一种协同抑制MITF和TRP1的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种协同抑制MITF和TRP1的组合物及其用途，所述组合物按摩尔质量比为0.11的比例由白藜芦醇和氧化白藜芦醇组成。实验证明，本发明专利技术的组合物协同抑制MITF和TRP1的作用，可用于治疗黄褐斑、痤疮后红斑、雀斑、老年斑、晒后修复及抗氧化。 1

Synergistic inhibition of MITF and TRP1 compositions and uses thereof

The present invention discloses a composition and use of synergistic inhibition of MITF and TRP1, and the composition of the compound is composed of resveratrol and resveratrol in proportion to 0.11. It has been proved by the experiment that the composition of the invention can be used to inhibit the effect of MITF and TRP1, and can be used for the treatment of chloasma, erythema after acne, freckles, senile plaques, after sunburn repair and antioxidation. One

【技术实现步骤摘要】
一种协同抑制MITF和TRP1的组合物及其用途
本专利技术涉及一种具有抗氧化活性的组合物，特别是涉及一种协同抑制MITF和TRP1的组合物及其用途。
技术介绍
黄褐斑是最常见的黑色素沉着性疾病,多发于中青年妇女脸部裸露的部位，影响美观，同时又难以治疗，是医学领域较难解决的一大疾病问题。其特点有：发病受多种因素影响(紫外线刺激、炎症反应等)、顽固、易复发。现在针对黄褐斑的治疗技术和祛斑产品繁多，大多成本高，费用昂贵；但是疗效差强人意，且几乎都伴有不良反应。黑色素合成是由复杂的调控系统调节的，小眼畸形相关转录因子(MITF)可调控酪氨酸基因家族(TYR和TRP1(人酪氨酸酶相关蛋白1))的表达，从而参与黑色素细胞中黑色素生成的调控。受紫外线照射刺激后的黑色素细胞中的MITF及其下游基因、酪氨酸酶和TRP1上调，可促进黑色素的合成，故抑制MITF和TRP1的表达可降低黑色素的合成，避免黄褐斑的产生。目前尚未有将白藜芦醇与氧化白藜芦醇组合成组合物协同用于抑制MITF和TRP1。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种协同抑制MITF和TRP1的组合物。本专利技术的第二个目的是提供一种协同抑制MITF和TRP1的组合物在制备具有抑制MITF和TRP1的药物或化妆品的应用。本专利技术的技术方案概述如下：一种协同抑制MITF和TRP1的组合物，按摩尔比为0.11的比例由白藜芦醇和氧化白藜芦醇组成。上述组合物在制备具有抑制MITF和TRP1的药物或化妆品的应用。本专利技术的优点：本专利技术的一种协同抑制MITF和TRP1的组合物，实验证明白藜芦醇与氧化白藜芦醇合用能达到协同增效的作用，减少了单组份使用时的用量。本专利技术的组合物可用于治疗黄褐斑、晒后修复及抗氧化。附图说明图1为白藜芦醇与氧化白藜芦醇摩尔比为0.11时对细胞内MITF和TRP1的抑制作用。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1一种协同抑制MITF和TRP1的组合物，按摩尔比为0.11的比例由白藜芦醇和氧化白藜芦醇组成。实施例2实施例1的组合物对细胞内MITF和TRP1的抑制作用。1材料与试剂1.1实验仪器实验仪器见表1表1实验所用仪器一览表1.2实验试剂实验所用试剂见表2表2实验所用试剂一览表2样品制备完全M254培养基的配制：5％胎牛血清的M254培养基，加入HMGS，体积含量为0.5％(不含抗生素)。样品母液的配制：以DMSO为溶剂，分别配制浓度为100mM的氧化白藜芦醇母液和白藜芦醇母液，备用。白藜芦醇样品的配制：取白藜芦醇100mM的母液0.6μL加入到10mL的完全M254培养基中混匀，得到6μM的白藜芦醇的溶液。氧化白藜芦醇样品的配制：取氧化白藜芦醇100mM的母液5.4μL加入到10mL的完全M254培养基中混匀，得到54μM的氧化白藜芦醇的溶液。白藜芦醇和氧化白藜芦醇组合物的配制：取白藜芦醇和氧化白藜芦醇100mM的母液分别0.6和5.4μL，加入到10mL的完全M254培养基中混匀，得到白藜芦醇和氧化白藜芦醇的浓度比为0.11μM的溶液。