The invention provides a drug liver toxicity evaluation method based on a three-dimensional liver model of qualitative filter paper. The method is as follows: the qualitative filter paper is used as the scaffold material for cell culture, and the filter paper is placed in the 24 hole plate so that the filter paper is suspended in the culture liquid to carry out full material transmission and exchange of nutrients, so that the cells are on the filter paper. Three dimensional growth is carried out. The liver model based on the filter paper is to co culture hiHep cells and umbilical vein endothelial cells HUVEC on qualitative filter paper, and realize a three dimensional liver tissue that can be cultured for long-term and maintain the specific function of the liver. This invention can be used to test and evaluate the high flux of hepatotoxic drugs in vitro. The model can be used in drug screening, toxicity detection and disease research, providing an important platform for the development and screening of new drugs in the field of liver disease research.
【技术实现步骤摘要】
一种基于定性滤纸的三维肝模型的药物肝毒性评价方法
本专利技术属组织工程及药物研究领域,具体涉及一种基于定性滤纸的三维肝模型的药物肝毒性评价。
技术介绍
药物诱导的肝损伤(DILI)一直是导致急性肝功能衰竭的重要原因,严重威胁着人类健康。研究表明,引起DILI的不同的风险因素包括遗传易感性因素,非基因因素(年龄、性别和疾病)和药物因素(每天剂量、代谢特征和药物相互作用)。目前各种肝脏疾病的研究以及药物筛选、毒性检测方面大多还是依赖于动物实验。然而由于人和其他动物之间肝脏功能的差异性,动物实验的结果难以完全转化到临床中,临床前药物肝毒性预测和新药开发受到严重制约。目前,用于药物毒性评价的体外肝模型的组织或细胞包括肝微粒体,肝癌细胞系或其他肝细胞系等,然而它们都缺乏许多重要的肝细胞特异性功能,不能有效地用于体外药物肝毒性检测。原代肝细胞或肝切片拥有正常的肝脏结构和功能,但在体外培养环境下会很容易丧失表型和正常的肝功能,因此不适用于体外长期的药物毒性检测。hiHep细胞作为一种由成纤维细胞直接诱导转分化而来的肝细胞,具有较为完整的正常肝功能,CYP450代谢酶和其他重要肝药酶的表达水平较好,并且在使用过程中不涉及伦理问题。目前,尚未有报道利用该细胞进行体外三维肝模型构建及高通量的药物毒性评价。在体外构建功能性的肝组织过程中,模拟体内肝细胞复杂微环境并实现体外肝细胞的三维培养,对维持肝细胞的分化表型和改善肝细胞功能尤为重要。然而目前许多三维肝模型或肝反应器拥有许多的局限性,如肝细胞种类和来源有限,生物材料的性能及安全性差,体外细胞生长微环境难以长期维持,培养体系复杂 ...
【技术保护点】
一种基于定性滤纸的三维肝模型的药物肝毒性评价方法,其特征在于:按照以下步骤进行:(1)定性滤纸的三维肝模型的建立:将滤纸置于细胞培养24孔板中,在其上包被一层100ug/ml浓度的I型鼠尾胶原,然后在其上面先后种上hiHep肝细胞和脐静脉内皮细胞HUVEC,两种细胞共培养10天后,得到具有三维组织表型特征和肝特异性功能的肝模型,(2)药物肝毒性评价:在上述模型分别加入两种临床口服药对进行不同药物浓度和时间点的处理,检测细胞活力和细胞分泌的LDH水平,用于药物引起的肝毒性(急/慢性)评估,并与二维培养的hiHep肝细胞的药物肝毒性检测进行对比。
【技术特征摘要】
1.一种基于定性滤纸的三维肝模型的药物肝毒性评价方法,其特征在于:按照以下步骤进行:(1)定性滤纸的三维肝模型的建立:将滤纸置于细胞培养24孔板中,在其上包被一层100ug/ml浓度的I型鼠尾胶原,然后在其上面先后种上hiHep肝细胞和脐静脉内皮细胞HUVEC,两种细胞共培养10天后,得到具有三维组织表型特征和肝特异性功能的肝模型,(2)药物肝毒性评价:在上述模型分别加入两种临床口服药对进行不同药物浓度和时间点的处理,检测细胞活力和细胞分泌的LDH水平,用于药物引起的肝毒性(急/慢性)评估,并与二维培养的hiHep肝细胞的药物肝毒性检测进行对比。2.按照权利要求1所述一种基于定性滤纸的三维肝模型的药物肝毒性评价方法,其特征在于:所述肝模型形成的三维组织表型特征,分别以扫描电镜和苏木素‐伊红染色方法观察组织的三维形态,具体为:取在滤纸上培养第14天的肝组织进行电镜扫描,观察三维组织结构形成;分别取在滤纸上培养7天的肝组织和HUVEC细胞进行苏木素‐伊红染色,观察肝细胞和内皮细胞的形态。3.按照权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员:秦建华,王亚清,王丽,
申请(专利权)人:中国科学院大连化学物理研究所,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
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