一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法技术

本发明专利技术公开了一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，其包括如下步骤：1)取患有根腐病的发财树上的患病部位提取出镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素并鉴定；2)对步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素进行蛋白质含量测定；3)将步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素分别配制成不同浓度的溶液，通过涂抹法涂抹健康发财树幼苗叶片，进行致萎活性测定。本发明专利技术针对发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，有效得出了镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素的蛋白质含量及对发财树的影响，为后期发财树跟腐病菌的防治提供技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法
本专利技术涉及植物培植领域，特别涉及一种致病病毒的提取及活性测定方法。
技术介绍
发财树又叫观赏植物马拉巴栗，是属于多年生的木棉科乔木，曾经被联合国环保组织评为十大世界室内观赏花木之一。发财树根茎处十分膨大，体形高大，树形奇特，叶片掌状，树形优雅，四季常青，寓意好。但遗憾的是，发财树虽生长快但根系不发达，每年因根腐病死亡或消费者丢弃而产生的废旧树造成了严重的资源浪费和环境污染。根腐病是由多种病原物和环境作用引起的一大类病害的总称。引起根腐病的病菌有许多种，引起大豆根腐病的叫大豆疫霉根腐病菌，引起草莓根腐病的病菌称尖孢镰刀菌和引起小麦根腐病的小麦根腐病菌等。发财树根腐病又名马拉巴栗根腐病，主要危害根颈以下的木质部，感病的初期先是根部皮层出现灰褐色的病斑，继而发展到须根、侧根、主根和木质部的腐烂，当根腐病进行到一定的阶段，叶片会随之下垂、枯萎直至全株死亡。无论什么植物，在生长过程中都有可能受到病害的侵染。地上部分的病号会使植物失去观赏价值及绿化作用，还会引起一些问题，包括：形态残缺，部分树体枯萎等。但根部病害可使植物完全死亡，造成城市绿化树种，木林和风景林大片死亡，所造成的危害是巨大和破坏性的。所以我们要认识根腐病的症状：可分为干基部腐朽和根部皮层腐烂，基部腐朽主要在腐朽处生出大型子实体。常表现为色淡而放叶迟缓，叶片色泽不正常。生长势衰退，叶型变小。先部分枯萎后完全死亡，发病的过程是渐进式的，有些大树会延迟数年之久。镰刀菌是危害农作物的最重要的寄生病原真菌之一。最早在1809年Link发现了粉红镰刀菌，并为此建立了属内的分类。镰刀菌除了会引起植物的根、茎、叶的腐烂枯萎外，还会在生长发育过程中产生多种次生代谢产物——真菌毒素。例如：具有很强毒性的伏马菌素和AAL毒素，可以直接杀死植物的细胞核，或者集中于粮食的种子内，人以及家畜食用后可引起内脏衰竭。正是因为镰刀菌对人类以及动植物的危害性这么大，使世界上许多顶尖的科研专家都对其产生研究的必要。目前对于镰刀菌的研究也是非常多，但是在许多方面或许研究不足。例如：对镰刀菌的菌落形态和鉴定，微生物从形态上是十分难区分的，而且镰刀菌的孢子含有有性和无性的阶段，但其中对真菌有性的孢子器进行形态学鉴定是很可行的一种方法。此外，还可以利用特定的抗生素对特定真菌的选择作用的原理，结合显微技术，这也是鉴定镰刀菌的一种方法。但是对于能确切鉴定镰刀菌的一种世界统一的方法还没有研究出来。总的来说，镰刀菌种类繁多，寄主分布范围广，世界地理分布复杂，而且繁殖能力强。对植物具有毁灭性的的危害，对人类以及动物都有极大的危害影响，严重危害与人类息息相关的粮食，产生许多粮食安全问题。因此，镰刀菌的病理学研究一直是学术界的热点。腐霉菌是一类低等的生物，腐霉菌的种类十分繁多，目前全世界报道过200多种腐霉菌，其中被广泛承认的有150余种，能引起植物病害的超过20种。腐霉根腐病是腐霉菌危害较为严重的一种病害，主要是危害幼苗，成株后也能危害。腐霉根腐病发病初期表现为个别的支根和须根感病，并且逐渐扩展到主根，随着时间的推进，主根腐烂加剧，吸收养分和水分的功能衰退，叶片发黄，特别是新叶，使植株萎焉。腐霉菌不仅能引起植物根腐病等病害，导致作物减产和危害人体健康，还能在其生长发育过程中产生有毒的物质——腐霉菌毒素，需要注意的是它的毒性非常强。其作用机理如下：首先黄曲霉素B1能够抑制DNA、信使DNA和蛋白质的合成，降低了RNA酶的作用活性，导致染色体异常，如产生核变、DNA无序合成、染色体链断裂和姐妹染色单体交换等。这是一个例子，其他的毒素的作用机理与黄曲霉素B1的差不多，但是还是有一部分毒素的作用机理尚不清楚，有待研究。目前对于腐霉菌的研究也是世界各大科研领域的其中一个热点，关于腐霉菌的毒素、种类和数量等有了很深入的研究，但是在许多方面与镰刀菌的研究一样也是存在许多不足的地方，对于腐霉菌的鉴定还是没有一套比较统一确切的说法，只能通过物理和化学方法进行大概的一个鉴定。总的来说，腐霉菌与镰刀菌的特点：产量不多，毒性强，寄主范围广泛，种类繁多，繁殖能力强。严重危害农作物和植物，危害人类和动物的健康，进而产生许多不可预见的问题，所以研究腐霉菌和镰刀菌已经成为当今避不及待的课题之一。毒素是病原物的代谢产物，在植物病菌发生发展过程中有明显的致病或毒害作用，对寄主有明显的损伤作用。