针对流感血凝素的人抗体制造技术

本发明专利技术提供了与流感血凝素(HA)蛋白结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，包含所述抗体的药物组合物及其使用方法。本发明专利技术的抗体用于抑制或中和流感病毒活性，从而提供了一种治疗或预防人类流感感染的方法。在一些实施方式中，本发明专利技术提供了使用一种或多种与流感HA结合的抗体用于防止病毒附着至和/或进入宿主细胞的用途。本发明专利技术的抗体可以预防性或治疗性地使用，并且可以单独使用或与一种或多种其他抗病毒剂或疫苗联用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对流感血凝素的人抗体专利
本专利技术涉及与流感血凝素(HA)特异性结合的人抗体及其抗原结合片段，包括这些抗体的组合物，以及使用这些抗体的治疗和诊断方法。序列表与本说明书同时提交了序列表的ASCII兼容文本文件(37CFR§1.52(e)和37CFR§1.821)。文本文件的内容通过引用并入本申请。包含序列表的文本文件命名为“10119WO01_seqlisting”，于2015年11月18日创建，该文件有2.1MB。
技术介绍
流感是一种高度传染性疾病，该疾病具有悠久的历史，其特征为一波接一波的传染、流行、复发和爆发。尽管每年进行疫苗接种工作，但是流感感染仍导致大量的发病和死亡。流感病毒由甲、乙、丙三种类型组成。而且，根据编码表面糖蛋白，血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的两个基因在其抗原区的等位基因变异情况，可以将甲型流感病毒分成亚型，所述表面糖蛋白是病毒附着至以及进入宿主细胞所需要的。血凝素是一种三聚体糖蛋白，其含有两个结构域，由受体结合位点组成的球状头部结构域(经常发生抗原漂移)和茎区(在各种流感病毒株之间更为保守)。HA蛋白被合成为前体(HA0)，经过蛋白水解加工以产生两个亚单位(HA1和HA2)，这两个亚单位彼此之间相结合以形成茎/球状头部结构。HA1肽负责将病毒附着至细胞表面。HA2肽形成介导病毒与细胞膜在内涵体中融合的茎状结构，其能够使核糖核蛋白复合物释放进入胞质。目前，根据甲型流感病毒的血凝素蛋白(H1-H18)定义的亚型有18种。这18种HA可分为两组。组1由H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17和H18亚型组成，组2包括H3、H4、H7、H10、H14和H15亚型。由于一种被称为抗原漂移的现象，或者在HA或NA分子中的突变产生新的不同表位，可能导致在相同亚型中出现新的毒株。这造成的后果是，每年必须针对预计要出现的病毒生产新疫苗，这一过程不仅成本较高且效率低下。尽管技术的进步已经使得能够更好地生产更好的流感抗原用于疫苗组合物，但是仍需要提供其他保护途径以应对新出现的流感亚型和毒株。使用包含目标抗原(例如HA和/或NA)的疫苗组合物在患者中产生广泛的中和抗体的思路通常被认为是一种很好的方法，但是在某些患者人群中使用这种方法并不总是理想的。例如，在某些患者中，如在老年的、非常年轻的、免疫功能低下的患者中等等，包含目标抗原的疫苗组合物可能不总是有效的。在这些患者人群中或在不能发起有效免疫应答的任意患者中，提供已含有广泛中和的抗体的组合物可能是更加有益的，该抗体可靶向组1和/或组2的亚型中各种毒株的共有表位。迄今为止，在识别这种广泛中和或抑制流感病毒的抗体方面取得了有限的成功。Okuno等用甲型流感Okuda/57(H2N2)免疫小鼠并分离出一个命名为C179的抗体，该抗体与HA2中的保守构象型表位结合并且在体外和体内中和组1甲型流感病毒的H2、H1和H5亚型(Okuno等，(1993)J.Virol.67(5)：2552-2558)。Throsby等从对组1亚型具有广泛活性的人B细胞中识别了13个单克隆抗体(Throsby等，(2008)，PLOSone3(2)：e3942)。Sui等识别了一种人单克隆抗体(F10)，其与H5和其他组1病毒结合(Sui等，(2009)，Nat.Struct.Mol.Biol.16(3)：265-273)。然而，在这一领域中经过数十年的研究之后，目前仅有少数抗体在进行临床试验，以评估其中和不同亚型流感病毒的能力(参见，例如，正在由：CrucellHolland(US2012/0276115、US2014/0065156、US8470327、US2014/0120113、EP2731967、US8691223、US2013/0243792、US2014/0065165、WO2008/028946和WO2010/130636)；大阪大学(US2011/0319600、EP2380976、US2012/0058124、US2012/0058124)；Celltrion(US2013/0004505、EP2545074、WO2014/158001)；范德堡大学(US2013/0289246)；SeaLane生物技术(US2012/0128671)；Trellis生物科学公司(US2012/0020971、EP2582721)；Visterra公司(US2013/0302349)；Burnham研究所/DanaFarber(US2014/011982、EP2222701、WO2010/027818)；Temasek(US8444986、US8574581、US8637644、US8637645、US8383121、US8540996、US8574830、US8540995)；HUMABS生物科学/生物医学研究所(US8871207)；MedImmune(WO2015/051010)以及Genentech(US2014/0161822)开发的抗体)，但是仍没有市售抗体可以广泛中和或抑制甲型流感病毒感染或减轻由该病毒的各种亚型引起的疾病。因此，本领域仍需要识别中和多种甲型流感病毒亚型的能够用于预防或治疗流感病毒感染的新型抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了与流感血凝素(HA)结合的抗体及其抗原结合片段。特别地，本专利技术的抗体用于抑制或中和流感HA的活性。在一些实施方式中，所述抗体用于阻断流感病毒附着至宿主细胞和/或防止流感病毒进入宿主细胞。在一些实施方式中，所述抗体通过抑制病毒的细胞间传递起作用。在某些实施方式中，所述抗体用于预防、治疗或改善在对象中流感病毒感染的至少一种症状。在某些实施方式中，可以预防性或治疗性地向已被流感病毒感染或处于受流感病毒感染风险中的对象施用所述抗体。在某些实施方式中，可以将含有至少一种本专利技术抗体的组合物施用给禁用疫苗的对象，或者疫苗效果较差的对象(例如老年患者、非常年轻的患者、可能对疫苗的任意一种或多种成分过敏的患者，或可能无法对疫苗中的免疫原产生应答的免疫功能低下的患者)。在某些实施方式中，可以在流感爆发期间，向医务人员、住院患者或疗养院居民或者其他高风险患者施用含有至少一种本专利技术抗体的组合物。在某些实施方式中，可以在每年的预测疫苗无效的情况下，或者在经历了重大抗原漂移的毒株大流行的情况下，将含有至少一种本专利技术抗体的组合物作为一线治疗向患者施用。本专利技术的抗体可以是全长的(例如IgG1或IgG4抗体)或者可以仅包含抗原结合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，并且可以进行修饰以影响其功能，例如增加在宿主中的持续性或者增加效应器功能或消除残余的效应器功能(Reddy等，2000，J.Immunol.164：1925-1933)。在某些实施方式中，所述抗体可以是双特异性的。在第一个方面，本专利技术提供了与流感HA特异性结合的分离的重组单克隆抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，本专利技术提供了一种与甲型流感血凝素(HA)特异性结合的分离的重组抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体具有两个或多个下述特征：(a)是全人单克隆抗体；(b)根据在基于实时生物层干涉仪的生物传感器中测定的(OctetHTX测定)，以小于1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的重组抗体或其抗原结合片段，所述分离的重组抗体或其抗原结合片段与甲型流感血凝素(HA)特异性结合，其中所述抗体具有两个或多个下述特征：(a)是全人单克隆抗体；(b)根据在基于实时生物层干涉仪的生物传感器中测定的(Octet HTX测定)，以小于10

