一种初烤烟叶的石蜡切片方法技术

本发明专利技术公开了一种初烤烟叶的石蜡切片方法，该方法是将初烤烟叶样本依次进行包括复水I、固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡、复水II、染色、分色、复色、封片和烤干在内的步骤；主要改进是复水I步骤，该步骤能很好地改善烘烤后烟叶的细胞组织结构，使细胞内部结构疏松，便于制作石蜡切片，切片连续、完整，显微图片清晰，且制作的初烤烟叶石蜡切片展示的烟叶细胞学结构和特征不仅能反映出烘烤前的成熟程度，为适熟采收提供直观、准确的参考标准，而且还能用来评价初烤烟叶的柔软性，为调制后的烟叶分级提供简便、可靠的科学依据。

【技术实现步骤摘要】
一种初烤烟叶的石蜡切片方法
本专利技术涉及一种植物的石蜡切片方法，具体涉及一种初烤烟叶的石蜡切片方法，属于植物显微观测

技术介绍
烟叶外观质量评价是收购和调拨期间通过感官和经验对烟叶质量做出初步判定的重要手段，快速判定烟叶外观质量对于指导烟叶生产与分级、提升原料工业可用性、提高叶组配方效率具有重要意义，是卷烟工业企业原料质量保障体系中的最重要因素之一。生产实践上，对烤烟外观质量的判定一般采用包括部位、成熟度、组织结构与发育水平、烟叶厚度、颜色与光泽、油份、含青与杂色水平、烟叶长度与残伤水平等指标组成的评价体系。专业分级员都必须经过一定时间的专业培训后，才能较好地掌握烟叶分级。但对于大多数非专业人员尤其是烟农来说，由于判定指标过多，且一些指标易受到外界因素的干扰产生混淆，他们掌握起来往往较难，经常导致收购时各个等级的烟叶相互混杂，不能满足卷烟工业对等级质量和纯度控制的要求。目前，一些卷烟工业企业在多年对烟叶原料研究的基础上，凝练出“黄、亮、软”的烟叶用料特点，其中“软”是这一指标体系的核心，烟叶的柔软性是指烘烤后烟叶的柔软程度，烟叶柔软性可以通过抓握烟叶时感受叶面与手掌的摩擦力、叶面弯曲力以及松开后烟叶复原的程度来判断烟叶品质的好坏。目前，对烘烤后烟叶柔软程度的判断纯粹是凭经验通过手摸感知将烟叶初步分为柔软、尚柔软和僵硬三个层次，还没有定性的、可靠的判定依据和方法。另外，烤烟的成熟采收是形成烟叶质量、产量不可或缺的重要环节，而成熟度的把握是烟叶品质形成的核心因素。正确识别和判断烟叶成熟度，采收适熟烟叶对烘烤过程中烟叶变黄干燥速度以及烤后烟叶质量具有非常重要的影响。目前，田间采收和烘烤后分级中对成熟度的判断，只能依据烟叶的外观特征来进行。烤烟成熟度与叶片组织结构的变化紧密相关，因而通过烟叶组织结构的细胞学观察来判断成熟度、确定田间适熟烟叶的采收标准不失是一种行之有效的科学判定方法。石蜡切片法由于操作简单、价格低廉、可连续制片等特点，一直是观察细胞组织的形态结构及其动态变化的理想生物学研究技术。常规的石蜡切片制作过程包括：固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、染色、透明以及封片等步骤，在生物学的许多领域都得到了广泛的应用。已有报道采用石蜡切片技术来观察新鲜烟叶的组织结构(刘国敏，邵兰军，高卫锴等.种植密度和施氮量对烟叶组织结构发育及化学成分的影响.华北农学报，2016,31(4)：206-213)，但经过烘烤后烟叶的叶片组织由生活状态逐渐转变为死亡状态，在这一过程中细胞中的大分子物质及细胞结构发生了显著变化，叶片干燥变脆，常规的石蜡切片方法展示的初烤烟叶的细胞组织结构和特征不完整，各种烟叶的石蜡切片显微图基本相似，无法反映出初烤烟叶的品质优劣和部位等特征与信息。
技术实现思路
针对常规石蜡切片方法无法反映初烤烟叶的品质优劣和部位等细胞学特征与信息的问题，本专利技术的目的是在于提供一种能清晰获得初烤烟叶的细胞学特征与信息的初烤烟叶的石蜡切片方法，该方法有利于指导田间适熟烟叶的采收和分级中成熟度的判断，提高优质初烤烟叶的比例，并为“黄、亮、软”用料体系中柔软性这一核心指标的评价提供科学依据。为了实现上述技术目的，本专利技术提供了一种初烤烟叶的石蜡切片方法，该方法是初烤烟叶样本依次进行包括复水I、固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡、复水II、染色、分色、复色、封片和烤干在内的步骤；所述复水I的过程为：将初烤烟叶样本置于35～45℃温水中浸泡18～30h，再置于50～60℃热水中浸泡18～30h。优选的方案，所述固定的过程为：将复水I后的样本置于FAA溶液中浸泡24～48h。FAA是有固定组成和比例的公知溶液。优选的方案，所述脱水的过程为：固定后的样本依次在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在65～75wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在75～85wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在88～92wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，94～96wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在100wt％的乙醇溶液中浸泡两次以上，每次0.5～1.5h。较优选的方案，所述脱水的过程为：固定后的样本依次在50wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在70wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在80wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在90wt％的乙醇溶液中浸泡1h，95wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在100wt％的乙醇溶液中浸泡两次，每次1h。优选的方案，所述透明的过程为：脱水后的样本先置于体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，再置于二甲苯中浸泡两次以上，每次0.5～1.5h。较优选的方案，所述透明的过程为：脱水后的样本先置于体积比为1:1的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡1h，再置于二甲苯中浸泡两次，每次1h。优选的方案，所述透蜡、包埋和切片的过程为：脱水后的样本采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡2次以上，每次1.5～2h，透蜡后的样品用石蜡包埋，切片。较优选的方案，所述透蜡、包埋和切片的过程为：脱水后的样本采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡2次，每次1.5～2h，透蜡后的样品用石蜡包埋，切片。优选的方案，所述脱蜡的过程为：切片后的样本先置于二甲苯中浸泡30～40min，再置于体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡20～30min。较优选的方案，所述脱蜡的过程为：切片后的样本先置于二甲苯中浸泡30～40min，再置于体积比为1:1的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡20～30min。优选的方案，所述复水II的过程为：将脱蜡后的样本依次在100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在94～96wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在80～90wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在70～80wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在60～70wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min。较优选的方案，所述复水II的过程为：将脱蜡后的样本依次在100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在95wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在85wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在75wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在65wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在50wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min。优选的方案，所述染色的过程为：复水II后的样本置于0.5～1.5wt％番红花溶液中浸泡1.5～2.5h。较优选的方案，所述染色的过程为：复水II后的样本置于1wt％番红花溶液中浸泡2h。优选的方案，所述分色和复色的过程为：染色后的样本置于水中洗涤后，依次在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在65～75wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在75～85wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在88～92wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在0.5～1.5wt％的固绿溶液中浸泡30～40s，在94～96wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min并重复1次以上，100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min并重复1次以上，在体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡1～2min，在二甲苯中浸泡1～2min并重复1次以上。较优选的方案，所述分色和复色的过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：初烤烟叶样本依次进行包括复水I、固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡、复水II、染色、分色、复色、封片和烤干在内的步骤；所述复水I的过程为：将初烤烟叶样本置于35～45℃温水中浸泡18～30h，再置于50～60℃热水中浸泡18～30h。

