用于鉴定用于诊断和治疗TLR4依赖性障碍的患者群体的方法和组合物技术

本发明专利技术主要涉及用于鉴定用于诊断和治疗Toll样受体4(TLR4)依赖性障碍的患者群体的方法和组合物。具体地讲，本发明专利技术涉及检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和瓜氨酸化肽的水平，以鉴定患有TLR4依赖性疾病的患者和鉴定可能应答于抗TLR4疗法的患者。本发明专利技术还涉及使用干扰或者以其他方式拮抗TLR‑4信号传导的药物(包括中和性抗TLR4抗体)，在具有升高水平的ACPA和瓜氨酸化肽的患者中治疗障碍、延缓其进展或者以其他方式改善其症状的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于鉴定用于诊断和治疗TLR4依赖性障碍的患者群体的方法和组合物相关申请本申请要求2015年8月6日提交的美国临时申请第62/201918号的权益，其内容通过参照以其全部结合于此。专利
本专利技术主要涉及用于鉴定用于诊断和治疗Toll样受体4(TLR4)依赖性障碍的患者群体的方法和组合物。具体地讲，本专利技术涉及检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平，以鉴定患有TLR4依赖性疾病的患者和鉴定可能应答于抗TLR4疗法的患者。本专利技术还涉及使用干扰或者以其他方式拮抗TLR-4信号传导的药物(包括中和性抗TLR4抗体)，在具有升高水平的ACPA和/或针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的患者中治疗障碍、延缓其进展或者以其他方式改善其症状的方法。专利技术背景在果蝇中首次发现的Toll受体为I型跨膜蛋白，具有在蛋白的胞外部分中的富含亮氨酸的重复序列(LRR)及一或两个富含半胱氨酸的结构域。果蝇Toll受体的哺乳动物同源物称为“Toll样受体”(TLR)。TLR通过识别微生物颗粒并激活针对这些微生物颗粒来源的免疫细胞而在先天免疫中发挥作用。在人中，已鉴定了11种Toll样受体TLR1-11，特征为其胞内结构域与IL-1受体胞内结构域的同源性以及存在胞外富含亮氨酸的重复序列。不同类型的TLR由不同类型的微生物颗粒激活。例如，TLR4主要由脂多糖(LPS)激活。已显示TLR4与辅助蛋白(髓样分化蛋白-2(MD-2))相关。已发现该蛋白与TLR4直接相互作用，和MD-2具有使得TLR4能够进行翻译后修饰以及促进其向细胞表面转运的能力。TLR4和MD-2在细胞表面上形成复合物。TLR4涉及许多障碍，并且正在开发抗TLR4药物作为治疗药物。并非所有患者都应答于当前的标准护理疗法。因此，需要用于鉴定可能为特定治疗(例如用特定抗TLR4疗法治疗)候选者的患者的组合物和方法。专利技术概述本文提供的组合物和方法可用于鉴定或者以其他方式精选(refine)患有障碍的患者群体，其中患者具有升高水平的一种或多种TLR4配体或其他TLR4相关生物标志物。这些患者被鉴定为用干扰或者以其他方式拮抗TLR4信号传导并中和TLR4的至少一种生物活性的药物(例如抗体或其他基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物)(单独或在辅助蛋白MD-2的情况下作为TLR4/MD-2复合物)治疗的合适候选者。在一些患有或疑似患有障碍的患者中，流体和其他生物样品含有升高水平的TLR4配体，比如含有ACPA和瓜氨酸化蛋白和/或肽的免疫复合物。这些TLR4配体刺激细胞产生促炎性细胞因子。然而，本文显示，使用干扰或者以其他方式拮抗TLR4信号传导的抗TLR4拮抗剂(例如中和性抗TLR4抗体或其他抗TLR4药物)在呈现升高的一种或多种TLR4配体和/或其他相关生物标志物的表达水平的患者中阻断该刺激。因此，通过给予呈现升高的一种或多种TLR4配体和/或相关生物标志物的表达水平的患者抗TLR4拮抗剂(例如中和性抗TLR4抗体或其他基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物)，组合物和方法可用于治疗依赖于TLR4信号传导、TLR4配体表达和/或活性异常(例如升高)、促炎性细胞因子产生异常和/或其组合、被其驱动或者以其他方式与其相关的障碍、延缓其进展或者以其他方式改善其症状。可能为用抗TLR4拮抗剂例如中和性抗TLR4抗体(比如本文描述的那些)治疗的合适候选者的患者通过检测一种或多种TLR4配体或其他相关生物标志物的水平来鉴定。用于鉴定可能候选者的合适的TLR4配体和其他相关生物标志物包括ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化纤维蛋白原(cFb)。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化纤维蛋白原α(cFbα)。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化纤维蛋白原β(cFbβ)。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化组蛋白。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽源自瓜氨酸化组蛋白2A。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽包含氨基酸序列NTKESSSHHPGIAEFPS-Cit-GK(SEQIDNO:1)，其中Cit=瓜氨酸。该肽在本文称为cFbα556-575。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽包含氨基酸序列HHPGIAEFPS-Cit-GKSSSYSKQF(SEQIDNO:2)，其中Cit=瓜氨酸。该肽在本文称为citFbβ563-583。在一些实施方案中，瓜氨酸化肽包含氨基酸序列MSG-Cit-GKQGGKA-Cit-AKAKS-Cit-SS(SEQIDNO:3)，其中Cit=瓜氨酸。该肽在本文称为citH2A1-20。在本文提供的方法中，在生物样品中检测ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体表达水平。在一些实施方案中，在生物样品的组合中检测ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体表达水平。在一些实施方案中，生物样品为滑液。在一些实施方案中，生物样品为血液或源自血液。在一些实施方案中，生物样品为血清。在一些实施方案中，生物样品为滑液和血清样品的组合。将具有升高水平的一种或多种这些标志物的患者鉴定为用一种或多种抗TLR4拮抗剂(例如本文描述的中和性抗TLR4抗体)的疗法的合适候选者。