海洋真菌HK1-6中azaphilones类化合物及其作为抗MRSA药物的应用制造技术

本发明专利技术涉及海洋真菌HK1‑6中azaphilones类化合物及其作为抗MRSA药物的应用，具体涉及海洋真菌Penicillium sp.HK1‑6产生的次级代谢产物1‑4或其药学上可接受的盐：

【技术实现步骤摘要】
海洋真菌HK1-6中azaphilones类化合物及其作为抗MRSA药物的应用
本专利技术属于海洋真菌次级代谢产物领域，具体涉及一种海洋真菌来源的azaphilones类化合物。本专利技术还涉及上述azaphilones类化合物及其制备方法与作为抗耐药菌药物的应用。本专利技术的azaphilones类化合物显示了良好的抗耐药菌活性，尤其是对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)和万古霉素耐药的粪肠球菌(VER)。
技术介绍
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStuphylococcusaureus，MRSA)是临床感染的首要致病菌，在世界范围内广泛流行，具有高感染率、高致死率等特点，并且感染率逐年持续升高。MRSA可导致机体各种感染，并且由于其表现出的多重耐药性以及耐药性的快速变迁给临床治疗带来了极大困难。在我国，MRSA是主要的耐药菌之一。万古霉素一直作为MRSA感染治疗的最后防线，但是随着临床上大规模的使用和误用，对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌已开始出现。一旦MRSA对抗生素表现出普遍耐药，将严重威胁患者的生命安全。因此，开发针对MRSA感染的新型抗菌药已成为国内外研究热点，对人类社会的可持续发展具有重要意义。红树植物根际土壤真菌长期适应于红树林生态特殊的生存环境，形成了其特有的生物合成方式，能够产生结构新颖、作用机制独特的次级代谢产物。来源于红树林生态系统的真菌次级代谢产物已经成为海洋药物及其先导化合物的重要来源。并且海洋真菌能够通过人工发酵的方法大量获得化合物，能有效解决药物开发过程中的药源问题，在生态文明建设和可持续发展方面具有独特的优势。
技术实现思路
海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2016年7月5日；保藏编号：CGMCCNo.12762；分类命名：青霉Penicilliumsp.。该真菌ITS区域的序列为：TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGAGGGCCCTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTTTATCGTACCTTGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCTATTCTGGCCGCCGGGGGGCATCCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACACATTGAACGCTGTCTGAAGATTGCAGTCTGAGCACTTAGCTAAATCAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTCTCGCCCCCCCTTCCCGGGGGGGCGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTCGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCCCGCCGGCGACCCCAATCAATCTTTCCGGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAA。本专利技术所述的海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6来源于红树林根际土壤。本专利技术提供一类由上述海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6产生的次级代谢产物1-4或其药学上可接受的盐，其特征在于所述次级代谢产物1-4具有如下结构：本专利技术提供一种化合物1-4或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)先在菌种培养基中对海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6进行菌种培养；(2)再在发酵培养基中对步骤(1)中的海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6进行发酵培养；(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用有机溶剂A萃取1～5次，优选3～5次，合并萃取液后减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用有机溶剂B浸提1～5次，优选3～5次，合并浸提液后减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏后，经过减压硅胶柱层析，洗脱剂依次采用石油醚∶乙酸乙酯＝100∶0至0∶100、氯仿∶甲醇＝100∶0至0∶100的梯度进行洗脱，并将其按照极性大小分成10个组分Fr.1～Fr.10；(4)组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3∶MeOH＝1∶1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH∶H2O＝85∶15，最后得到化合物4；组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯∶石油醚＝1∶6至1∶3或者甲醇∶二氯甲烷＝1∶30至1∶15，再经高效液相色谱HPLC制备(所用色谱柱为AgilentC18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝85∶15)，得化合物2；组分Fr.8先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3∶MeOH＝1∶1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH∶H2O＝75∶25，最后经高效液相色谱HPLC制备(所用色谱柱为AgilentC18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝85∶15)，分别得到化合物1和3。本专利技术制备方法中涉及洗脱剂、流动相等比例的均指体积比。其中所述菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水，发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水。本专利技术上述制备方法中，所述的有机溶剂A优选乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或乙醚中的一种或几种；所述的有机溶剂B优选甲醇、乙醇、THF或丙酮中的一种或几种。本专利技术上述制备方法中菌种培养基优选含有葡萄糖0.1％-10.0％、酵母膏0.01％-5％、蛋白胨0.01％-5％、琼脂0.1％-6.0％、粗海盐0.05％-10％，适量的水；进一步优选含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-2％、蛋白胨0.01％-2％、琼脂0.1％-3.0％、粗海盐0.05％-5％；上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0-45℃，进一步优选5-30℃，更进一步优选15-25℃；培养时间优选为2-10天，进一步优选为3、5、7天。发酵培养基优选含有葡萄糖0.1-10.0％、酵母膏0.01％-5％、蛋白胨0.01％-5％、粗海盐0.05％-10％，适量的水；进一步优选含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-2％、蛋白胨0.01％-2％、粗海盐0.05％-5％；上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0-45℃，进一步优选5-30℃，更进一步优选10-25℃；培养时间优选为20-40天，进一步优选21、24、28、30、32、35天；所述的正相硅胶柱层析中采用的固定相的硅胶目数为100～200目、200～300目或300～400目，优选200～300目。一种抗耐药菌药物，其特征在于包含化合物1-4或其药学上可接受的盐作为活性成分。所述耐药菌选自耐甲氧西林的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋真菌来源的azaphilones类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述azaphilones类化合物具有化合物1‑4所示的结构：

【技术特征摘要】
2016.12.22 CN 20161120358711.一种海洋真菌来源的azaphilones类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述azaphilones类化合物具有化合物1-4所示的结构：2.权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)先在菌种培养基中对海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6进行菌种培养；(2)再在发酵培养基中对步骤(1)中的海洋真菌Penicilliumsp.HK1-6进行发酵培养；(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用有机溶剂A萃取1～5次，优选3～5次，合并萃取液后减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用有机溶剂B浸提1～5次，优选3～5次，合并浸提液后减压浓缩得到菌体浸膏；合并发酵液浸膏和菌体浸膏后，经过减压硅胶柱层析，洗脱剂依次采用石油醚∶乙酸乙酯＝100∶0至0∶100、氯仿∶甲醇＝100∶0至0∶100的梯度进行洗脱，并将其按照极性大小分成10个组分Fr.1～Fr.10；(4)组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3∶MeOH＝1∶1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH∶H2O＝85∶15，最后得到化合物4；组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯∶石油醚＝1∶6至1∶3或者甲醇∶二氯甲烷＝1∶30至1∶15，再经高效液相色谱HPLC制备，得化合物2；组分Fr.8先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3∶MeOH＝1∶1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH∶H2O＝75∶25，最后经高效液相色谱HPLC制备，分别得到化合物1和3。所述菌种培养基中包含如下成分：葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水；所述发酵培养基中包含如下成分：葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水。所述的有机溶剂A优选乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或乙醚中的一种或几种；所述的有机溶剂B优选甲醇、乙醇、THF或丙酮中的一种或几种。所述的菌种培养基优选含有葡萄糖0.1％-10.0％、酵母膏0.01％-5％、蛋白胨0.01％-5％、琼脂0.1％-6.0％、粗海盐0.05％-10％，适量的水；进一步优选含有葡萄糖0.1％-5.0％、酵母膏0.01％-2％、蛋白胨0.01％-2％、琼脂0.1％-3.0％、粗海盐0.05％-5％；上述百分比均为重量百分比；培养温度优...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈敏，沈南星，陈芷杞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32