一种长链非编码RNA及其应用和生物制品制造技术

本公开的实施例涉及一种长链非编码RNA及其应用、生物制品，长链非编码RNA具有SEQ ID No.1所示的转录序列或SEQ ID No.1所示的转录序列的同源序列或SEQ ID No.1所示的转录序列的修饰序列。申请人进行的实验证实，本公开实施例的长链非编码RNA在激素抵抗性前列腺癌(CRPC)中的表达明显高于正常前列腺组织细胞和激素非抵抗性前列腺癌细胞。本公开的实施例还涉及所述长链非编码RNA作为分子标志物在诊断和治疗激素抵抗性前列腺癌(CRPC)中的应用，例如所述长链非编码RNA作为预测CRPC进展情况及其作为靶点在CRPC治疗中的应用，沉默所述长链非编码RNA的表达可显著抑制CRPC肿瘤细胞的增殖、迁移及癌细胞的扩散。 1

【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNA及其应用和生物制品
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种长链非编码RNA及其在诊断和治疗激素抵抗性前列腺癌中的应用。
技术介绍
前列腺癌是一种男性高发恶性肿瘤，其死亡率仅次于肺癌。近年来，随着人们生活方式的改变、人口的老龄化，前列腺癌的发病率呈明显上升趋势，上海市的统计数据显示，前列腺癌的发病率已经从1991年的2.9/10万男性上升至目前的12.6/10万男性，成为严重危害我国男性身体健康的重要疾病之一。
技术实现思路
在一个方面，本公开的实施例提供了一种长链非编码RNA，具有SEQIDNo.1所示的转录序列或SEQIDNo.1所示的转录序列的同源序列或SEQIDNo.1所示的转录序列的修饰序列。在本公开的一些实施例中，所述同源序列的同源性不低于90％。在本公开的一些实施例中，所述修饰序列为经硫代修饰或/和甲氧基修饰。在另一方面，本公开的实施例提供了上述长链非编码RNA的应用，包括作为分子标志物在诊断或治疗激素抵抗性前列腺癌的生物制品中的应用。在又一方面，本公开的实施例提供了一种诊断激素抵抗性前列腺癌的生物制品，所述生物制品包括试剂，所述试剂包括用于检测生物样品中长链非编码RNA表达量的试剂，所述长链非编码RNA为上述的长链非编码RNA。在本公开的一些实施例中，所述生物制品为试剂盒，所述试剂盒包括所述试剂。在本公开的一些实施例中，所述试剂包含对所述长链非编码RNA具有特异性的标记物。在本公开的一些实施例中，所述标记物包括所述长链非编码RNA的引物组，或荧光标记的所述长链非编码RNA的引物组，或结合所述长链非编码RNA的化合物。在本公开的一些实施例中，所述长链非编码RNA的引物组是SEQIDNo.2所示的序列和SEQIDNo.3所示的序列组成的引物对；或SEQIDNo.6所示的序列和SEQIDNo.7所示的序列组成的引物对。在还一方面，本公开的实施例提供了一种用于治疗激素抵抗性前列腺癌的生物制品，所述生物制品是药物，所述药物包括用于抑制或沉默所述长链非编码RNA表达的成分，所述长链非编码RNA为上述的长链非编码RNA。本公开的其它方面和技术细节，结合具体实施方式部分的描述将为本领域技术人员所理解。为便于撰写，在下述中，以LncRNA-LOC100代表上述长链非编码RNA。附图说明图1为LncRNA-LOC100沉默后实验例与对照组的前列腺癌DU145细胞的生长图，其中A、B、C依次为对照组、siRNA1、siRNA2中的LncRNA-LOC100的生长情况图，E、F分别为对照组、干扰RNA1、干扰RNA2中的LncRNA-LOC100的细胞存活率、LncRNA-LOC100的表达率示意图。图2为LncRNA-LOC100沉默后实验例与对照组的DU145肿瘤细胞迁移对照图，其中A为对照组没有采取措施，B、C为采用siRNA1、siRNA2沉默LncRNA-LOC100，D显示了细胞迁移率的对比。图3为LncRNA-LOC100沉默后实验例与对照组的DU145肿瘤细胞凋亡流式细胞检测结果，其中A为对照组没有采取措施，B、C为采用siRNA1、siRNA2沉默LncRNA-LOC100，D显示了凋亡细胞数的对比。图4为LncRNA-LOC100沉默后实验例与对照组的DU145肿瘤细胞细胞生长速率，其中A、B、C分别为对照组、采用siRNA1、siRNA2沉默LncRNA-LOC100的DU145的细胞体积、细胞体积随周数、DU145中LncRNA-LOC100的变化对照。图5为LncRNA-LOC100沉默后建立肿瘤模型与对照组的肿瘤模型的DU145肿瘤细胞细胞数量，其中A、B、C、D分别为对照组、采用siRNA1、siRNA2沉默LncRNA-LOC100的DU145细胞的数量变化对照、采用siRNA1沉默LncRNA-LOC100的DU145细胞的数量变化、采用siRNA2沉默LncRNA-LOC100的DU145细胞的数量变化、对照组、采用siRNA1、siRNA2沉默LncRNA-LOC100的DU145细胞的抑制率变化对照。