The invention discloses the Taq DNA ligase fusion protein, which introduces the carboxyl terminal of the Taq DNA ligase to the Sso7d DNA of the palaeobacteria, and introduces the affinity label of 6 histidine at the amino terminal of the Taq DNA ligase at the same time as the fusion protein, and purify with the nickel affinity column, and the Sso7dDNA binding work of the Taq DNA ligase and the palaeobacteria. The fusion protein of the energy domain was fused, and the fusion protein of higher efficiency and activity was obtained. The Sso7d fragment was fused at the end of the carboxyl group of the Taq DNA ligase and fused at the end of the amino group. The purification method of the enzyme was simplified. The fusion expression of the DNA binding domain and the TaqDNA ligase of the Sso7d of the palaeobacteria was fused and the fusion group was designed at the end of the carboxyl group. The purification process of the enzyme is simplified. The purification process can be realized by the combination of nickel affinity column and ion exchange. The new enzyme molecule is used for the connection reaction in SNP analysis. It shows higher efficiency, low production cost and suitable for industrialization.
【技术实现步骤摘要】
TaqDNA连接酶融合蛋白
本专利技术涉及分子生物学领域,具体涉及TaqDNA连接酶融合蛋白。
技术介绍
TaqDNA连接酶是连接酶检测反应(LDR)分型方法中不可少的一种工具酶。古细菌的Sso7d的DNA结合功能域在分子生物学的工具酶上,也得到较为广泛的应用,如与Taq和PfuDNA多聚酶进行融合表达,可使得酶的扩增速度增加几倍,显著性得提高酶效率。TaqDNA连接酶是SNP分析中的关键酶,活性高低是试验是否成功的关键因素,为增强TaqDNA连接酶的效率,我们将古细菌的Sso7d的DNA结合功能域和TaqDNA连接酶融合表达,得到活性更高的连接酶,生产成本低,适合工业化使用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供TaqDNA连接酶融合蛋白,活性更高,生产成本低,适合工业化使用。为了解决上述技术问题,本专利技术提供了如下的技术方案:本专利技术提供了TaqDNA连接酶融合蛋白,其TaqDNA连接酶的羧基末端引入古细菌的Sso7d的DNA,在构建融合蛋白的同时在TaqDNA连接酶的氨基末端引入6个组氨酸的亲和标签,用镍亲和柱进行纯化。作为本专利技术的一种优选技术方案,将所述TaqDNA连接酶和古细菌的所述Sso7dDNA结合功能域进行融合表达,得到了效率和活性更高的融合蛋白。作为本专利技术的一种优选技术方案,将所述Sso7d片段融合在所述TaqDNA连接酶羧基末端,6个组氨酸标签融合在氨基末端。作为本专利技术的一种优选技术方案,对于所述Sso7d也可以融合在其它高温连接酶分子上。作为本专利技术的一种优选技术方案,所述Sso7d蛋白序列为:作为本专利技术的一种优选 ...
【技术保护点】
Taq DNA连接酶融合蛋白:其特征在于,其Taq DNA连接酶的羧基末端引入古细菌的Sso7d的DNA,在构建融合蛋白的同时在Taq DNA连接酶的氨基末端引入6个组氨酸的亲和标签,用镍亲和柱进行纯化。
【技术特征摘要】
1.TaqDNA连接酶融合蛋白:其特征在于,其TaqDNA连接酶的羧基末端引入古细菌的Sso7d的DNA,在构建融合蛋白的同时在TaqDNA连接酶的氨基末端引入6个组氨酸的亲和标签,用镍亲和柱进行纯化。2.根据权利要求1所述的TaqDNA连接酶融合蛋白,其特征在于,将所述TaqDNA连接酶和古细菌的所述Sso7dDNA结合功能域进行融合表达,得到了效率和活性更高的融合蛋白。3.根据权利要求1所述的TaqDNA连接酶融合蛋白,其特征在于,将所述Sso7d片段融合在所述TaqDNA连接酶羧基末端,融合在氨基末端。4.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员:周磊,
申请(专利权)人:上海捷瑞生物工程有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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