一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法技术

一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，属于色谱‑质谱联用技术领域。该方法包括(1)将玉米须粉末加入乙醇水溶液浸泡12h以上，振摇混匀，将混合均匀的溶液回流1～6h后，室温冷却，得到玉米须乙醇水溶液，将玉米须乙醇水溶液涡旋混匀，取上清液采用微孔滤膜过滤，得到检测液；取检测液进行超高效液相色谱串联质谱测试，对测试结果进行分析，采用外标法得到玉米须中黄酮类成分含量。本方法建立了超高效液相色谱串联质谱(UPLC‑MS/MS)方法，同时测定玉米须中黄酮类成分含量，该方法准确性强、灵敏度高、分离速度快，能够定性定量测定玉米须中的黄酮类成分含量。

A method for determination of flavonoids in corn silk

A method for determining the content of flavonoids in corn silk belongs to the technical field of chromatograph mass spectrometry. The method includes (1) (1) the corn beard powder is soaked in the ethanol water solution and soaked in the solution. The mixed homogeneous solution is reflued for 1 to 6h. The ethanol water solution of corn must be cooled and the corn beard ethanol solution is mixed, and the supernatant is filtered by microporous membrane filtration, and the detection solution is obtained. The results were analyzed by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, and the content of flavonoids in stigma maydis was obtained by external standard method. In this method, the method of UPLC MS/MS was established, and the content of flavonoids in corn whiskers was determined simultaneously. The method was accurate, sensitive and fast in separation, and it could be used to determine the content of flavonoids in corn whiskers qualitatively and quantitatively.

