用作益生菌的Lactobillus和用于评估对试剂如益生菌的免疫应答的血细胞群制造技术

益生菌制剂，其包含保藏为CBS138100的Lactobacillus plantarum TIFN 101或含有与来自L.plantarum的多核苷酸具有至少85％序列同一性的多核苷酸的细菌菌株，以及所述制剂在疗法中的用途和所述益生菌菌株本身。检测对试剂的应答、优选地免疫应答的方法，所述方法包括：a)利用至少一种抗原刺激外周血单核细胞(PBMC)；b)鉴定PBMC的亚群；c)将所述PBMC的亚群与未用(a)的至少一种抗原刺激的参照样品进行比较。PBMC亚群可以是CD3+/CD4+(T辅助细胞)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用作益生菌的Lactobillus和用于评估对试剂如益生菌的免疫应答的血细胞群专利
本专利技术涉及具有免疫调节性质的新颖益生菌和新颖生物标志物。专利技术背景近年来，人们已普遍接受的是，人类免疫系统行使充分功能依赖于微生物群(microbiota)与人体粘膜的复杂相互作用(Belkaid等，2014；Cao等，2014)。在正常健康状况下，非病原细菌激活免疫系统以诱导对于在能量获得和免疫发生方面至关重要的微生物群的耐受性(deKivit等，2014；Geuking等，2014；Walker等，2014)。然而，在特定条件下，针对有助于疾病(例如IBD)发生的微生物可发生免疫应答(Meijerink等，2010)。更深入地研究微生物如何作用于免疫应答的体内平衡以及如何预防炎症可有益于人类健康。希望这能够引导定制的干预的设计。通过引导T细胞朝向调节性T(Treg)细胞极化并抑制变态反应相关的Th2应答，共生的Lactobacilli种可在维持免疫应答的体内平衡中发挥积极作用(Smelt等，2013)。这被认为是通过与人粘膜中的免疫细胞或上皮细胞相互作用的细菌细胞壁组分或分泌的细菌产物的相互作用来实现的(Walker等，2014)。然而，这些相互作用似乎不仅仅有助于对有益微生物的耐受性。在许多研究中，已显示Lactobacilli对免疫应答有积极影响，如一些疫苗接种研究中所示(Meijerink等，2012；Wells等，2011)。此外，如最近所示，Lactobacilli激活人类中更普遍的致耐受性细胞通路(vanBaarlen等人，2010；vanBaarlen等人，2009)。Lactobacillusplantarum是被充分表征的食源性细菌(vanBaarlen等，2009)。以前的研究已显示，Lactobacillusplantarum菌株对人树突细胞和人外周血单核细胞有不同效果(Meijerink等，2010；Meijerink等，2012；Wells等，2011；vanBaarlen等，2010；vanBaarlen等，2009；VanHemert等，2010)。通过应用比较基因组杂交，已经鉴定出了一些与这些差异效果相关的参与细胞壁磷壁酸糖基化的细菌素和细胞壁组分(Meijerink等，2010；Meijerink等，2012；Wells等，2010；vanBaarlen等，2010；vanBaarlen等，2009；VanHemert等，2010；Smet等，2013)。人们推测Lactobacillusplantarum基因的这种差异表达有助于观察到的Toll样受体(TLR)2–4、CD14抗原和含核苷酸结合寡聚结构域2(NOD2)的活化的差异(Meijerink等，2010)。由于TLR结合的差异，Lactobacillusplantarum菌株在与单核细胞或树突细胞一起孵育时，诱导不同量的促炎细胞因子IL12和调节性细胞因子IL10(Meijerink等，2010；Meijerink等，2012；Wells等，2011；vanBaarlen等，2010；vanBaarlen等，2009；VanHemert等，2010；Smet等，2013；Smelt等，2013)。