海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法及其专用引物技术

技术编号：17994307 阅读：148 留言：0更新日期：2018-05-19 11:30

本发明专利技术属于生物分子标记领域，具体说是一种海南风吹楠ISSR‑PCR分子标记方法及其专用引物。本发明专利技术海南风吹楠ISSR‑PCR分子标记专用引物为SED ID No.1~9中的任意一条。海南风吹楠ISSR‑PCR分子标记方法包括以下步骤：1）提取海南风吹楠基因组DNA；2）以步骤1）提取的基因组DNA为模板，SED ID No.1~9中的任意一条为引物，通过ISSR‑PCR扩增反应，获得海南风吹楠天然种群遗传信息。本发明专利技术通过建立和优化的海南风吹楠ISSR‑PCR反应体系扩增出的条带清晰度高，稳定性强，多态性丰富的特点。

Molecular marker method and special primer for ISSR-PCR in Hainan

The invention belongs to the field of biomolecular marking, in particular to a molecular marker method for Hainan ISSR PCR and its special primers. The invention is a specific primer for Hainan ISSR PCR SED molecular marker, which is any one of SED ID No.1~9. The following steps include the following steps: 1) the following steps are as follows: 1) extract the genomic DNA from the Hainan wind blows; 2) the genomic DNA extracted from step 1 was the template, and any one of the SED ID No.1~9 was primed, and the genetic information of the Hainan wind blows was amplified by PCR amplification reaction. The invention has the advantages of high clarity, strong stability and abundant polymorphism through the establishment and optimization of the ISSR Hainan PCR reaction system.

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【技术实现步骤摘要】
海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法及其专用引物
本专利技术属于生物分子标记领域，具体说是一种海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法及其专用引物。
技术介绍
海南风吹楠(HorsfieldiahainanensisMerr.)隶属肉豆蔻科(Myristacaceae)，风吹楠属(HorsfieldiaWilld.)，为中国狭域分布的特有常绿高大乔木。其种子含油率高，具较高开发利用价值，木材鲜红色，可作高端家具，装饰等用途。现在主要分布在广西、云南以及海南等地区，多处于中国与缅甸、越南的交界处海拔400~450m的丘陵、山谷的荫湿密林中。海南风吹楠为湿润热带雨林的标识性物种，对研究热带雨林区系构成、地理分布、生态习性以及热带雨林地区濒危植物保护生物学具有重要价值。近年来，由于人为破坏和盗伐，海南风吹楠天然资源日渐减少，残存母树不多，已被中国列为二级重点保护植物，濒危树种。随着分子标记技术的快速发展。目前应用于植物中的DNA分子标记主要有扩增酶切片段长度多态性(AFLP)、限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、序列标志位点(STS)、简单序列重复区间多态性(ISSR)和简单序列重复长度多态性(SSR)等。ISSR分子标记试验操作简单、快速、高效，引物的开发费用低。较SSR分子标记，ISSR引物具通用性和重复性，且ISSR的产物多态性丰富度远高于SSR和RAPD，精确度与RFLP相媲美。因此，ISSR分子标记已广泛应用于植物遗传多样性、分类演化和亲缘关系等方面的研究。近年来，ISSR分子标记在研究濒危植物种群遗传多样性和遗传结构中...
海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法及其专用引物

【技术保护点】
一种海南风吹楠ISSR‑PCR分子标记专用引物，其特征在于，所述的专用引物为SED ID No. 1~9中的任意一条。

【技术特征摘要】
1.一种海南风吹楠ISSR-PCR分子标记专用引物，其特征在于，所述的专用引物为SEDIDNo.1~9中的任意一条。2.一种利用权利要求1所述专用引物的海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：1）提取海南风吹楠基因组DNA；2）以步骤1）提取的基因组DNA为模板，SEDIDNo.1~9中的任意一条为引物，通过ISSR-PCR扩增反应，获得海南风吹楠天然种群遗传信息。3.根据权利要求2所述的海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，所述的ISSR-PCR扩增反应体系为：20μL反应体系中10×PCR缓冲液2μL，Mg2+浓度为1.5mmol/L，模板DNA40ng，dNTP为0.4mmol/L，引物浓度为0.7mmol/L，Taq酶为0.5U。4.根据权利要求2所述的海南风吹楠ISSR-PCR分子标记方法，其特征在于，当所述的引物选自SEQIDNo.1时，步骤（2）进行ISSR-PCR扩增的条件为：94℃预变性3min，94℃变性45s，53.6℃退火45s，72℃延伸90s，25-45个循环，72℃总延伸5min；当所述的引物选自SEQIDNo.2时，步骤（2）进行ISSR-PCR扩增的条件为：94℃预变性3min，94℃变性45s，51.8℃退火45s，72℃延伸90s，25-45个循环，72℃总延伸5min；当所述的引物选自SEQIDNo.3时，步骤（2）进行ISSR-PCR扩增的条件为：94℃预变性3min，94℃变性45...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雄盛，蒋燚，肖玉菲，王勇，何应会，黄荣林，姜英，韦铄星，刘菲，
申请(专利权)人：广西壮族自治区林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：广西,45

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