电泳缓冲液的配制：分别准确称取Tris3.03g，甘氨酸8.77g，SDS1g，加蒸馏水至1000mL溶解后至室温保存。转膜液的配制：分别准确称取甘氨酸2.9g，Tris5.8g，SDS0.37g，加入甲醇200mL，加蒸馏水至1000mL，调节pH值至8.3左右。1.5mol/LTris-HCl(pH＝8.8)溶液的配制：准确称取Tris45.43g，使用超纯水200mL溶解后，用浓盐酸调pH值至8.8，最后用超净水定容至250mL，高温灭菌后室温下保存。0.5mol/LTris-HCl(pH＝6.8)溶液的配制：准确称取Tris15.14g，使用超纯水200mL溶解后，用浓盐酸调pH值至6.8，最后用超净水定容至250mL，高温灭菌后室温下保存。1mol/LTris-HCl(pH＝7.5)溶液的配制：准确称取Tris30.29g，使用超纯水200mL溶解后，用浓盐酸调pH值至7.5，最后用超净水定容至250mL，高温灭菌后室温下保存。TBS溶液的配制：量取Imol/LTris-HCI(pH＝7.5)溶液10mL，准确称取NaCl8.8g，加蒸馏水至1000mL，保存备用。TBST溶液的配制：精密量取20％Tween201.65mL，量取TBS溶液700mL,混习后即可使用，现用现配。封闭液的配制：称取脱脂奶粉5g，加入TBST溶液100mL溶解后，调节封闭液pH值至7.3左右，放于4℃保存，使用时恢复室温，一次性使用。10％SDS溶液的配制：称取SDS粉末10g，加蒸馏水至1000mL使其在50℃下洛解，室温保存。如在长期保存下出现沉淀，加热溶化后仍可使用。10％AP溶液的配制：称取AP0.1g，用超净水1mL溶解后，4℃保存，保存时间为一周。3实验方法3.1人表皮黑色素细胞PIG1的培养人表皮黑色素细胞PIG1置于完全M254培养基中，于含5％CO2的37℃孵育箱中常规培养。用0.05％的胰酶消化细胞后，计数，接种于96孔板中，每孔个数为104个，置于孵育箱中培养24h。弃掉培养基加入100μL的PBS溶液，于300mJ的UVB下照射168s后，弃掉PBS溶液后向对应的96孔板中分别加入完全M254培养基(对照组)、加入步骤2配制的白藜芦醇样品(RES组)，加入步骤2配制的氧化白藜芦醇样品(OXY组)，加入步骤2配制的白藜芦醇和氧化白藜芦醇组合物(OXY+RES组)培养48h后收取蛋白。3.2总蛋白的提取、定量及变性3.2.1总蛋白的提取将3.1中各组96孔板中培养基弃去，加入预冷的PBS1mL洗涤1次，弃去PBS，每孔加入配好的工作液100μL(Ripa：蛋白酶抑制剂＝100:1)，在冰上孵育20min后转移至新的离心管中，14000×g条件下离心10min后取上清液至新的离心管中备用。3.2.2总蛋白的定量根据BCA蛋白定量试剂盒说明书做一条标准曲线。根据样品数计算所需BCA工作液总量，将BCA-A和BCA-B按照50：1的体积比配制工作液并充分混匀。在新的96孔板中每孔加入40μL(200μL)BCA工作液。取3.2.1中的上清液5μL(25μL)加入到BCA工作液中，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30min，冷却至室温后在562nm下用酶标仪测定吸光值，根据标曲计算浓度。须在3-5min内完成检测。3.2.3总蛋白的变性根据蛋白上样的浓度，加入5×蛋白上样缓冲液，涡旋混匀，置于水浴95℃煮7min，冷却至室温后放置于冰上备用，即得上样的样品。3.3采用western-blot方法检测MITF和TRP1蛋白3.3.1制胶与上样选择洁净的玻璃板固定于板架上。配制适量体积的分离胶(约7.5mL/板)，配制完成后摇匀立即灌胶，待胶面升至玻璃板中间刻度时(可达上层红色界面)停止灌胶，加入适量无水乙醇排气泡、压平液面。等待30min后，灌入现配好的积层胶(约4mL/板)。待积层胶灌入结束后立即插入梳子，形成进样孔。等待30min后，待积层胶凝固后，拔出梳子，拔梳子这一动作在电泳液中进行。之后向胶两端的进样孔各加入5μLMark溶液，其余各孔顺次加入3.2.3中对照组、OXY组、RES组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种协同抑制MITF和TRP1的组合物，其特征是按摩尔比为0.11的比例由白藜芦醇和

【技术特征摘要】
1.一种协同抑制MITF和TRP1的组合物，其特征是按摩尔比为0.11的比例由白藜芦醇和氧...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳，李欣，王昊，郭虹，杨珍，宋春敬，牟佳佳，宋丽丽，靳佳慧，刘园园，郝谜谜，李红艳，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津,12