一种腺嘌呤核苷酸转运体1的应用制造技术

一种腺嘌呤核苷酸转运体1的应用，涉及心血管领域。通过下调心肌细胞内ANT1巯基亚硝基化修饰的水平，有效抑制心肌肥大的发生。该方法包含利用半胱氨酸修饰位点突变的腺病毒转染心肌细胞，调控细胞内ANT1蛋白巯基亚硝基化修饰的表达，还包含利用半胱氨酸修饰位点突变的腺相关病毒特异性转染小鼠心脏组织，调控心肌组织内ANT1蛋白巯基亚硝基化修饰的表达。因此ANT1蛋白巯基亚硝基化修饰可以作为临床上治疗心肌肥大的一个新的重要靶标，在心肌肥大的防治中具有潜在的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种腺嘌呤核苷酸转运体1的应用
本专利技术属于心血管疾病治疗领域，具体涉及一种腺嘌呤核苷酸转运体1在心肌肥大治疗领域中的应用。
技术介绍
随着当今社会的飞速发展，心血管疾病作为人类健康“三大杀手”之首，正在日趋降低人类的生活质量，严重威胁人类的生命与健康。在众多心血管疾病中，心肌肥大的发生与发展受到人们的广泛关注。目前认为，心肌肥大是心力衰竭过程中一个重要的“过渡”过程，是心肌对于机械应激的一项代偿性反应。心肌肥大是心肌对心功能不全的适应性改变，初期代偿具有有益作用，后期进入失代偿产生不利影响，可以引起心律失常、心肌梗死、充血性心力衰竭等疾病的发生。心肌肥大的主要特征表现为：心肌细胞体积的肥大，细胞外基质的沉积，心肌纤维化的发生，以及伴有心肌内冠脉系统的形成异常等特征。众多研究表明：心肌肥大是心力衰竭的重要前期病变。预防、延缓或逆转心肌肥大的发生与发展，可以有效的预防或遏制心力衰竭的发生，提高病人的生存质量。因此，明确心肌肥大的发生原因和机制，找寻有效的防治心肌肥大的新的思路和干扰靶点，是临床上有效防治心肌肥大亟待解决的重要问题之一。腺嘌呤核苷酸转运体1（adeninenucleotidetranslocase,ANT1）是一种位于线粒体内膜的跨膜蛋白，约占整个线粒体蛋白含量的10%，分子量约为3万道尔顿，以二聚体形式存在，其同型异构体在人类为ANT1、ANT2、ANT3及ANT4。ANT1是心肌线粒体内膜上含量丰富的多肽，参与细胞质与线粒体基质ADP/ATP的转运，偶联细胞的产能和耗能，在调控心肌细胞能量转化过程中发挥着重要的作用。同时ANT1也是线粒体通透性转运孔（mitochondrialpermeabilitytransitionpore,mPTP）的关键组成蛋白，ANT1分子构象的改变，尤其是其相邻巯基的氧化还原状态明显影响mPTP的开关，从而影响线粒体膜电位、膜通透性、线粒体功能。mPTP打开后可增加促凋亡因子的释放，从而激活Caspase家族蛋白活性，引起细胞凋亡。因此ANT1是一种具有能量转运、线粒体功能调控、凋亡调节等多种功能的载体蛋白，在机体中发挥着重要的生理作用。但是ANT1的巯基亚硝基化修饰在心血管疾病中的作用及其机制目前尚未有任何相关的研究和报道。
技术实现思路
解决的技术问题：本专利技术提供一种腺嘌呤核苷酸转运体1（ANT1）的应用，通过下调心肌细胞内ANT1巯基亚硝基化修饰的水平，有效抑制心肌肥大的发生。该方法包含利用半胱氨酸修饰位点突变的腺病毒转染心肌细胞，调控细胞内ANT1蛋白巯基亚硝基化修饰的表达，还包含利用半胱氨酸修饰位点突变的腺相关病毒特异性转染小鼠心脏组织，调控心肌组织内ANT1蛋白巯基亚硝基化修饰的表达。技术方案:腺嘌呤核苷酸转运体1作为生物标志物在制备预防检测心肌肥厚试剂盒中的应用。下调腺嘌呤核苷酸转运体1巯基亚硝基化修饰水平的生物材料在制备治疗心肌肥大药物中的应用。上述生物材料半胱氨酸修饰位点突变的腺病毒或腺相关病毒。上述半胱氨酸位于腺嘌呤核苷酸转运体1第160位上（Cys160）。上述腺病毒为ad-C160A或aav9-ANT1-C160A腺相关病毒。有益效果：利用向心肌细胞内转染半胱氨酸修饰位点突变的腺病毒和向心肌组织内转染半胱氨酸修饰位点突变的腺相关病毒，下调细胞和组织内ANT1蛋白巯基亚硝基化修饰的表达水平，可有效抑制心肌肥大的发生。附图说明图1为细胞心肌肥大模型中ANT1修饰水平图：乳大鼠原代心肌细胞给予AngII（血管紧张素II）刺激48h，构建心肌细胞肥大模型，Biotin-switch检测ANT1巯基亚硝基化修饰水平。