根据毒素对寄主种或品种有无选择作用或对毒素敏感的植物范围，可将植物病原物分为两大类：一类是非寄主专化性毒素，另一类是寄主专化性毒素。非寄主专化性速度没有严重的寄主选择性和专化性，对寄主植物和非寄主植物都有一定的生理活性，使其发生部分或全部症状。相反寄主专化性毒素是一类对感病品种和寄主植物有较高致病性的。迄今已经50多种植物病原物真菌可产生非寄主专化性毒素，而产生寄主专化性毒素的植物病原物真菌有20多种。病原物的代谢产物毒素其实质是蛋白质和脂多糖复合物，其中蛋白质具有致萎病变作用，无致萎活性的成分是脂肪与多糖，病菌侵染寄主引起病害症状与毒素中蛋白质的作用机理其实质是一样的。因此，如何对植物病原物毒素进行快速精确生物活性是一个十分重要的环节。发财树根腐病的致病毒素主要是镰刀菌和腐霉菌。因此，如何有效提取发财树跟腐病菌的致病毒素并进行活性测定，对研究发财树跟腐病菌致病毒素的防治具有重大意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述技术的不足，提供一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法。本专利技术所采取的技术方案是：一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，其包括如下步骤：1)取患有根腐病的发财树上的患病部位提取出镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素并鉴定；2)对步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素进行蛋白质含量测定；3)将步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素分别配制成不同浓度的溶液，通过涂抹法涂抹健康发财树幼苗叶片，进行致萎活性测定。作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述鉴定为培养基培养后通过目测和电镜扫描方法鉴定。作为上述方案的进一步改进，步骤2)所述蛋白质含量采用分光光度计测量，标准曲线的回归方程为y＝0.0064x，R2＝0.9503。作为上述方案的进一步改进，步骤2)所述致萎活性测定的周期为15天。本专利技术的有益效果是：本专利技术针对发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，有效得出了镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素的蛋白质含量及对发财树的影响，为后期发财树跟腐病菌的防治提供技术支持。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行具体描述，以便于所属
的人员对本专利技术的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本专利技术做进一步说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述
技术实现思路
对本专利技术作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本专利技术的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，其包括如下步骤：1)取患有根腐病的发财树上的患病部位提取出镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素并鉴定。通过对培养基中其中一种病菌形态分析以及菌落镜检可知：形态特征为气生菌丝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取患有根腐病的发财树上的患病部位提取出镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素并鉴定；2)对步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素进行蛋白质含量测定；3)将步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素分别配制成不同浓度的溶液，通过涂抹法涂抹健康发财树幼苗叶片，进行致萎活性测定。

【技术特征摘要】
1.一种发财树跟腐病菌致病毒素的提取及活性测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取患有根腐病的发财树上的患病部位提取出镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素并鉴定；2)对步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素进行蛋白质含量测定；3)将步骤1)提取出的镰刀菌粗毒素和腐霉菌粗毒素分别配制成不同浓度的溶液，通过涂抹法涂抹健康发财树幼苗叶片，进行致萎活性测定。2.根据权利要求1所述的一种发财树跟腐病菌致病毒素的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芳，李静，宾炜，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44