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.19 US 62/094,752;2015.04.24 US 62/152,1221.一种分离的重组抗体或其抗原结合片段，所述分离的重组抗体或其抗原结合片段与甲型流感血凝素(HA)特异性结合，其中所述抗体具有两个或多个下述特征：(a)是全人单克隆抗体；(b)根据在基于实时生物层干涉仪的生物传感器中测定的(OctetHTX测定)，以小于10-9M的解离常数(KD)与流感HA结合；(c)表现出大于370分钟的解离半衰期(t1/2)；(d)表现出以小于130nM的IC50中和组1甲型流感病毒，所述组1甲型流感病毒选自H1N1、H5N1、H9N2、H13N6和H16N3；(e)表现出以小于66nM的EC50对流感病毒感染细胞进行补体介导的裂解；(f)表现出保护作用，由在病毒攻击之前或之后施用时，在流感病毒感染动物模型中的存活增加所测定；或者(g)其中所述抗体或其抗原结合片段包含在表1或表12中列出的任意一个重链可变区(HCVR)序列中所含的三个重链互补性决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在表1或表12中列出的任意一个轻链可变区(LCVR)序列中所含的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。2.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体表现出在猴中的解离半衰期是对照ImAb的约1.5倍，在小鼠中的解离半衰期是对照ImAb的约2倍。3.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中当在感染后48小时施用时，与奥司他韦相比，所述抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出增加的保护作用。4.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中与以约5mg/kg至约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用奥司他韦相比，当以约15mg/kg的单次静脉内剂量向流感病毒感染的哺乳动物施用时，所述抗体表现出增加的保护作用。5.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中在病毒感染后48小时以约15mg/kg的单次剂量施用时，所述抗体在流感病毒感染哺乳动物中表现出约100％的存活率。6.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中与当以约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用奥司他韦时观察到的存活率40％相比，当以约15mg/kg的单次剂量施用时，所述抗体在流感病毒感染哺乳动物中表现出约100％的存活率。7.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中当在感染后72小时与奥司他韦一起施用时，所述抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出叠加的保护作用。8.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中当与奥司他韦联合使用时，所述抗体表现出叠加的保护作用，所述抗体以约7mg/kg至约15mg/kg的单次静脉内剂量施用，以及所述奥司他韦以约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用。9.根据权利要求1-8中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR，所述HCVR具有氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由表1或表12中列出的HCVR序列组成的组。10.根据权利要求1-9中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR，所述HCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：2、18、34、50、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、242、250、258、266、274、282和290。11.根据权利要求1-10中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含LCVR，所述LCVR具有氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由表1或表12中列出的LCVR序列组成的组。12.根据权利要求1-11中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含LCVR，所述LCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：10、26、42、58、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210和226。13.根据权利要求1-12中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：4、20、36、52、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、244、252、260、268、276、284和292；(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：6、22、38、54、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、246、254、262、270、278、286和294；(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：8、24、40、56、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、248、256、264、272、280、288和296；(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO：12、28、44、60、68、84、100、116、132、148、164、180...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·A·珀塞尔，J·维奥，W·奥尔森，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US