【技术实现步骤摘要】
一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法
本专利技术涉及色谱-质谱联用
，具体涉及一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法。
技术介绍
玉米须，别名玉麦须、玉蜀黍蕊、棒头毛，是禾本科植物玉蜀黍ZeamaysL.的干燥花丝和柱头，在《中华本草》、《全国中草药汇编》等药学论著中均有记载。现常用于药茶，药膳中，作为糖尿病、高血压的辅助治疗药物。玉米须味甘、淡，性平，不仅入阳明胃经，而且归肾、肝、胆经，传统用于利水消肿、清肝利胆。我国是玉米产量大国，所以玉米须是一种来源丰富、价格低廉且易于采集的中药材。而且，现代药理研究结果表明，玉米须有降血糖，抗癌、抑菌、增强免疫功能、利尿、降血压等作用。化学研究表明，黄酮类成分是玉米须的重要组成成分，且对药理活性的发挥起到重要作用。如异鼠李素具有抗脂质氧化、降低血清胆固醇及甘油三酯等作用，且能明显抑制肿瘤细胞DNA生长和增殖，对人体多种癌细胞株有杀伤作用；槲皮素对去甲肾上腺促人血管平滑肌细胞增殖有抑制作用；木犀草苷对心肌细胞损伤具有保护作用，并且可以抑制肿瘤细胞的增殖作用；而木犀草素近期发现其对肿瘤干细胞增殖具有显著影响；刺芒柄花素对抗癌、改善骨质疏松和改善妇女更年期症状等有一定的作用。由此可见，对玉米须中黄酮类成分进行质量控制对其合理应用具有重要意义。现有的检测技术中，液相色谱和质谱联用技术应用广泛，但是对于玉米须中含有的黄酮类成分鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，本方法建立了超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)方法，同时测定玉米须中黄酮类成分含量，该方法准确性强、灵敏度高、分离速度快，能够定性定量测定玉米须中的黄酮类成分含量。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，包括以下步骤：步骤1：玉米须中黄酮类成分提取(1)将玉米须粉末加入乙醇水溶液浸泡12h以上，振摇，得到混合均匀的溶液；(2)将混合均匀的溶液回流1～6h后，室温冷却，得到玉米须乙醇水溶液，其质量浓度为0.01～0.03g/ml；(3)将玉米须乙醇水溶液涡旋混匀，取上清液采用微孔滤膜过滤，得到检测液；步骤2：测试取检测液进行超高效液相色谱串联质谱测试，对测试结果进行分析，采用外标法得到玉米须中黄酮类成分含量；其中，(1)超高效液相色谱的测试条件为：采用ThermoHypersilGOLD色谱柱，选用流动相进行等度或梯度洗脱；进样量为5～10μL；柱温为25～35℃；所述的流动相为甲醇-水、甲醇-0.1％甲酸水溶液、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水、乙腈-水-冰醋酸中的一种；(2)质谱的测试条件为：采用电喷雾离子源，多离子扫描模式下MRM检测方式；毛细管电压为1.0～5.0kV，离子源温度为100～200℃，脱溶剂温度为300～500℃，脱溶剂气流量为600～700L·h-1，锥孔气流量为30～800L·h-1；碰撞气为氩气，压力为2×10-3～4×10-3mbar；准确质量校正采用NaCsI进行校正。所述的步骤1(1)中，所述的振摇优选为超声振摇，所述的乙醇水溶液中乙醇的质量浓度为40～60wt％。所述的步骤1(2)中，所述的混合均匀的溶液回流后，为了保证溶液的质量浓度范围，增加回流损失的部分乙醇。所述的步骤1(3)中，所述的涡旋混匀采用的设备为旋涡混合器。所述的步骤1(3)中，所述的微孔滤膜的孔径为0.2μm或0.22μm或0.45μm。所述的步骤2(1)中，所述的ThermoHypersilGOLD色谱柱，优选型号为柱长为100mm，内径为2.1mm的ThermoHypersilGOLD色谱柱，色谱柱中填料粒径为1.9μm。所述的步骤2(1)中，所述的洗脱优选为梯度洗脱，梯度洗脱按一定程序梯度性地改变洗脱液的比例，数据更准确，结果更可信。梯度洗脱程序：0-6min：50％B-20％B，6-6.01min：20％B-50％B，6.01-8.5min：50％B；流速：0.3mL·min-1；所述的步骤2(1)中，所述的流动相中，A液B液可以互换，混合比例为任意比例。所述的步骤2(1)中，所述的流动相优选为甲醇-水-冰醋酸。所述的步骤2(1)中，当流动相为甲醇-0.1％甲酸水时，A相为甲醇；B相为0.1wt.％甲酸-水。所述的步骤2(1)中，在超高效液相色谱分析时，各峰与相邻峰的分离度均≥1.5，理论板数测得成分峰计算均≤3000。所述的步骤2(2)中，所述的多离子扫描模式优选为负离子扫描模式。所述的测定玉米须中黄酮类成分含量中，玉米须中黄酮类成分为木犀草苷、槲皮素、木犀草素、异鼠李素和刺芒柄花素。本专利技术的一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，相比于现有技术，其有益效果在于：1.本专利技术的UPLC-MS/MS能够同时测定玉米须中黄酮类成分含量，该方法中，黄酮类成分在各自的质量浓度范围内呈现良好的线性关系、加样回收率高、该方法简便、准确、安全、快捷、精密度良好，为玉米须中药材的质量控制提供方法依据，为开发新药用中药提供了一些有益的探索。2.采用本专利技术的玉米须中黄酮类成分的提取方法，在12h内成分稳定。附图说明图1为本专利技术实施例1中检测液和对照品溶液中的木犀草苷(Cyna)色谱图；其中，(a)为对照品溶液，(b)为检测液。图2为本专利技术实施例1中检测液和对照品溶液中的木犀草素(Quer)色谱图；其中，(a)为对照品溶液，(b)为检测液。图3为本专利技术实施例1中检测液和对照品溶液中的槲皮素(Lute)色谱图；其中，(a)为对照品溶液，(b)为检测液。图4为本专利技术实施例1中检测液和对照品溶液中的异鼠李素(Isor)色谱图；其中，(a)为对照品溶液，(b)为检测液。图5为本专利技术实施例1中检测液和对照品溶液中的刺芒柄花素(Form)色谱图；其中，(a)为对照品溶液，(b)为检测液。图6为本专利技术实施例1中木犀草苷(Cyna)二级质谱图；图7为本专利技术实施例1中木犀草素(Quer)二级质谱图；图8为本专利技术实施例1中槲皮素(Lute)二级质谱图；图9为本专利技术实施例1中异鼠李素(Isor)二级质谱图；图10为本专利技术实施例1中刺芒柄花素(Form)二级质谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细说明。以下实施例，除特殊说明，百分比均为质量百分比。以下实施例，除特殊说明，所用的设备和原料均为市购。以下实施例，采用的槲皮素(Quercetin，Quer)为自制，采用的方法为现有技术，用HPLC归一化法测得质量浓度大于98.5％，通过核磁共振和质谱数据确证。以下实施例，色谱分析采用Aglient1290超高效液相色谱仪(Aglient,CA,USA)；质谱分析采用ABSCIEXTripleQuadTM3500质谱仪(FosterCity,CA,USA)，Analyst1.6.3工作站。实施例1一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，包括以下步骤：步骤1：玉米须中黄酮类成分提取(1)称取玉米须粉末0.5g，置于圆底烧瓶中，加入50wt％的乙醇水溶液25mL，称量总质量m1，浸泡12h，振摇混匀，得到混合均匀的溶液；(2)将混合均匀的溶液回流1h后，室温冷却，称量总质量m2，向圆底烧瓶中补入(m1-m2)质量的乙醇，得到玉米须乙醇水溶液；玉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：玉米须中黄酮类成分提取(1)将玉米须粉末加入乙醇水溶液浸泡12h以上，振摇，得到混合均匀的溶液；(2)将混合均匀的溶液回流1～6h后，室温冷却，得到玉米须乙醇水溶液，其质量浓度为0.01～0.03g/ml；(3)将玉米须乙醇水溶液涡旋混匀，取上清液采用微孔滤膜过滤，得到检测液；步骤2：测试取检测液进行超高效液相色谱串联质谱测试，对测试结果进行分析，采用外标法得到玉米须中黄酮类成分含量。