胃肠屏障可能几乎每天都会被例如非甾体抗炎药物(NAISD)、运动或酒精摄入破坏，并因此引起(轻微的)肠道炎症。西方社会中非常普遍的一个轻微应激源细胞因子是NSAID(例如吲哚美辛)的消耗。数百万人正在使用NSAID来治疗肌肉骨骼疼痛。这些NSAID的副作用是胃肠免疫屏障破坏所引起的轻微肠道炎症(Schoultz等，2012)。由于NSAID被全球数百万人使用，因此迫切需要治疗这种(轻微的)肠道炎症。食源性抗原可发挥作用的另一个问题是维持疫苗接种的疗效。众所周知，对在过去(几十年前)遇到的抗原的免疫记忆可随着时间的推移而减弱。当个体再次遇到抗原或与该抗原相关的病原体时，这种减弱的免疫记忆可能导致对该抗原或与抗原相关的病原体的应答不足(Deasy等，2013；Kerneis等，2014；Poorolajal等，2010；Schure等，2012)。因此，迫切需要保存、维持和/或重新激活免疫记忆。这不仅能够恢复减弱的免疫应答，还能够使宿主免疫系统对疫苗接种方案更加敏感，从而可特别有益于免疫受损的个体，例如年长者。此外，缺乏适当的生物标志物和试验来确定和证明免疫调节产品的效果。因此，迫切需要这种生物标志物和/或试验。专利技术描述出乎意料地，现在已证明特定的Lactobacillus具有免疫调节性质。这种特定的Lactobacillus优选地还具有抗炎性质。因此，在第一方面，本专利技术提供益生菌制剂，其包含至少一种食品级物质和至少一种益生细菌菌株，所述益生细菌菌株与LactobacillusplantarumTIFN101(保藏在真菌菌种保藏中心(CentraalbureauvoorSchimmelcultures),乌普萨兰8号,3584CT，荷兰，保藏号为CBS138100)的基因组具有至少50％序列同一性。所述益生菌制剂在本文中被称为根据本专利技术的益生菌制剂。所述益生细菌菌株在本文中被称为根据本专利技术的益生细菌菌株，其具有免疫调节性质，且优选地还具有抗炎性质。一种优选的根据本专利技术的益生细菌菌株包含至少一种多核苷酸，所述多核苷酸与选自SEQIDNO:1–SEQIDNO:174的多核苷酸序列具有至少50％序列同一性。优选地，根据本专利技术的益生细菌菌株包含至少2种、更优选地3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、20种、30种、40种、50种、60种、70种、80种、90种或最优选地100种多核苷酸，所述多核苷酸各自与选自SEQIDNO:1–SEQIDNO:174的多核苷酸序列具有至少50％序列同一性。一种进一步优选的根据本专利技术的益生细菌菌株包含至少一种多核苷酸，所述多核苷酸与选自SEQIDNO:176–SEQIDNO:256的多核苷酸序列具有至少50％序列同一性。优选地，根据本专利技术的益生细菌菌株包含至少2种、更优选地3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、20种、30种、40种、50种、60种、70种、80种、90种或最优选地100种多核苷酸，所述多核苷酸各自与选自SEQIDNO:176–SEQIDNO:256的多核苷酸序列具有至少50％序列同一性。一种进一步优选的根据本专利技术的益生细菌菌株包含至少一种多核苷酸，所述多核苷酸与编码下述多肽的多核苷酸具有至少50％序列同一性，所述多肽具有选自SEQIDNO:260–SEQIDNO:340的序列。优选地，根据本专利技术的益生细菌菌株包含至少2种、更优选地3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、20种、30种、40种、50种、60种、70种、80种、90种或最优选地100种多核苷酸，所述多核苷酸各自与编码下述多肽的多核苷酸具有至少50％序列同一性，所述多肽具有选自SEQIDNO:260–SEQIDNO:340的序列。可以在体内和体外评估免疫调节性质。对于一种优选的体外评估，从血中分离外周血单核细胞(PBMC)，并用抗原和益生细菌菌株或其部分或提取物刺激。根据本专利技术的益生本文档来自技高网...

