保存核糖核酸生物活性的方法技术

本发明专利技术提供了一种基本上保留或以其他的方式保存存在于细胞裂解物中的dsRNA的生物活性,以转录后沉默在靶生物体中的基因表达的方法，该方法包括向该裂解物中添加具有蛋白质‑或胺‑交联剂功能的化合物的步骤。本发明专利技术还包括组合物，该组合物包含裂解物，该裂解物包含dsRNA、和蛋白质交联剂，连同所述试剂在该方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】保存核糖核酸生物活性的方法本专利技术涉及通过双链RNA控制基因表达。具体而言，本专利技术涉及增强外源性-即在靶生物体外部并且在相对苛刻的环境条件下-施用的双链RNA以沉默该生物体中的基因表达的方法。本专利技术还涉及用于该方法的组合物，以及在该方法中的特定已知交联剂的用途。潜在沉默基因表达的RNA干扰现象是熟知的。RNA相对不稳定并且可以通过例如普遍存在于细胞外的核糖核酸酶迅速降解。将dsRNA直接应用于靶生物体，抑或经由外源性施用至它们存在的位置的问题在于RNA的稳定性差。外源性应用意指以生物体可将其并入其中的方式应用于靶生物体，或者dsRNA在与靶生物体不同的第一生物体中产生并且靶生物体并入第一生物体或其包含dsRNA的部分，使得所述dsRNA能够实现包含对应于由dsRNA包含的核苷酸序列的核苷酸序列的基因的转录后沉默。外源性应用与内源性产生(产生是指能够在转录后沉默靶向基因的双链RNA的靶生物体的细胞中产生(通常经由从适当的异源序列表达))不同。尽管外源施用的dsRNA通常能够在短期内，可能甚至在施用后多至几天内施加相关的生物效应，但该效应一般迅速下降，因为dsRNA在例如土壤中典本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基本上保留或以其他的方式保存存在于细胞裂解物中的dsRNA的生物活性,以转录后沉默在靶生物体中的基因表达的方法，该方法包括向该裂解物中添加具有蛋白质‑或胺‑交联剂功能的化合物的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.05 US 62/237,0551.一种基本上保留或以其他的方式保存存在于细胞裂解物中的dsRNA的生物活性,以转录后沉默在靶生物体中的基因表达的方法，该方法包括向该裂解物中添加具有蛋白质-或胺-交联剂功能的化合物的步骤。2.根据权利要求1所述的方法，其中试剂在该裂解物形成时添加到细胞中，或在该裂解物形成后添加到该裂解物中。3.根据权利要求1所述的方法，其中试剂添加到该裂解物施用的位置。4.根据前述权利要求所述的方法，其中在施用该裂解物之前将试剂添加到该位置。5.根据权利要求3所述的方法，其中该位置是土壤。6.根据任何前述权利要求所述的方法，其中该交联剂选自下组，该组由以下组成：聚醛、二醛、二环氧化物、聚环氧化物、吡啶基二硫化物、多官能碳二亚胺、多官能马来酰亚胺、多官能亚氨酸酯、多官能n-羟基琥珀酰亚胺酯和多官能卤代缩醛。7.根据任何前述权利要求所述的方法，其中试剂是戊二醛。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中制备该裂解物的细胞是细菌细胞，任选地通过热失活在先失活。9.根据前述权利要求所述的方法，其中该细菌细胞已被工程化以包含DNA序列，该DNA序列在转录时产生双链RNA，其至少一部分包含与真核细胞中基因的mRNA的序列基本上相同的序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·菲尔德曼，J·D·福勒，W·玛德雷恩，I·马莱特，N·克罗姆赫科，
申请(专利权)人：先正达参股股份有限公司，德福根有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH