一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法。本发明专利技术以澳洲鸽石斛当年新萌发生长的嫩芽为外植体，经过类原球茎诱导培养、类原球茎增殖培养、类原球茎分化培养、生根壮苗培养和出瓶移栽，实现澳洲鸽石斛优质种苗的快速繁殖。本发明专利技术的方法具有可定时、定质、定量提供规格划一整齐一致的优质澳洲鸽石斛试管苗满足市场需求，试管苗无病虫生长健壮，种苗具有品质好、抗性强、生长迅速、便于生产管理和降低生产成本等优势。可为国内发展澳洲鸽石斛产业提供大量优质标准的种苗，对促进澳洲鸽石斛产业在我国的发展，尽早形成规模化生产，抢先进入全国花卉市场，具有积极的推动作用。

A clonal propagation method for high quality seedlings of Dendrobium nobile in Australia

The invention discloses a clonal propagation method for high quality seedlings of Dendrobium nobile in Australia. The present invention takes the young buds of Dendrobium Dendrobium to be explants, through the induction culture of the protocorm, the proliferation and culture of the protocorms, the differentiation and culture of the protocorm like, the cultivation of the rooting and the flask, and the rapid propagation of the high quality seedlings of Dendrobium. The method of the invention can meet the market demand of good quality Australian pigeon test tube seedlings with regular, qualitative and quantitative specifications and uniform specifications. The test tube seedlings have the advantages of good quality, strong resistance, rapid growth, easy production management and reduction of production based on good quality, strong quality, strong resistance and rapid growth. It can provide a large number of high quality standard seedlings for the domestic development of Dendrobium industry in Australia. It has a positive effect on promoting the development of Dendrobium industry in Australia, forming large-scale production as soon as possible and entering the national flower market.

