醋栗番茄PI128216的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法。所述的方法包括：(1)种子的灭菌及萌发；(2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化；(3)诱导生根等步骤。本发明专利技术以鲜有报道且富含抗性基因的野生醋栗番茄PI128216为材料，通过优化激素组合，改善培养条件，建立了一套高效的番茄再生体系。通过该再生体系可快速实现大量醋栗番茄PI128216植株的扩繁，同时也可以实现醋栗番茄PI128216的优质栽培，为建立醋栗番茄PI128216的组织培养方法提供了有效技术手段。

Tissue culture of PI128216 of gooseberry tomato

The invention discloses a tissue culture method of currant tomato PI128216. The methods include: (1) sterilization and germination of seeds; (2) callus induction and adventitious bud differentiation; (3) induction of rooting. In this invention, the wild gooseberry tomato PI128216, which has been reported and rich in resistance genes, was used as the material. By optimizing the hormone combination and improving the culture conditions, a set of efficient tomato regeneration system was established. Through this regeneration system, the propagation of a large number of PI128216 plants of gooseberry tomato can be realized quickly. At the same time, the high quality cultivation of gooseberry tomato PI128216 can be realized. It provides an effective technique for the establishment of the tissue culture method of the PI128216 of the gooseberry tomato.

【技术实现步骤摘要】
醋栗番茄PI128216的组织培养方法
本专利技术涉及一种番茄的组织培养方法，特别涉及一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法。本专利技术属于农业