【技术保护点】
益生菌制剂，其包含至少一种食品级物质和至少一种益生细菌菌株，所述益生细菌菌株包含至少一种与以下具有至少85％序列同一性的多核苷酸：‑Lactobacillus plantarum TIFN 101的基因组，‑选自SEQ ID NO:1–SEQ ID NO:174的多核苷酸序列，‑选自SEQ ID NO:176–SEQ ID NO:256的多核苷酸序列，和/或‑编码具有选自SEQ ID NO:260–340的序列的多肽的多核苷酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.25 EP 14194729.1;2014.11.25 EP 14194725.91.益生菌制剂，其包含至少一种食品级物质和至少一种益生细菌菌株，所述益生细菌菌株包含至少一种与以下具有至少85％序列同一性的多核苷酸：-LactobacillusplantarumTIFN101的基因组，-选自SEQIDNO:1–SEQIDNO:174的多核苷酸序列，-选自SEQIDNO:176–SEQIDNO:256的多核苷酸序列，和/或-编码具有选自SEQIDNO:260–340的序列的多肽的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其包含至少一种其它益生细菌菌株。3.根据权利要求1或2所述的益生菌制剂，其中益生细菌菌株的浓度范围为约10至约50重量％和/或约1E+6至约1E+12个菌落形成单位/ml制剂。4.根据前述权利要求中任一项所述的益生菌制剂，其形成为片剂的一部分或包含在胶囊内。5.食品、用于食物富化的制剂、食物补充剂、营养制剂或药物制剂，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的益生菌制剂。6.液体体积为0.5-50ml的容器，其包含根据权利要求1-4中任一项所述的益生菌制剂。7.液体体积为0.5-1000ml的容器，其包含根据权利要求5的食品、用于食物富化的制剂、食物补充剂、营养制剂或药物制剂。8.根据权利要求1-4的益生菌制剂或根据权利要求5的食品、用于食物富化的制剂、食物补充剂、营养制剂、药物制剂，或益生细菌菌株，其中所述益生细菌菌株为选自以下的物种：Lactobacillusplantarum、L.casei、L.reuteri、L.fermentum、L.acidophilus、L.crispatus、L.gasseri、L.johnsonii、L.paracasei、L.murinus、L.jensenii、L.salivarius、L.minutis、L.brevis、L.gallinarum、L.amylovorus、Lactococcuslactis、Streptococcusthermophilus、Leuconostocmesenteroid.es、Lc.lactis、Pediococcusdamnosus、P.acidilactici、P.parvulus、Bifidobacteriumbifidum、B.longum、B.infantis、B.breve、B.adolescente、B.animalis、B.gallinarum、B.magnum和B.thermophilum，优选地Lactobacillusplantarum，更优选选自以下的Lactobacillusplantarum：LactobacillusplantarumJDM1、ST-III、F9UP33、EITR17、D7V971(ATCC14917)和C6VQ24，甚至更优选LactobacillusplantarumWCFS1，以及最优选保藏号为CBS138100的LactobacillusplantarumTIFN101。9.益生细菌菌株和/或根据权利要求1-4中任一项所述的益生菌制剂，其被用作药物，优选地用于治疗或预防肠道炎症，所述益生细菌菌株包含至少一种与以下具有至少85％序列同一性的多核苷酸：-LactobacillusplantarumTIFN101的基因组，-选自SEQIDNO:1–SEQIDNO:174的多核苷酸序列，-选自SEQIDNO:176–SEQIDNO:256的多核苷酸序列，和/或-编码具有选自SEQIDNO:260–340的序列的多肽的多核苷酸。10.益生细菌菌株和/或根据权利要求1-4中任一项所述的益生菌制剂，其被用作药物，包括施用有效量的用于调节免疫系统的益生细菌菌株和/或益生菌制剂，所述益生细菌菌株包含至少一种与以下具有至少85％序列同一性的多核苷酸：-LactobacillusplantarumTIFN101的基因组，-选自SEQIDNO:1–SEQIDNO:174的多核苷酸序列，-选自SEQIDNO:176–SEQIDNO:256的多核苷酸序列，和/或-编码具有选自SEQIDNO:260–340的序列的多肽的多核苷酸。11.根据权利要求10使用的益生细菌菌株，其中免疫系统的所述调节包括：维持和/或重新激活由先前免疫引起的免疫应答和/或增加先前通过免疫产生的记忆T细胞。12.一种治疗患肠道炎症的受试者的方法或预防肠道炎症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的益生细菌菌株和/或有效量的根据权利要求1-4中任一项所述的益生菌制剂，所述益...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗斯·德·沃斯，弗雷德里克·简·特罗斯特，兹拉坦·穆贾吉克，玛丽亚·玛格丽塔·法斯，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL