一种saRNA及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种saRNA，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区‑3000至‑200位点区域互补的核苷酸序列；本发明专利技术还公开了所述的saRNA在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。本发明专利技术的靶向PTPRO基因的SaRNA可使PD‑L1的Tyr123位点磷酸化水平降低，阻断PD‑1/PD‑L1通路，抑制肿瘤细胞生长，使T细胞恢复活性；同时，本发明专利技术的saRNA与PD‑L1抑制剂在肿瘤的治疗中起到协同增效作用，显著提高了PD‑L1抑制剂的治疗效果。因此，本发明专利技术saRNA可用于制备抗肿瘤药物。

【技术实现步骤摘要】
一种saRNA及其用途
本专利技术涉及肿瘤分子生物学
，特别涉及肿瘤的免疫治疗技术，尤其是一种有效治疗肿瘤的saRNA。
技术介绍
肿瘤细胞治疗是通过调动机体的免疫系统，增强抗肿瘤免疫力，从而抑制和杀伤肿瘤细胞。肿瘤细胞治疗是当前肿瘤治疗领域中最具前景的研究方向之一。PD-1(programmeddeath-1)是在凋亡的T细胞杂交瘤中得到的，由于其和细胞凋亡相关而被命名为程序性死亡-1受体，PD-1程序性死亡受体是一种重要的免疫抑制分子，为CD28超家族成员。PD-1主要在激活的T细胞和B细胞中表达，是激活型T细胞的一种表面受体，PD-1有两个配体，分别是PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)。机体内的肿瘤微环境会诱导浸润的T细胞高表达PD-1分子，肿瘤细胞会高表达PD-1的配体PD-L1和PD-L2，导致肿瘤微环境中PD-1通路持续激活，PD-L1与PD-1联接后，T细胞功能被抑制，不能向免疫系统发出攻击肿瘤的信号。PD-1/PD-L1抑制剂可以阻断PD-1与PD-L1的结合，阻断负向调控信号，使T细胞恢复活性，从而增强免疫应答。目前，已经有多种PD-1/PD-L1抑制剂在动物模型中证明它们治疗肿瘤的作用，pembrolizumab是一种高亲和力的结合PD-1的人源化IgG4-kappa抗体。美国食品药品管理局(FDA)已经批准pembrolizumab用于治疗晚期或无法手术切除的对其他药物无响应的黑色素瘤。nivolumab是一种抗PD-1的单克隆药物，仅作为二线或三线治疗药物被研发出来。nivolumab现已被FDA批准用于鳞状细胞肺癌的二线治疗。目前，其他PD-1/PD-L1抑制剂很多都处于Ⅰ/Ⅰ期临床试验阶段。PD-1/PDL1细胞疗法是当前备受瞩目的一类抗癌细胞疗法，旨在利用人体自身的免疫系统抵御肿瘤，通过阻断PD-1/PD-L1信号通路使肿瘤细胞死亡，适用于多种类型肿瘤。基于目前有限的临床数据和随访资料，对PD-1/PD-L1抗体有效的患者，有一部分疾病最终还是会进展。那么，潜在的耐药机制是什么？如何克服免疫治疗导致的耐药？PD-1/PD-L1抑制剂联合治疗搭档选谁好？是当前癌症细胞疗法中面临的三大难题。目前的研究认为可能是因为其他免疫逃逸通路代偿性活跃起来了。但具体的机理和预测的准确性目前还不清楚。针对这些新通路的药物，还有很多基础研究和临床试验需要去做，因此还需要很长时间。现研究发现，细胞中PD-L1蛋白的磷酸化水平对于PD-1/PD-L1信号通路的精准调控具有非常重要的意义。肿瘤的发生发展常常伴随着PD-L1蛋白磷酸化修饰发生异常。PD-L1氨基酸序列中磷酸化位点的磷酸化修饰是导致淋巴细胞凋亡，肿瘤发生免疫逃逸PD-1/PD-L1抑制剂抵抗的重要因素。从蛋白磷酸化修饰角度着手，找到PD-L1氨基酸序列中起到关键调控作用的磷酸化作用位点，找到在PD-1/PD-L1信号通路的磷酸化修饰中扮演重要角色的关键酶，将会为当前面临的癌症细胞疗法中的三大难题提供新的解决办法。受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)是PTPs家族的成员之一，在一项筛选肾小球足细胞特异性蛋白的研究中首次被发现并克隆出来，因此也称作GLEPP1。PTPRO在人类、大鼠、小鼠等各物种间具有高度保守性。在人类基因组中，PTPRO基因位于染色体12p13.3-p13.2，包含6个已知的mRNA变构体，其中2个主要的表达产物分别由全长PTPRO(PTPRO-FL)cDNA和截短型PTPRO(PTPROt)cDNA编码。在肿瘤研究中，PTPRO基因的表达水平与肿瘤的发生发展密切相关，现已发现，PTPRO在多种癌中有重要的抑癌作用，如：乳腺癌，前列腺癌，食管癌，结肠癌，肝癌，肺癌等。该基因通过去磷酸化作用来调控促癌基因的活性，使这些促癌基因活性下调，从而影响其下游信号通路，对肿瘤的发生发展起到抑制作用。在体内如何安全高效激活该基因的表达对肿瘤的治疗具有重大意义。近年的研究发现非编码RNA(ncRNA)分子能在多个水平参与基因表达的调控机制，其中小分子双链RNA(dsRNA)对相关蛋白表达的特异性抑制作用已经进行了广泛而深入的研究。