图6为脾脏组织切片HE染色图。其中，A、B、C依次为对照组、采用siRNA1、siRNA2沉默LncRNA-LOC100后的组。图7为实时定量PCR检测LncRNA-LOC100在33例前列腺癌病人癌组织和癌旁组织中的表达情况，其中N指癌旁组织，C指前列腺癌组织。具体实施方式在专利技术人所知的技术中，DU145作为一种CRPC癌细胞，是从前列腺癌脑转移肿瘤中分离出来的，分化程度低，为雄激素非依赖的前列腺癌细胞，具有强大的转移潜能，缺乏内源性的雄激素受体的表达。DU145具有显著的间皮细胞特性，是研究上皮细胞间质转化态致肿瘤细胞转移潜能改变的理想的细胞资源。有效地抑制DU145肿瘤细胞的增殖以及转移，可对抑制前列腺癌有明显效果。对DU145肿瘤细胞抑制的有效靶点的研究具有重要意义。长链非编码RNA(LncRNA)是一种一般不编码蛋白或编码蛋白能力有限的碱基序列，其在表观遗传学、转录调控、转录后调控等多种层面调控基因表达，在多种生物学进程中发挥重要作用，包括人类基因调节、细胞生长分化以及肿瘤疾病的发生、脂肪代谢等。部分研究发现，有些长链非编码RNA与癌症的发生发展存在密切的关系，长链非编码RNA表达水平上的差异或某些癌症类型特异性有关，因此如果能够获得一种与激素抵抗性前列腺癌(CRPC)相关联的LncRNA，将有助于开发新的诊断或治疗CRPC的方法。在下述实施例中，所涉及的实验操作均可按照《分子克隆实验指南(第三版)》(MolecularCloning:ALaboratoryManual,3red黄培堂等译，科学出版社.2002.8)中所述条件和方法进行。其它未详细描述的试验方法如无特殊说明，均为本领域的技术人员所熟知的常规方法。下面就各相关试验操作简述如下：细胞培养DU145肿瘤细胞购自ATCC公司，细胞培养所用DMEM培养基和胎牛血清及消化细胞所用的胰蛋白酶均为SigmaAldrich公司产品。DU145细胞DMEM培养基中培养。在DMEM培养基中加入10％FBS，100U/ml青霉素和100mg/ml的链霉素，在37℃含5％CO2的恒温培养箱中培养。每天更换培养基，当细胞密度长满瓶底时进行传代。总RNA的提取DU145肿瘤细胞提总RNA，RNA经逆转录成cDNA后，采用PCR进行扩增。将生长状态良好的DU145肿瘤细胞按2×105个细胞/孔接种于6孔板中，将6孔板置于培养箱中，进行培养；将DU145肿瘤细胞从细胞培养箱中取出，吸出培养基，用无菌PBS洗两次，把PBS全部吸出；往细胞培养皿里加入Trizol试剂，用移液器吹打，使细胞全部裂解；把用Trizol试剂裂解的细胞转入无RNA酶的EP管中。用移液器吹打，使细胞全部裂解；把用Trizol试剂裂解的细胞转入无RNA酶的EP管中，氯仿，震荡，静置低温离心；吸取上清转入新的EP管中，异丙醇，冰上静置；离心；弃去上清，得到的沉淀即为RNA，用DEPC酒精洗沉淀；离心；弃去上清，待沉淀自然风干后，加入DEPC水进行溶解；测定提取的总RNA的浓度。PCR定量分析采用GeneCopoeia公司的mRNA反转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长链非编码RNA，其特征在于，具有SEQ ID No.1所示的转录序列或SEQ ID No.1

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA，其特征在于，具有SEQIDNo.1所示的转录序列或SEQIDNo.1所示的转录序列的同源序列或SEQIDNo.1所示的转录序列的修饰序列。2.根据权利要求1所述的长链非编码RNA，其特征在于，所述同源序列的同源性不低于90％。3.根据权利要求1所述的长链非编码RNA，其特征在于，所述修饰序列为经硫代修饰或/和甲氧基修饰。4.权利要求1所述的长链非编码RNA的应用，其特征在于，包括作为分子标志物在诊断或治疗激素抵抗性前列腺癌的生物制品中的应用。5.一种诊断激素抵抗性前列腺癌的生物制品，其特征在于，所述生物制品包括试剂，所述试剂包括用于检测生物样品中长链非编码RNA表达量的试剂，所述长链非编码RNA为权利要求1所述的长链非编码RNA。6.根据权利要求5所述的生物制品，其特征在于，所述生物制品...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱沙，黄涛，李鸣，阮雪华，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41