**P<0.01。图2为动物心肌肥厚模型中ANT1修饰水平图：利用野生型（WT）CB7BL/6小鼠行假手术（sham）和主动脉缩窄（TAC）手术，构建小鼠的心肌肥大模型。术后4周，收取两组小鼠的心肌组织，Biotin-switch检测心肌组织ANT1巯基亚硝基化修饰水平。*P<0.05。图3A为质谱筛选ANT1第57位半胱氨酸位点修饰位点图；图3B为质谱筛选ANT1第129位半胱氨酸位点修饰位点图；图3C为质谱筛选ANT1第160位半胱氨酸位点修饰位点图；由图3A-C可看出利用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术，在自发性高血压大鼠（SHR）及对照鼠WKY心肌组织中，Biotin-switch检测ANT1巯基亚硝基化修饰，筛选ANT1的巯基亚硝基化修饰位点。图4为293T细胞筛选ANT1修饰位点图：构建ANT1半胱氨酸第57、129、160和257位点突变质粒（C57A、C129A、C160A、C257A）转染293T细胞，Biotin-switch检测细胞内ANT1巯基亚硝基化修饰水平。图5为ANT1巯基亚硝基化修饰对心肌细胞肥大基因ANP、BNP表达水平的调控图：构建ANT1野生型腺病毒（AdWT）、第160位半胱氨酸位点突变的腺病毒（AdC160A）及对照组腺病毒（AdGFP）转染原代心肌细胞，AngII刺激48h，通过RT-PCR检测细胞内肥大基因ANP（心房利尿肽，atrialnatriureticpolypeptide），BNP（脑利尿肽，brainnatriureticpolypeptide）的表达情况。*P<0.05。#P<0.05。图6为ANT1巯基亚硝基化修饰对心肌细胞表面积的调控图：构建ANT1野生型腺病毒（AdWT）、第160位半胱氨酸位点突变的腺病毒（AdC160A）及对照组腺病毒（AdGFP）转染原代心肌细胞，AngII刺激48h，通过α-actinin的免疫荧光染色检测细胞的面积大小。图7为ANT1第160位半胱氨酸位点突变对TAC小鼠心功能的影响图：构建ANT1野生型腺相关病毒（aav9-ANT1WT）及第160位半胱氨酸位点突变的腺相关病毒（aav9-ANT1C160A）尾静脉注射C57BL/6小鼠，4周后行TAC手术构建小鼠的心肌肥大模型，术后4周，检测小鼠心脏功能及心脏肥厚相关指标。***P<0.005。###P<0.005。##P<0.01。图8为ANT1第160位半胱氨酸位点突变对TAC小鼠心脏指标的影响图：构建ANT1野生型腺相关病毒（aav9-ANT1WT）及第160位半胱氨酸位点突变的腺相关病毒（aav9-ANT1C160A）尾静脉注射C57BL/6小鼠，4周后行TAC手术构建小鼠的心肌肥大模型，术后4周收取小鼠心脏组织检测心脏肥厚水平。***P<0.005。**P<0.01。#P<0.05。图9为ANT1第160位半胱氨酸位点突变对TAC小鼠心脏ANP、BNP表达的调控图：构建ANT1野生型腺相关病毒（aav9-ANT1WT）及第160位半胱氨酸位点突变的腺相关病毒（aav9-ANT1C160A）尾静脉注射C57BL/6小鼠，4周后行TAC手术构建小鼠的心肌肥大模型，术后4周，收取小鼠心脏组织，RT-PCR检测肥大基因ANP，BNP的表达情况。**P<0.01。##P<0.01。图10为ANT1第160位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.腺嘌呤核苷酸转运体1作为生物标志物在制备预防检测心肌肥厚试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.腺嘌呤核苷酸转运体1作为生物标志物在制备预防检测心肌肥厚试剂盒中的应用。2.下调腺嘌呤核苷酸转运体1巯基亚硝基化修饰水平的生物材料在制备治疗心肌肥大药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述生物材料半胱氨酸修饰位点突变...

【专利技术属性】
技术研发人员：季勇，唐欣，奈拉，刘洁琼，韩艺，谢利平，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32