【技术实现步骤摘要】
一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法
：本专利技术属于植物繁殖
，具体涉及一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法。
技术介绍
：澳洲鸽石斛组(SectionDendrocryne)，是兰科石斛属(Dendrobium)41个组中的一个组，约有12个原种，主要原产于澳大利亚东部、豪勋爵岛(HoweIsland)和新加勒多尼亚岛(NewCaledoniaIsland)，常见原种有Den.fleckeri、Den.gracilicaule、Den.jonesii、Den.kingianum、Den.speciosum及其各变种、Den.tetragonum及其各变种与变型。本组中的原种大多具有开花性极佳、花图锦簇、香味浓厚、非常热闹特点。早在19世纪，人们就开始利用Dendrocryne开展了杂交育种，至今已选育出许多品种，仅利用Den.kingianum作母本就选育出了58个品种(英国皇家园艺学会中数据库)，作父本选育出了103个品种。在这些新选育的品种中部分品种开花期延长了许多，使Dendrocryne的观赏性进一步加强，这使得该组的很多种类具有极大的园林园艺开发潜力和商业价值。澳洲鸽石斛花色彩绚丽、花开热闹、花香馥郁、栽培容易且生长快速，其正常的生长温度可低至1.7℃(最低不可低于-1.7℃)。华南地区的气候条件非常适宜澳洲鸽石斛的生产。澳洲鸽石斛传统繁殖方法是分株繁殖，繁殖速度慢，周期长且种苗大小不一致，难以满足市场需求。本专利技术通过组织培养保持种苗的品种性状，在较短时间内繁殖出大量的种苗，种苗标准一致，出苗时间可控制，满足生产要求，是提高澳洲石斛种苗繁育效率及种苗标准化的有效途径。经文献查询，国内还没有澳洲鸽石斛组培快繁技术研究的报道，本专利技术可填补国内空白，为国内发展澳洲鸽石斛产业提供大量优质标准的种苗，对促进澳洲鸽石斛产业在我国的发展，尽早形成规模化生产，抢先进入全国花卉市场，具有积极的推动作用。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法。本专利技术的澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法，包括以下步骤：a、外植体的消毒：选取澳洲鸽石斛优良单株当年新萌发生长的嫩芽为外植体，去除叶片并将其切成包含芽点的小段后进行消毒处理，剥去苞叶后再进行消毒处理，得到消毒后的嫩芽；b、类原球茎诱导培养：切取消毒后的嫩芽上带节的茎段和顶芽，接种到类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转接到新的类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，获得类原球茎；所述的类原球茎诱导培养基SB1：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子汁50～100mL、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤5.0～8.0mg、萘乙酸0.2～2mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH5.4-5.6；c、类原球茎增殖培养：将获得的类原球茎转接至增殖培养基SB2，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，增殖培养得到的类原球茎可用于类原球茎分化培养或者继续增殖培养；所述的增殖培养基SB2：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤2.0～5.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH5.4-5.6；d、类原球茎分化培养：将获得的类原球茎转接至分化培养基SB3，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，类原球茎分化形成不定芽；所述的分化培养基SB3：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭50～100mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤3.0～6.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH5.4-5.6；e、生根壮苗培养：当类原球茎分化培养的不定芽高3～5cm时，转接至生根壮苗培养基SR4，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，获得试管苗；所述的生根壮苗培养基SR4：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH5.4-5.6；f、出瓶移栽：当生根壮苗培养得到的试管苗长至5～7cm高时在自然光下炼苗，取出试管苗，洗净附着的培养基后，对试管苗根部进行消毒处理，然后移栽至种植基质中，置于阴凉通风处栽培，浇水保湿，其他按常规条件培养，由此得到澳洲鸽石斛幼苗。步骤a所述的去除叶片并将其切成包含芽点的小段后进行消毒处理，剥去苞叶后再进行消毒处理，得到消毒后的嫩芽具体为：将外植体用干燥棉花擦拭1次，然后用体积分数75％乙醇水溶液浸泡的棉花擦拭1次，去除叶片并将其切成包含芽点的小段，然后用体积分数75％乙醇水溶液浸泡30s，无菌水冲洗3次，再用质量分数0.1％氯化汞溶液浸泡5-6min，无菌水冲洗3次，去除表面水分后剥去苞叶，然后用质量分数0.1％氯化汞溶液浸泡1-2min，去除表面水分后得到消毒后的嫩芽。步骤f所述的对试管苗根部进行消毒处理具体为：将试管苗根部用千分之一的高锰酸钾溶液浸泡5min。优选，步骤f所述的种植基质是由发酵树皮和发酵木屑按照体积比1:1混合而成。所述的树皮优选为阔叶林树皮。本专利技术以澳洲鸽石斛当年新萌发生长的嫩芽为外植体，经过类原球茎诱导培养、类原球茎增殖培养、类原球茎分化培养、生根壮苗培养和出瓶移栽，实现澳洲鸽石斛优质种苗的快速繁殖。本专利技术的方法具有可定时、定质、定量提供规格划一整齐一致的优质澳洲鸽石斛试管苗满足市场需求，试管苗无病虫生长健壮，种苗具有品质好、抗性强、生长迅速、便于生产管理和降低生产成本等优势。可为国内发展澳洲鸽石斛产业提供大量优质标准的种苗，对促进澳洲鸽石斛产业在我国的发展，尽早形成规模化生产，抢先进入全国花卉市场，具有积极的推动作用。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：1.材料：澳洲石斛(Dendrobiumk本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a、外植体的消毒：选取澳洲鸽石斛优良单株当年新萌发生长的嫩芽为外植体，去除叶片并将其切成包含芽点的小段后进行消毒处理，剥去苞叶后再进行消毒处理，得到消毒后的嫩芽；b、类原球茎诱导培养：切取消毒后的嫩芽上带节的茎段和顶芽，接种到类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转接到新的类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，获得类原球茎；所述的类原球茎诱导培养基SB1：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子汁50～100mL、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤5.0～8.0mg、萘乙酸0.2～2mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；c、类原球茎增殖培养：将获得的类原球茎转接至增殖培养基SB2，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，增殖培养得到的类原球茎可用于类原球茎分化培养或者继续增殖培养；所述的增殖培养基SB2：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤2.0～5.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；d、类原球茎分化培养：将获得的类原球茎转接至分化培养基SB3，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，类原球茎分化形成不定芽；所述的分化培养基SB3：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭50～100mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤3.0～6.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；e、生根壮苗培养：当类原球茎分化培养的不定芽高3～5cm时，转接至生根壮苗培养基SR4，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，获得试管苗；所述的生根壮苗培养基SR4：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；f、出瓶移栽：当生根壮苗培养得到的试管苗长至5～7cm高时在自然光下炼苗，取出试管苗，洗净附着的培养基后，对试管苗根部进行消毒处理，然后移栽至种植基质中，置于阴凉通风处栽培，浇水保湿，其他按常规条件培养，由此得到澳洲鸽石斛幼苗。...

【技术特征摘要】
1.一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a、外植体的消毒：选取澳洲鸽石斛优良单株当年新萌发生长的嫩芽为外植体，去除叶片并将其切成包含芽点的小段后进行消毒处理，剥去苞叶后再进行消毒处理，得到消毒后的嫩芽；b、类原球茎诱导培养：切取消毒后的嫩芽上带节的茎段和顶芽，接种到类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转接到新的类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，获得类原球茎；所述的类原球茎诱导培养基SB1：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子汁50～100mL、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤5.0～8.0mg、萘乙酸0.2～2mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH5.4-5.6；c、类原球茎增殖培养：将获得的类原球茎转接至增殖培养基SB2，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，增殖培养得到的类原球茎可用于类原球茎分化培养或者继续增殖培养；所述的增殖培养基SB2：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6-苄基嘌呤2.0～5.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH5.4-5.6；d、类原球茎分化培养：将获得的类原球茎转接至分化培养基SB3，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，类原球茎分化形成不定芽；所述的分化培养基SB3：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭50～100mg、肌醇80～12...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫远琪，江南，郑枫，周依清，吴坤林，曾宋君，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，东莞市农业科学研究中心，
类型：发明
国别省市：广东,44