本发明专利技术提供了具有受限制的免疫球蛋白重链基因座的小鼠，其中所述基因座的特征为具有单一多态性人源VH基因区段、多个人源DH基因区段和多个JH基因区段。本发明专利技术提供了制备与抗原(例如病毒抗原)结合的抗体序列的方法，包括使用所关注的抗原免疫小鼠，其中所述小鼠在内源性免疫球蛋白重链基因座包含单一人源VH基因区段、多个人源DH基因区段和多个JH基因区段。
Mice with restricted immunoglobulin heavy chains
The present invention provides a mouse with a restricted immunoglobulin heavy chain loci, in which the loci are characterized by a single polymorphic human source VH gene section, a multiple source DH gene section, and a plurality of JH segments. The present invention provides a method for preparing an antibody sequence associated with an antigen (such as a virus antigen), including the use of an antigen immunized mouse of concern, in which the mice in the endogenous immunoglobulin heavy chain loci contain a single human source VH gene section, a multiple source DH gene region segment, and a plurality of JH gene segments.
【技术实现步骤摘要】
具有受限制的免疫球蛋白重链的小鼠本申请为申请日为2012年10月17日，申请号为201280062449.X的中国申请的分案申请。原申请要求申请日为2011年10月17日的美国临时专利申请号61/547,974、申请日为的2012年2月13日的美国临时专利申请号61/597,969以及申请日为2012年6月12日的美国临时专利申请号61/658,459的优先权，其全部内容通过引用并入本申请。专利
基因修饰免疫球蛋白重链可变(V)区基因座(或在转基因中)以从受限数量的免疫球蛋白重链可变(VH)区段(或单一VH区段)和/或其变体中制备抗体的非人动物。具有来源于单一免疫球蛋白重链可变基因区段例如人源免疫球蛋白VH1-69基因区段或人源VH1-2基因区段的重链可变结构域的非人动物。在非人动物中制备用于与病原体包括人病原体结合的抗体序列的方法。
技术介绍
非人动物例如小鼠已经被基因修饰为制备抗体序列方法中的有用工具，其中抗体序列用于抗体依赖的人体治疗。具有人源化可变区基因座(例如VH、DH和JH基因以及VL和JL基因)的小鼠可以用于生成在抗体治疗中使用的同源重链和轻链可变结构域。可以获得其他小鼠用于生成具有同源重链和轻链的全人源抗体。人体抗体治疗是基于针对某些预定抗原的所需特性设计的。使用预定抗原免疫人源化小鼠，并且使用经免疫的小鼠生成抗体群以便从中鉴定具有所需结合特性的高亲和性同源重链和轻链可变结构域。一些人源化小鼠，例如仅在内源性小鼠基因座的可变区人源化的小鼠，产生在特征和数量上与野生型小鼠B细胞群类似的B细胞群。结果，在这些用于筛选抗体的小鼠中获得了极为大量和多样性的B细胞群。这些B细胞群反映出大量不同免疫球蛋白的重排，并可以从中鉴定具有最为需要特性的重链和轻链可变结构域。但并不是所有抗原激发的免疫应答均显示出来自各种可变(V)区段的非常大量的重排。也就是说，人体对某些抗原的体液免疫应答明显受到了限制。这种限制反映为对B细胞的克隆选择，即选择那些仅表达某些对特定抗体具有非常高的亲和性和特异性结合的V区段的B细胞。这种抗原中的一些具有临床意义，即大量公知的人类病原体。有一种假设，在人免疫应答中表达的V区段是这样一种V区段，当其与人源D和人源J区段结合，较之在针对该抗原的人源抗体应答中未观察到的随机选择的V区段，更有可能生成有用的高亲和性抗体。根据一种假说，几千年以来的自然选择已经选择出了最有效的基础，根据其可以设计出用于中和人类病原体最有效的武器——克隆选定的V区段。本领域中需要更多和更优越的用于结合和/或中和抗原(如上文所述的病原体)的抗体。需要更加迅速地由所选定的V区段生成有用的序列，选定的V区段包括多态性和/或体细胞突变选定的V区段，以及更加迅速地生成有用的B细胞群，其具有带多种D和J区段的V区段的重排，包括该重排的体细胞突变版本，并且特别是具有独特的和有用的CDR3的重排。需要一种生物系统例如非人动物(例如小鼠、大鼠、家兔等)，其能够从预定的V区段生成与例如现有经修饰的动物所能达到的相比更大数量和种类的具有治疗用途的抗体可变区序列。