技术介绍
番茄(LycopersiconesculentumMill.)作为模式经济作物备受研究者关注，伴随着番茄基因组测序工作的完成，利用基因工程技术改良番茄性状成为必然趋势，而番茄再生体系成功的建立是利用遗传转化技术改良番茄品种(如抗虫、抗病、抗除草剂、抗逆、果实的延熟保鲜等)的重要前提。虽然目前以子叶、下胚轴为外植体建立番茄再生系统已取得成功，但番茄再生体系具有基因依赖性，不同基因型番茄的生理特性、生长条件均不相同，因此不能盲目套用他人的研究结果，需对每个特定番茄品种再生体系的建立进行相应研究，本专利技术以鲜有报道且富含抗性基因的野生醋栗番茄PI128216为材料，通过优化激素组合，改善培养条件，以期建立一套高效的番茄再生体系。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是建立一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法。为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：本专利技术以野生醋栗番茄PI128216为研究对象，对其幼嫩的子叶和下胚轴进行离体培养，研究不同激素浓度及配比对愈伤组织诱导培养、不定芽分化培养和诱导生根培养的影响。试验发现对醋栗番茄PI128216种子的灭菌，用3％NaClO灭菌5min效果为最佳；最适宜诱导子叶和下胚轴愈伤组织分化的培养基为:MS+0.2mg/LIAA+2.0mg/L6-BA；最适宜诱导不定芽分化的培养基为：MS+0.1mg/LIAA+3.0mg/L6-BA；最适宜诱导再生苗的生根的培养基为：1/2MS+0.1mg/LNAA。通过本专利技术建立的醋栗番茄PI128216的组织培养方法，可快速实现大量的植株扩繁，同时也可以实现醋栗番茄PI128216的优质栽培，为植物再生体系研究以及番茄遗传转化体系的构建提供技术手段。具体的，本专利技术的一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法，包括以下步骤：(1)将颗粒饱满的醋栗番茄PI128216种子放入无菌水中浸泡4～5h后，用75v/v％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，然后用3w/v％NaClO溶液浸泡3-5min，之后再用无菌水将种子冲洗3次，用无菌纸将种子表面水分吸干；最后将种子接入种子萌发培养基中，放入人工气候室进行培养获得无菌苗；(2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化将培养6～8d的无菌苗放入超净工作台内，取子叶和下胚轴进行诱导，将子叶用刀片切成0.4-0.6cm2的小方块，子叶背面向下平铺在愈伤组织培养基中，将下胚轴切成0.5-1.5cm长的小段，接种在愈伤组织培养基中，以诱导愈伤组织的发生；将出愈好的愈伤组织移植到诱导不定芽分化培养基上，之后再进行光照培养，诱导不定芽的分化，每隔10d继代一次；(3)诱导生根观察不定芽，当不定芽长至2～3cm时，在超净工作台内用刀片自芽基部切下，将再生苗接种于诱导生根培养基中进行诱导生根，得到醋栗番茄PI128216的组织培养幼苗。在所述的培养方法中，优选的，步骤(1)中3w/v％NaClO溶液浸泡的时间为5min。在所述的培养方法中，优选的，步骤(1)所述的种子萌发培养基为含有6～7g/L琼脂的1/2MS培养基。在所述的培养方法中，优选的，步骤(2)中所述的愈伤组织培养基为含有0.2mg/LIAA、2.0mg/L6-BA、20g/L蔗糖，6～7g/L琼脂，pH＝6.8的MS培养基。在所述的培养方法中，优选的，步骤(2)中所述的诱导不定芽分化培养基为含有0.1mg/LIAA、3.0mg/L6-BA、20g/L蔗糖，6～7g/L琼脂，pH＝6.8的MS培养基。在所述的培养方法中，优选的，步骤(3)中所述的诱导生根培养基为含有0.1mg/LNAA、6～7g/L琼脂的1/2MS培养基。在所述的培养方法中，优选的，人工气候培养室的培养温度为25℃±1℃，光照时间16h/天，光照强度2000lx。在所述的培养方法中，优选的，用于醋栗番茄PI128216的组织培养的外植体为子叶。相较于现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术以鲜有报道且富含抗性基因的野生醋栗番茄PI128216为材料，通过优化激素组合，改善培养条件，以期建立一套高效的番茄再生体系。通过该再生体系可快速实现大量醋栗番茄PI128216植株的扩繁，同时也可以实现醋栗番茄PI128216的优质栽培，为建立醋栗番茄PI128216的组织培养方法提供了有效技术手段。附图说明图1为采用3w/v％NaClO灭菌5min的种子的萌发以及染菌情况；图2为采用0.1w/v％升汞灭菌3min的种子的萌发以及染菌情况；图3A为采用愈伤组织培养基(MS+0.2mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)得到的子叶愈伤；图3B为采用愈伤组织培养基(MS+0.2mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)得到的下胚轴愈伤；图4A为采用愈伤组织培养基(MS+0.1mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)得到的子叶愈伤；图4B为采用愈伤组织培养基(MS+0.1mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)得到的下胚轴愈伤；图5A为采用愈伤组织培养基(MS+0.3mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)得到的子叶愈伤；图5B为采用愈伤组织培养基(MS+0.3mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)得到的下胚轴愈伤；图6A为在不定芽分化培养基(MS+0.1mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)上子叶诱导形成的不定芽；图6B在不定芽分化培养基(MS+0.1mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)上下胚轴诱导形成的不定芽；图7A在不定芽分化培养基(MS+0.5mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)上子叶诱导形成的不定芽；图7B在不定芽分化培养基(MS+0.5mg/LIAA+2.0mg/L6-BA)上下胚轴诱导形成的不定芽；图8A在不定芽生根培养基(1/2MS+0.1mg/LNAA)上诱导的初期生根情况；图8B在不定芽生根培养基(MS+0.1mg/LNAA)上诱导的初期生根情况；图9在不同的不定芽生根培养基上的诱导生根比较。具体实施方式下面结合具体实施例和附图来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1醋栗番茄PI128216组织培养方法的建立1材料及方法1.1材料1.1.1试验品种醋栗番茄PI128216来自中国农业大学园艺学院蔬菜分子遗传育种实验室。1.1.2培养基种子萌发培养基：1/2MS培养基(含6～7g/L琼脂，大量元素减半，其他成分不变)愈伤组织培养基和不定芽分化培养基：在MS培养基中(含20g/L蔗糖，6～7g/L琼脂，pH＝6.8)添加不同浓度的IAA(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L)和不同浓度的6-BA(1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg/L)组合。诱导生根培养基：在1/2MS和MS培养基(含6～7g/L琼脂)中分别添加不同浓度的NAA(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将颗粒饱满的醋栗番茄PI128216种子放入无菌水中浸泡4～5h后，用75v/v％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，然后用3w/v％NaClO溶液浸泡3‑5min，之后再用无菌水将种子冲洗3次，用无菌纸将种子表面水分吸干；最后将种子接入种子萌发培养基中，放入人工气候室进行培养获得无菌苗；(2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化将培养6～8d的无菌苗放入超净工作台内，取子叶和下胚轴进行诱导，将子叶用刀片切成0.4‑0.6cm

【技术特征摘要】
1.一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将颗粒饱满的醋栗番茄PI128216种子放入无菌水中浸泡4～5h后，用75v/v％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，然后用3w/v％NaClO溶液浸泡3-5min，之后再用无菌水将种子冲洗3次，用无菌纸将种子表面水分吸干；最后将种子接入种子萌发培养基中，放入人工气候室进行培养获得无菌苗；(2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化将培养6～8d的无菌苗放入超净工作台内，取子叶和下胚轴进行诱导，将子叶用刀片切成0.4-0.6cm2的小方块，子叶背面向下平铺在愈伤组织培养基中，将下胚轴切成0.5-1.5cm长的小段，接种在愈伤组织培养基中，以诱导愈伤组织的发生；将出愈好的愈伤组织移植到诱导不定芽分化培养基上，之后再进行光照培养，诱导不定芽的分化，每隔10d继代一次；(3)诱导生根观察不定芽，当不定芽长至2～3cm时，在超净工作台内用刀片自芽基部切下，将再生苗接种于诱导生根培养基中进行诱导生根，得到醋栗番茄PI128216的组织培养幼苗。2.如权利要求1所述的培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文慧，张永彬，周新刚，吴凤芝，潘凯，刘守伟，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23