针对胆固醇代谢相关疾病的药物靶点及治疗药物制造技术

本发明专利技术涉及针对胆固醇代谢相关疾病的药物靶点及治疗药物。本发明专利技术揭示了EP3/PKA/HNF4α信号通路对胆固醇代谢的影响及其分子机制；本发明专利技术人还揭示一种可以明显抑制PKA对HNF4α的磷酸化，从而降低全身的胆固醇水平的小肽，该小肽可以作为治疗高胆固醇血症和动脉粥样硬化等疾病的新药物。

【技术实现步骤摘要】
针对胆固醇代谢相关疾病的药物靶点及治疗药物
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，本专利技术涉及针对胆固醇代谢相关疾病的药物靶点及治疗药物。
技术介绍
胆固醇是构成细胞膜的重要组成成分，细胞膜包围在人体每一细胞外，胆固醇为它的基本组成成分，占质膜脂类的20％以上。胆汁的功能是将大颗粒的脂肪变成小颗粒，使其易于与小肠中的酶作用，在代谢过程中胆汁会随粪便排泄，肝脏需产生新的胆酸来弥补这5％～15％的损失，此时就需要胆固醇。胆固醇还参与合成激素。人体的肾上腺皮质和性腺所释放的各种激素，如皮质醇、醛固酮、睾丸酮、雌二醇以及维生素D都属于类固醇激素，其前体物质就是胆固醇。虽然胆固醇是人体代谢所必不可少的物质，但是胆固醇过量时便会导致高胆固醇血症，对机体产生不利的影响。现代研究已发现，动脉粥样硬化、静脉血栓形成与胆石症与高胆固醇血症有密切的相关性。因此，本领域有必要研究一些新的降低体内胆固醇水平的新的靶点，以及开发新的治疗药物。前列腺素E2(PGE2)通过与靶细胞质膜上特定受体结合产生广泛的生理学和药理学效应。PGE2受体分为四种亚型：EP1、EP2、EP3和EP4。PGE2的四种受体属于G蛋白偶连超家族受体，不同的亚型受体分别与相应G蛋白偶连进行信号传导。EP3受体是EP中较特殊的“成员”，它能与多种G蛋白偶连转导复杂的信号入细胞内。肝细胞核因子4α(Hepatocytenuclearfactor-4α，HNF4α)是核激素受体超家族的一种保守性的配体依赖性转录因子，在肝脏高表达，参与维护肝细胞分化、脂肪代谢、药物解毒、白蛋白合成、能量代谢、胆汁酸合成等重要功能。近年来，随着对HNF4α研究的深入，人们发现它也是调控上皮细胞表型的重要基因，可阻断肝纤维化、肝硬化等肝脏慢性疾病的进程，同时，HNF4α与乙肝病毒的转录和复制有关，但是上述机制尚不完全清楚。蛋白激酶A(proteinkinaseAorcAMP-dependentproteinkinase，PKA)是一类丝/苏氨酸蛋白激酶，在细胞信号转导方面扮演重要的角色。PKA全酶(R_2C_2)由调节亚基(R)与催化亚基(C)组成，被第二信使3’，5’-环腺苷酸(cAMP)激活，释放出具有活性的催化亚基。PKA的催化亚基作为激酶中代表性的结构，是这十几年研究的热点。PKA对生长、分化、特定基因的表达以及糖原分解起调节作用，其活性异常与许多疾病相关，是药物设计的潜在靶点。上述蛋白是否发生相互作用以及如何发生相互作用，对疾病产生怎样的影响，均是本领域目前没有揭示过的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供针对胆固醇代谢相关疾病的药物靶点及治疗药物。在本专利技术的第一方面，提供一种分离的小肽，该小肽是肝细胞核因子4α的片段，包括蛋白激酶(PKA)在肝细胞核因子4α的磷酸化结合域。在一个优选例中，所述的小肽不是全长的肝细胞核因子4α。在另一优选例中，所述的小肽不包括肝细胞核因子4α的DNA转录结构域。在另一优选例中，该小肽包含肝细胞核因子4α的第121～170位的氨基酸序列；或该小肽包含肝细胞核因子4α的第(121-131)～(150-170)位的氨基酸序列。在本专利技术的另一方面，提供分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码所述的小肽。在本专利技术的另一方面，提供一种融合肽，所述的融合肽包括：穿膜肽；以及所述的小肽。在另一优选例中，所述的穿膜肽包括但不限于：所述的穿膜肽是反式激活蛋白，Penetratin，polyarginine，MAP，Transportan。在另一优选例中，所述的穿膜肽是反式激活蛋白；更佳地，其氨基酸序列如SEQIDNO:1中第1～9位(RKKRRQRRR)所示。在另一优选例中，所述的穿膜肽位于融合肽的N端。在本专利技术的另一方面，提供分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码所述的融合肽。在本专利技术的另一方面，提供所述的小肽或所述的融合肽的用途，用于制备预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的组合物或药盒。在另一优选例中，所述的胆固醇代谢(相关)疾病是与肝细胞核因子4α的143位丝氨酸磷酸化异常相关的疾病，或所述的胆固醇代谢疾病是与胆酸缺乏相关的疾病，或所述的胆固醇代谢疾病是胆固醇代谢(特别是高胆固醇)相关疾病。在另一优选例中，所述的胆固醇代谢疾病包括(但不限于)：高胆固醇血症，动脉粥样硬化，静脉血栓，黄色瘤，角膜弓。在另一优选例中，所述的小肽或融合肽通过竞争性的结合蛋白激酶A(PKA)、抑制蛋白激酶A对肝细胞核因子4α的第143位丝氨酸磷酸化、增加肝细胞核因子4α对CYP7A1启动子的结合，促进CYP7A1的转录、翻译，从而促进胆酸合成，降低胆固醇。在本专利技术的另一方面，提供一种用于预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的组合物，所述的组合物含有所述的小肽；以及食品学或药学上可接受的载体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的组合物，所述的组合物含有所述的融合肽；以及食品学或药学上可接受的载体。在本专利技术的另一方面，提供一种预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的药盒，所述的药盒含有所述的组合物。在本专利技术的另一方面，提供一种筛选预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的药物(或潜在药物)的方法，所述方法包括：(1)将候选物质加入到存在(或表达)蛋白激酶A和肝细胞核因子4α的体系；和(2)检测所述体系中蛋白激酶A与肝细胞核因子4α的相互作用；其中，若所述候选物质能抑制蛋白激酶A对肝细胞核因子4α的143位丝氨酸的磷酸化，则表明该候选物质是预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的物质。在另一优选例中，步骤(1)包括：在测试组中，将候选物质加入到存在(或表达)蛋白激酶A和肝细胞核因子4α的体系中；步骤(2)包括：检测测试组的体系中肝细胞核因子4α的第143位丝氨酸的磷酸化情况，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的存在(或表达)蛋白激酶A和肝细胞核因子4α的体系；其中，若所述候选物质能抑制(较佳地是统计学上抑制；如降低20％以上，较佳地抑制50％以上，更佳地抑制80％以上)蛋白激酶A对肝细胞核因子4α的磷酸化，则表明该候选物质是预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的物质。在本专利技术的另一方面，提供一种筛选预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的药物(或潜在药物)的方法，所述方法包括：(a)将候选物质加入到存在(或表达)前列腺素E2受体亚型3(EP3)和肝细胞核因子4α的体系；和(b)检测所述体系中前列腺素E2受体亚型3与肝细胞核因子4α的相互作用；其中，若所述候选物质能促进前列腺素E2受体亚型3活性，进而抑制肝细胞核因子4α的第143位丝氨酸的磷酸化，则表明该候选物质是预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的物质。在另一优选例中，步骤(a)包括：在测试组中，将候选物质加入到存在(或表达)前列腺素E2受体亚型3和肝细胞核因子4α的体系中；步骤(2)包括：检测测试组的体系中前列腺素E2受体亚型3与肝细胞核因子4α的相互作用，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的存在(或表达)前列腺素E2受体亚型3和肝细胞核因子4α的体系；其中，若所述候选物质能促进(较佳地是统计学上促进；如促进20％以上，较佳地促进50％以上，更佳地促进80％以上)前列腺素E2受体亚型3活性，进而抑制(较佳地是统计学上抑制；如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的小肽，其特征在于，该小肽是肝细胞核因子4α的片段，包括蛋白激酶在肝细胞核因子4α的磷酸化结合域。