最新研究发现dsRNA能特异地将某些沉默或低表达的基因激活的现象，并称之为“RNA激活(RNAactivation，RNAa)”，将具有激活功能的小dsRNA称之为小激活RNA(saRNA)。与RNAi相比较，RNAa在治疗肿瘤方面不用考虑某一肿瘤是否有特定的致癌基因作为靶基因，因而有其独特的优势，如可以利用RNAa激活肿瘤抑制基因、细胞周期抑制基因、细胞凋亡基因等来治疗肿瘤。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种可使PD-L1去磷酸化，从而阻断PD-1/PD-L1通路，使T细胞恢复活性，实现免疫治疗肿瘤的saRNA。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种saRNA，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区-3000至-200位点区域互补的核苷酸序列。由此，本专利技术中靶向PTPRO基因的SaRNA可使PD-L1的Tyr123位点磷酸化水平降低，阻断PD-1/PD-L1通路，使T细胞恢复活性，从而增强免疫应答；靶向PTPRO基因的SaRNA可作用于任何高表达PD-L1蛋白的细胞或组织，包括恶性肿瘤，肿瘤浸润性树突状细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞、肿瘤浸润性巨噬细胞等。优选地，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区-220位点至-238位点区域的核苷酸序列。优选地，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区-658位点至-676位点区域的核苷酸序列。优选地，所述saRNA由序列如SEQIDNO:2所示的正义链和序列如SEQIDNO:3所示的反义链组成，或者由序列如SEQIDNO:8所示的正义链和序列如SEQIDNO:9所示的反义链组成。在另一方面，本专利技术还提供上述saRNA在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。优选地，所述saRNA给药方式包括肿瘤内注射，腹腔注射，皮下注射以及全身静脉注射。在另一方面，本专利技术还提供上述saRNA和PD-1/PD-L1抑制剂的联合使用在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。优选地，所述PD-1/PD-L1抑制剂为抗PD-1抗体或PD-L1抗体。优选地，所述PD-1/PD-L1抑制剂为avelumab。本申请的专利技术人意外地发现，当同时使用本专利技术中的saRNA和avelumab时，其抑制肿瘤生长的效果显著优于单独使用本专利技术中的saRNA或avelumab，说明靶向PTPRO的saRNA和avelumab两者之间具有协同增效抑制肿瘤生长的作用。优选地，其特征在于，所述肿瘤为NSCLC、黑色素瘤、肾细胞癌、前列腺癌、乳腺癌、胶质瘤、食管癌、霍奇金淋巴瘤、恶性胸膜间皮瘤或头颈肿瘤。综上所述，本专利技术的有益效果为：现有的PD-L1抑制剂只能阻断PD-1/PD-L1通路，一旦PD-L1发生磷酸化之后，PD-L1抑制剂的效果将大大降低，而本专利技术的靶向PTPRO基因的SaRNA恰恰弥补了这一缺陷，其可使PD-L1的磷酸化水平降低，阻断PD-1/PD-L1通路，使T细胞恢复活性，从而增强免疫应答；同时，本专利技术的saRNA与PD-L1抑制剂在肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种saRNA，其特征在于，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区‑3000至‑200位点区域互补的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种saRNA，其特征在于，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区-3000至-200位点区域互补的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的saRNA，其特征在于，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区-220位点至-238位点区域的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的saRNA，其特征在于，所述saRNA包括与PTPRO基因启动子区-658位点至-676位点区域的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的saRNA，其特征在于，所述saRNA由序列如SEQIDNO:2所示的正义链和序列如SEQIDNO:3所示的反义链组成，或者由序列如SEQIDNO:8所示的正义链和序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：张灏，
申请(专利权)人：张灏，
类型：发明
国别省市：广东,44