【技术特征摘要】
1.一种初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：初烤烟叶样本依次进行包括复水I、固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡、复水II、染色、分色、复色、封片和烤干在内的步骤；所述复水I的过程为：将初烤烟叶样本置于35～45℃温水中浸泡18～30h，再置于50～60℃热水中浸泡18～30h。2.根据权利要求1所述的初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：所述固定的过程为：将复水I后的样本置于FAA溶液中浸泡24～48h。3.根据权利要求1所述的初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：所述脱水的过程为：固定后的样本依次在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在65～75wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在75～85wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在88～92wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，94～96wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在100wt％的乙醇溶液中浸泡两次以上，每次0.5～1.5h。4.根据权利要求1所述的初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：所述透明的过程为：脱水后的样本先置于体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，再置于二甲苯中浸泡两次以上，每次0.5～1.5h。5.根据权利要求1所述的初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：所述透蜡、包埋和切片的过程为：脱水后的样本采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡2次以上，每次1.5～2h，透蜡后的样品用石蜡包埋，切片。6.根据权利要求1所述的初烤烟叶的石蜡切片方法，其特征在于：所述脱蜡的过程为：切片后的样本先置于二甲苯中浸泡30～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐向丽，周立新，宋卫武，王雪云，周文辉，郭山虎，蒲文宣，易建华，
申请(专利权)人：湖南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43