【技术特征摘要】
1.一种分离的小肽，其特征在于，该小肽是肝细胞核因子4α的片段，包括蛋白激酶在肝细胞核因子4α的磷酸化结合域。2.如权利要求1所述的小肽，其特征在于，该小肽包含肝细胞核因子4α的第121～170位的氨基酸序列；或该小肽包含肝细胞核因子4α的第(121-131)～(150-170)位的氨基酸序列。3.分离的多核苷酸，其特征在于，该分离的多核苷酸编码权利要求1或2所述的小肽。4.一种融合肽，其特征在于，所述的融合肽包括：穿膜肽；以及权利要求1或2所述的小肽。5.如权利要求4所述的融合肽，其特征在于，所述的穿膜肽包括：所述的穿膜肽是反式激活蛋白，Penetratin，polyarginine，MAP，Transportan。6.如权利要求5所述的多肽，其特征在于，所述的穿膜肽是反式激活蛋白；更佳地，其氨基酸序列如SEQIDNO:1中第1～9位所示。7.分离的多核苷酸，其特征在于，该分离的多核苷酸编码权利要求4-6任一所述的融合肽。8.权利要求1或2所述的小肽或权利要求4-6任一所述的融合肽的用途，用于制备预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的组合物或药盒。9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的胆固醇代谢疾病是与肝细胞核因子4α的143位丝氨酸磷酸化异常相关的疾病，或所述的胆固醇代谢疾病是与胆酸缺乏相关的疾病，或所述的胆固醇代谢疾病是高胆固醇相关疾病。10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的胆固醇代谢疾病包括：高胆固醇血症，动脉粥样硬化，静脉血栓，黄色瘤，角膜弓。11.一种用于预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的组合物，其特征在于，所述的组合物含有权利要求1-2任一所述的小肽；以及食品学或药学上可接受的载体。12.一种用于预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的组合物，其特征在于，所述的组合物含有权利要求4-6任一所述的融合肽；以及食品学或药学上可接受的载体。13.一种预防、改善或治疗胆固醇代谢疾病的药盒，其特征在于，所述的药盒含有权利要求11或12所...

【专利技术属性】
技术研发人员：余鹰，颜帅，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31