RAA荧光法检测布鲁氏杆菌的探针及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种检测布鲁氏杆菌RAA荧光法检测试剂盒，检测试剂盒包括以下组分：RAA基础荧光通用反应试剂、反应缓冲液、探针与引物混合物、阴性质控品、阳性质控品及临界阳性质控品。所述探针为5’端序列/荧光报告基团//idSp//淬灭基团/3’端序列；本试剂盒可直接对布鲁氏杆菌DNA检测，尤其可用于检测布鲁氏杆菌DNA含量较低的样品；本试剂盒在30－42℃下进行等温扩增检测，5－20min完成检测。试剂盒操作简单，配合小型仪器、携带方便，具有快速、灵敏、准确、重复性好的优点；适合基层和现场检测，具的良好的应用前景。

Probe and kit for detection of Brucella by RAA fluorescence method

The present invention discloses a detection kit for detection of brucellus RAA fluorescence method. The detection kit includes the following components: RAA basic fluorescence general reaction reagent, reaction buffer solution, probe and primer mixture, negative quality control product, positive quality control product and critical positive quality control product. The probe was 5 'end sequence / //idSp// quenching group /3' end sequence, and the kit could be used to detect Brucella brucellus DNA directly, especially for the samples with low DNA content of brucellus. The kit was tested by isothermal amplification at 30-42 C and 5 to 20 minutes. The kit is easy to operate with small instrument and convenient to carry. It has the advantages of fast, sensitive, accurate and reproducible. It is suitable for the base and field detection and has a good application prospect.

【技术实现步骤摘要】
RAA荧光法检测布鲁氏杆菌的探针及试剂盒
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体涉及一种检测布鲁氏杆菌RAA荧光法检测的探针、引物和试剂盒。
技术介绍
布鲁氏杆菌病(brucellosis)简称布病，亦称“地中海热”、“马耳他热”、“波伏热”等，是由一种布鲁氏杆菌(Brucella)感染牛、羊、猪等家畜，通过呼吸道、消化道、皮肤及生殖系统等引起的人畜共患高度传染病。布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，其特点是不运动，几乎无荚膜(光滑型有微荚膜)，嗜氧菌，氧化酶、触酶阳性，可还原硝酸盐，细胞内寄生，能在家畜体内存活。它一共包括六种：牛型布鲁氏杆菌(流产布鲁氏杆菌)、羊型布鲁氏杆菌(马耳他布鲁氏杆菌)、猪布鲁氏杆菌、狗布鲁氏杆菌、林鼠布鲁氏杆菌和绵羊布鲁氏杆菌等。布病主要发病于中东，非洲，拉丁美洲，中亚和地中海周边几个地区，全球布鲁氏杆菌病患者已达50万左右，其疫情日趋严重，从牧区、半牧区传播至农区甚至向城市蔓延的趋势。本菌侵入人体后，随淋巴液到达淋巴结，被吞噬细胞吞噬，如布菌未被吞噬细胞杀灭，则细菌在胞内生长繁殖，形成局部原发病灶。此阶段有人称为淋巴源性迁徙阶段，相当于潜伏期，潜伏期为7-6本文档来自技高网...

【技术保护点】
RAA荧光法检测布鲁氏杆菌的探针，其特征在于，所述探针为5’端序列/荧光报告基团//idSp//淬灭基团/3’端序列；其中：所述5’端序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述3’端序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述idSp为1个碱基空位；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中的任一种；所述淬灭基团选自TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL中的任一种。

【技术特征摘要】
1.RAA荧光法检测布鲁氏杆菌的探针，其特征在于，所述探针为5’端序列/荧光报告基团//idSp//淬灭基团/3’端序列；其中：所述5’端序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述3’端序列的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述idSp为1个碱基空位；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中的任一种；所述淬灭基团选自TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL中的任一种。2.一种布鲁氏杆菌RAA荧光法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的探针以及下述引物：上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。3.根据权利要求2所述的布鲁氏杆菌RAA荧光法检测试剂盒，其特征在于，所述的探针终浓度为0.02-0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴斌，苏立明，张琳，马嗣同，郭利川，王智宏，应清界，
申请(专利权)人：吴斌，江苏奇天基因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21