【技术特征摘要】
1.一种测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：玉米须中黄酮类成分提取(1)将玉米须粉末加入乙醇水溶液浸泡12h以上，振摇，得到混合均匀的溶液；(2)将混合均匀的溶液回流1～6h后，室温冷却，得到玉米须乙醇水溶液，其质量浓度为0.01～0.03g/ml；(3)将玉米须乙醇水溶液涡旋混匀，取上清液采用微孔滤膜过滤，得到检测液；步骤2：测试取检测液进行超高效液相色谱串联质谱测试，对测试结果进行分析，采用外标法得到玉米须中黄酮类成分含量。2.如权利要求1所述的测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，其特征在于，所述的步骤2中，所述的超高效液相色谱的测试条件为：采用ThermoHypersilGOLD色谱柱，选用流动相进行洗脱；进样量为5～10μL；柱温为25～35℃；所述的洗脱为等度洗脱或梯度洗脱；所述的流动相为甲醇-水、甲醇-0.1％甲酸水溶液、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水、乙腈-水-冰醋酸中的一种；所述的步骤2中，所述的质谱的测试条件为：采用电喷雾离子源，多离子扫描模式下MRM检测方式；毛细管电压为1.0～5.0kV，离子源温度为100～200℃，脱溶剂温度为300～500℃，脱溶剂气流量为600～700L·h-1，锥孔气流量为30～800L·h-1；碰撞气为氩气，压力为2×10-3～4×10-3mbar；准确质量校正采用NaCsI进行校正。3.如权利要求1所述的测定玉米须中黄酮类成分含量的方法，其特征在于，所述的步骤1(1)中，所述的振摇为超声振摇，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘景圣，张浩，赵城彬，张大力，董怡麟，许秀颖，曹勇，吴玉柱，郑明珠，蔡丹，刘回民，李有宝，闵伟红，习士霞，黄洪亮，刘惠麟，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22