C容积比为(1～2):(1～2):(1～2)；所述组分C选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A、所述组分B和所述组分C不相同。本专利技术还提供了上述的乳酸菌添加剂的应用，所述乳酸菌添加剂在制备牧草青贮添加剂中的应用。优选的，所述组分A、所述组分B和所述组分C容积比为1:2:2，所述组分A为戊糖片球菌，所述组分B为食窦魏斯氏菌，所述组分C为植物乳杆菌。优选的，所述乳酸菌添加剂在制备狼尾草属牧草青贮添加剂中的应用。优选的，所述狼尾草属牧草为狼尾草属牧草为桂牧1号杂交狼尾草、桂闽引象草。优选的，将乳酸菌添加剂接种到MRS液体培养基中，得到菌株添加液；将所述菌株添加液均匀喷洒到牧草样品中，混合均匀，袋装青贮，抽真空，于27～37℃发酵60天。本专利技术还提供了一种上述的乳酸菌添加剂的制备方法，包括：取所述乳酸菌添加剂组分混合既得；所述乳酸菌添加剂组分包括：组分A和组分B，所述组分A和所述组分B容积比为(1～2):(1～2)；所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A和所述组分B不相同；所述戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15074；所述食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15075；所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15073。优选的，所述制备方法还包括以下步骤：1)取牧草样品，稀释后吸取涂布至MRS固体培养基培养，挑出单菌落继续培养后，连续传代培养不少于2次，得到纯化的菌落；2)将步骤1)得到的所述纯化的菌落在乳酸菌固体培养基上恒温厌氧条件下培养后，通过革兰氏染色和过氧化氢酶接触反应，进行乳酸菌的鉴定，将鉴定后的乳酸菌加入含灭菌甘油的液体营养培养基中，并储存，得到分离纯化的乳酸菌；3)将步骤2)得到的所述分离纯化的乳酸菌进行菌种活化后，接种到MRS液体培养基中培养，得到菌液；测定所述菌液pH与OD值，根据测定结果进行筛选；筛选pH＝3.76，OD值＝1.641的菌液，得到初步筛选后的菌株A；筛选pH＝3.76，OD值＝1.641的菌液，得到初步筛选后的菌株B；筛选pH＝3.64，OD值＝1.732的菌液，得到初步筛选后的菌株C；4)将步骤3)得到的所述初步筛选后的菌株A进行厌氧培养后，进行单株菌的DNA提取，以提取的DNA为模板进行PCR扩增得到扩增产物，所述扩增产物即为所述食戊糖片球菌；将步骤3)得到的所述初步筛选后的菌株B进行厌氧培养后，进行单株菌的DNA提取，以提取的DNA为模板进行PCR扩增得到扩增产物，所述扩增产物即为所述食窦魏斯氏菌；将步骤3)得到的所述初步筛选后的菌株C进行厌氧培养后，进行单株菌的DNA提取，以提取的DNA为模板进行PCR扩增得到扩增产物，所述扩增产物即为所述植物乳杆菌。优选的，所述以提取的DNA为模板进行PCR扩增得到扩增产物过程具体为：以上游引物：5，-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，下游引物：5，-GGTTACCTTGTTACGACTT-3，为特异性引物对提取的DNA为模板进行PCR扩增得到扩增产物，所述PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min后，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸90s，循环30次，再72℃延长5min。优选的，所述制备方法还包括：将步骤4)得到的所述戊糖片球菌、所述食窦魏斯氏菌和所述植物乳杆菌通过生理生化测定、耐盐试验、不同温度试验、耐酸试验和糖发酵试验评价试验进行分析。优选的，所述制备方法还包括：将步骤4)得到的所述戊糖片球菌、所述食窦魏斯氏菌和所述植物乳杆菌进行16SrDNA序列分析。优选的，所述步骤还具体包括：1)取牧草样品，加入无菌蒸馏水，稀释成10-1，10-3和10-5三个稀释度的样品稀释液；吸取样品稀释液涂布至MRS固体培养基培养，连续传代培养2次，得到纯化的菌落；2)将步骤1)得到的所述纯化的菌落在乳酸菌固体培养基上37℃恒温厌氧条件下培养24h后，通过革兰氏染色和过氧化氢酶接触反应，进行乳酸菌的鉴定，将鉴定后的乳酸菌加入含灭菌甘本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳酸菌添加剂，其特征在于，所述乳酸菌添加剂组分包括：组分A和组分B，所述组分A和所述组分B容积比为(1～2):(1～2)；所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A和所述组分B不相同；所述戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15074；所述食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15075；所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15073。

【技术特征摘要】
1.一种乳酸菌添加剂，其特征在于，所述乳酸菌添加剂组分包括：组分A和组分B，所述组分A和所述组分B容积比为(1～2):(1～2)；所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A和所述组分B不相同；所述戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15074；所述食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15075；所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15073。2.权利要求1所述的乳酸菌添加剂，其特征在于，所述乳酸菌添加剂组分还包括：组分C，所述组分A、所述组分B和所述组分C容积比为(1～2):(1～2):(1～2)；所述组分C选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A、所述组分B和所述组分C不相同。3.权利要求1所述的乳酸菌添加剂的应用，其特征在于，所述乳酸菌添加剂在制备牧草青贮添加剂中的应用。4.权利要求1所述的乳酸菌添加剂的应用，特征在于，所述乳酸菌添加剂在制备狼尾草属牧草青贮添加剂中的应用。5.权利要求1所述的乳酸菌添加剂的应用，其特征在于，将乳酸菌添加剂接种到MRS液体培养基中，得到菌株添加液；将所述菌株添加液均匀喷洒到牧草样品中，混合均匀，袋装青贮，抽真空，于27～37℃发酵60天。6.一种权利要求1所述的乳酸菌添加剂的制备方法，其特征在于，包括：取所述乳酸菌添加剂组分混合既得；所述乳酸菌添加剂组分包括：组分A和组分B，所述组分A和所述组分B容积比为(1～2):(1～2)；所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分A和所述组分B不相同；所述戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15074；所述食窦魏斯氏菌(Weissellacibaria)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15075；所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)保藏于中国微生物菌种保藏管理委...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫艳红，关皓，张新全，李小铃，帅杨，李小梅，黄琳凯，聂刚，汪霞，黄婷，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51