需要一种改造过的生物系统，其针对来源于受限制的、预定V区段的克隆选择抗体的可变序列具有定型的体液免疫系统，所述预定的V区段包括但不限于同源的人源重链和轻链可变结构域，所述系统可用于生产针对所选抗原(包括某些人类病原体)的人源抗体依赖的治疗剂。在本领域中需要一种能够中和病毒抗原例如HIV和HCV的治疗性抗体，包括抗原特异性抗体，其含有来源于单一人源可变区段的重链，以及由所选定的治疗性抗体序列生产多样性来源抗体的系统。还需要用于制备有用抗体的进一步的方法和非人动物，所述抗体包括来源于单一人源VH区段并且具有多样性CDR序列集合的重链库，并且包括表达同源的人源轻链可变结构域的这种重链。还需要用于选择基于免疫球蛋白的结合蛋白的CDR的方法，该结合蛋白提供更多的供选择的结合蛋白的多样性，以及更多的免疫球蛋白可变结构域的多样性，其包括用于生成体细胞突变并克隆选择的免疫球蛋白可变结构域的组合物和方法，这些免疫球蛋白可变结构域可以在例如制备人用治疗剂中使用。专利技术概述本申请提供了一种基因修饰的免疫球蛋白基因座，所述基因座包含具有有限数量的不同重链可变区基因区段(即V基因、VH基因、VH基因区段或V基因区段)，例如不超过一个、两个或三个不同的V基因；或者不超过一个V基因区段家族成员以例如单一拷贝或多个拷贝中和/或包含一种或多种多态性存在。本申请提供了一种基因座，所述基因座能够重排并且形成编码重链可变结构域的基因，所述基因来源于受限制的(例如是单一VH基因区段或选自多个单一VH基因区段的多态性变体)VH基因库。本申请提供了一种经修饰的免疫球蛋白基因座，其包括了包含人源免疫球蛋白序列的基因座，例如可操作地与人源或者(或人源/非人源嵌合)非人源免疫球蛋白恒定序列(并且与例如D和/或J区段可操作地连接)连接的人源V区段。本申请提供了一种经修饰的基因座，所述基因座包括单一VH基因区段的多个拷贝，其中一个或多个拷贝可以包含多态性的变体。提供了一种经修饰的基因座，所述基因座包括单一VH区段的多个拷贝，其可操作地与一个或多个D区段以及一个或多个J区段连接，其可操作地与非人源免疫球蛋白恒定序列例如小鼠或大鼠序列连接。本申请还提供了一种包含这种人源化基因座的非人动物。本申请提供了一种非人动物，所述动物具有降低的免疫球蛋白重链可变基因区段复杂性(即具有有限数量的重链可变基因区段，或具有受限制的重链可变基因库)，其中所述降低的免疫球蛋白重链可变基因区段复杂性表征为存在不超过一个或者不超过两个重链可变基因区段，并且其中所存在的重链可变基因可操作地与人源或非人源恒定区序列连接。本申请提供了一种非人动物，所述动物具有降低的免疫球蛋白重链可变基因区段复杂性(例如单一VH基因区段，或者具有作为单一VH基因区段多态性变体的有限数量的VH基因区段)，其中所述降低的免疫球蛋白重链可变基因区段复杂性表征为存在单一VH基因区段或者多个作为单一VH基因区段多态性形式的VH基因区段(例如在人体内与高拷贝数和/或多态性相关的VH基因区段)，并且其中所存在的重链可变基因可操作地与人源或非人源恒定区序列连接。在多种实施方式中，所述存在的重链可变基因可操作地与非人动物种系中的一个或多个D和/或一个或多个J基因区段连接。本申请提供了一种非人动物，所述动物包含免疫球蛋白重链可变基因座(例如在内源性非人动物重链可变基因座的转基因上或作为其插入或取代)，其中免疫球蛋白重链可变基因座包括可操作地与D和/或J基因区段连接的单一VH区段。在多种实施方式中，在所述非人动物的内源性免疫球蛋白重链可变基因基因座上，所述单一VH基因区段可操作地与一个或多个D和/或一个或多个J基因区段连接。本申请提供了一种非人动物，所述动物在其免疫球蛋白重链可变区基因座被修饰以缺失全部或基本上全部(例如全部功能性区段，或几乎全部功能性区段)内源性免疫球蛋白VH区段并且在所述非人动物的内源性免疫球蛋白重链可变区基因座上包含可操作地与D和J区段或者J区段连接的人源VH1-69区段(或者人源VH1-2区段)。本申请还提供了一种非人动物，所述动物在其免疫球蛋白重链可变区基因座被修本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有受限制的免疫球蛋白重链基因座的小鼠，其特征在于，所述受限制的免疫球蛋白重链基因座存在单一人源VH基因区段、一个或多个人源DH基因区段和一个或多个人源JH基因区段，其中所述单一人源VH基因区段是多态性的VH基因区段。
【技术特征摘要】
2011.10.17 US 61/547,974;2012.02.13 US 61/597,969;1.一种具有...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·麦克唐纳，J·麦克沃克，C·古雷尔，K·A·霍西阿瓦，A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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