本文使用的短语“升高的表达水平”指的是表达水平高于来自不患有或疑似患有障碍患者的样品或其他对照样品中的ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的基线表达水平。在一些实施方案中，升高的ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体表达水平为显著的水平升高。用抗TLR4抗体治疗能够阻断(部分或完全)类风湿性关节炎单核细胞中的细胞因子产生的患者被鉴定为“应答者”，而用抗TLR4抗体治疗不能阻断(部分或完全)细胞因子产生的患者被鉴定为“无应答者”。除了检测ACPA和/或针对一种或多种特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平以外，用抗TLR4拮抗剂治疗的合适患者还可通过评估许多另外的生物和临床参数中的任一种来鉴定，所述另外的生物和临床参数将改善生物标志物用于鉴定或者以其他方式精选患者群体的灵敏度和特异性。或者，这些另外的生物和临床参数可单独用作鉴定用抗TLR4拮抗剂或其他合适疗法治疗的合适候选患者的手段。作为非限制性实例，这些生物和临床参数包括以下任一种：类风湿因子水平、C反应蛋白(CRP)水平、血细胞计数、血细胞亚群上TLR4受体的存在、TLR4多态性、人白细胞抗原(HLA)多态性、肽基精氨酸脱亚胺酶(PAD)酶和PAD酶多态性、Fcγ受体IIa(FcγIIa)多态性、MD-2水平、可溶性CD14水平、基线患者人口统计学数据(例如体重指数(BMI)、性别、年龄等)和/或患者病史(例如诊断时的残疾评估量表(DAS28)、治疗开始时的DAS28、病程、发病年龄、基于DAS28、美国风湿病学会(ACR)和/或欧洲抗风湿病联盟(EULAR)应答标准的对先前治疗的应答等)。本专利技术的组合物和方法有用的障碍包括其中TLR4表达和/或活性异常(例如升高)、具有异常TLR4/MD-2激活和/或异常TLR4配体活性(例如异常刺激本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定适合于用Toll样受体4(TLR4)拮抗剂的疗法的患者并缓解TLR4相关障碍的症状的方法，所述方法包括在来自受试者的至少第一生物样品中检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或至少一种针对包含选自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的表达水平，比较检测到的ACPA和/或至少一种针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平与对照表达水平，并且当检测到的水平升高时，以足以缓解TLR4相关障碍的症状的量给予所述受试者抗TLR4拮抗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.06 US 62/201,9181.一种用于鉴定适合于用Toll样受体4(TLR4)拮抗剂的疗法的患者并缓解TLR4相关障碍的症状的方法，所述方法包括在来自受试者的至少第一生物样品中检测抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)和/或至少一种针对包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体的表达水平，比较检测到的ACPA和/或至少一种针对特定瓜氨酸化蛋白和/或肽的抗体水平与对照表达水平，并且当检测到的水平升高时，以足以缓解TLR4相关障碍的症状的量给予所述受试者抗TLR4拮抗剂。2.权利要求1的方法，其中所述方法包括检测ACPA的表达水平和/或针对SEQIDNO:1的肽的抗体、针对SEQIDNO:2的肽的抗体、针对SEQIDNO:3的肽的抗体及其任何组合的表达水平。3.权利要求1的方法，其中所述生物样品为或源自血液。4.权利要求1的方法，其中所述生物样品为血清。5.权利要求1的方法，其中所述生物样品为或源自滑液。6.权利要求1的方法，其中所述方法还包括在来自相同受试者的第二生物样品中检测ACPA和/或至少一种针对包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的氨基酸序列的特定瓜氨酸化肽的抗体的表达水平。7.权利要求6的方法，其中所述第一生物样品为或源自血液。8.权利要求7的方法，其中所述第一生物样品为血清。9.权利要求6的方法，其中所述第二生物样品为或源自滑液。10.权利要求1的方法，其中所述抗TLR4拮抗剂为抗TLR4抗体或其免疫活性片段。11.权利要求10的方法，其中所述抗TLR4抗体或其免疫活性片段包含：含有GGYSWH(SEQIDNO:139)的氨基酸序列的可变重链互补决定区1(VHCDR1)、含有YIHYSGYTDFNPSLKT(SEQIDNO:140)的氨基酸序列的VHCDR2区、含有KDPSDAFPY(SEQIDNO:141)的氨基酸序列的VHCDR3区、含有RASQSISDHLH(SEQIDNO:4)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1(VLCDR1)区、含有YASHAIS(SEQIDNO:5)的氨基酸序列的VLCDR2区和含有QQGHSFPLT(SEQIDNO:6)的氨基酸序列的VLCDR3区。12.权利要求10的方法，其中所述抗TLR4抗体或其免疫活性片段包含重链可变氨基酸序列QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:7)和氢链可变氨基酸序列EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDHLHWYQQKPDQSPKLLIKYASHAISGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQGHSFPLTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:8)。13.权利要求10的方法，其中所述抗TLR4抗体或其免疫活性片段包含重链氨基酸序列MGWSWIFLFLLSGTAGVHCQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSITGGYSWHWIRQPPGKGLEWMGYIHYSGYTDFNPSLKTRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARKDPSDAFPYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP...

【专利技术属性】
技术研发人员：L尚，E莫内，
申请(专利权)人：诺夫免疫股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH