一种白菊的离体快速繁殖培养方法技术

本发明专利技术涉及一种白菊的离体快速繁殖培养方法，属于植物组织培养技术领域，本发明专利技术选取外植体的灭菌处理，通过愈伤组织诱导、不定芽诱导、不定芽增值、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽后，得到白菊的完整植株；本发明专利技术通过对仙女杯属白菊的组织培养诱导研究，建立了白菊的组织培养快繁体系，具有诱导效率高、增殖系数高、根系发达、移栽成活率高、生长周期短等特点，大大提高了白菊的育苗效率，增加白菊的繁殖方法，为多肉植物白菊的研究和开发利用提供理论数据，为白菊种苗产业化、市场化提供技术支持。

A rapid propagation and culture method of white chrysanthemum in vitro

The present invention relates to a rapid propagation and culture method of white chrysanthemum in vitro, which belongs to the technical field of plant tissue culture. The invention selects the sterilization treatment of explants, through callus induction, adventitious bud induction, adventitious bud increment, strong seedling cultivation, rooting culture and transplant and transplant, the whole plant of chrysanthemum chrysanthemum is obtained. A rapid propagation system of white chrysanthemum was established, which has the characteristics of high induction efficiency, high proliferation coefficient, high root system, high transplant survival rate and short growth cycle, which greatly improved the seedling efficiency of the white chrysanthemum and increased the breeding method of white chrysanthemum, which was a multifleshy plant white chrysanthemum. Research, development and utilization provide theoretical data to provide technical support for the industrialization and marketization of white chrysanthemum seedlings.

【技术实现步骤摘要】
一种白菊的离体快速繁殖培养方法
本专利技术属于植物组织培养
，具体的说，涉及一种白菊的离体快速繁殖培养方法。
技术介绍
白菊，又名格瑞内（Dudleyagreenei），为景天科仙女杯属多肉植物，叶片无毛，生长在莲座基部，叶片颜色通常从绿色至灰色，观赏价值较高。原产墨西哥及美国，现世界多地可栽培。白菊喜温暖干燥和阳光充足环境，不耐寒，耐半阴和干旱，怕水湿和强光暴晒，夏天有休眠期。需要接受充足日照叶色才会艳丽，株型才会更紧实美观。日照太少则叶色浅，叶片排列松散，拉长。目前，白菊无法叶插繁殖，只能采用播种与砍头进行繁殖，繁殖方式单一，种源稀少，繁殖速度较慢。播种繁殖难于维持母株的优良性状，砍头繁殖影响母株的美观效果，两种繁殖方式都存在很大的局限性，造成市场价值较高，非常不利于白菊的种植推广。
技术实现思路
为了克服
技术介绍
中存在的问题，本专利技术提供了一种白菊的离体快速繁殖培养方法，建立了白菊的组织培养快繁体系，增加白菊的繁殖方法，为多肉植物白菊的研究和开发利用提供理论数据，为白菊种苗产业化、市场化提供技术支持。为实现上述目的，本专利技术是通过如下技术方案实现的：所述的白菊的离体快速繁殖培养方法，具体包括以下步骤：（1）外植体的灭菌处理：选取外植体用自来水清洗表面的赃物，流水冲洗30min-40min，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞滴入2滴吐温消毒6-10min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分；（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）得到的消毒后的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+0.5-1.0mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.5mg/LKT+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养3-5d后外植体基部开始萌动膨大，培养7-14d后基部周围形成团状愈伤组织；（3）不定芽诱导：将步骤（2）诱导形成的愈伤组织切割成0.4-0.8cm大小的切块，接种到不定芽诱导培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.05-0.1mg/LKT+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养5-7d后愈伤组织开始分化形成不定芽；（4）不定芽增殖：将步骤（3）得到的不定芽分割成2-4株为一丛，接种到增殖培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，培养30-40d后，增殖3-5倍；（5）壮苗培养：将步骤（4）得到的增殖苗分割成2-3株为一丛，接种到壮苗培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.1-0.3mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，培养40-50d后，形成1.5-2cm的小苗株；（6）生根培养：将步骤（5）中得到的小苗株分割成单株接种到生根培养基MS+0.05-0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，培养30-40d后，得到生根苗；（7）炼苗移栽：将步骤（6）得到的生根苗移到温室内驯化5-7d，然后取出苗洗净植株根系附着培养基，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10min，取出放置于阴凉处晾干水分，栽植于基质中，遮光70-80%，保持通风，相对湿度60-80%；栽植2周后逐渐增加光照；3-4周后，植株开始生长，发新根，得到白菊完整植株。进一步的，步骤（1）中，所述外植体为白菊的侧芽。进一步的，步骤（2）-步骤（6）中，培养条件为温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照15h/d，相对湿度50-60％。进一步的，步骤（7）中，生根苗放置于阴凉处晾干水分至苗轻微萎焉。进一步的，步骤（7）中，所述基质包括腐殖土、蛭石、珍珠岩，其比例为1：1：1。进一步的，步骤（7）中，生根苗栽植于基质后，每周喷施一次1/4MS营养液和0.1%多菌灵。本专利技术的有益效果：1、本专利技术通过建立白菊的组织培养快繁体系，解决了白菊不能叶插繁殖，只能靠砍头繁殖和播种繁殖的局限，增加仙女杯属植物白菊的繁殖方式，有效的增加了市场的供应，为广大爱好者提供优良充足的种苗来源；2、本专利技术通过对白菊侧芽进行诱导培养，愈伤组织诱导率达到90%以上，愈伤组织诱导不定芽分化率达到85%以上，繁殖系数达到3-5倍，生根率100％，移栽成活率89％以上，便于工厂化、规模化育苗，为多肉植物白菊的研究和开发利用提供理论数据，为白菊种苗产业化、市场化提供技术支持。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本专利技术的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。实施例1（1）外植体的消毒处理：选择白菊的侧芽作为外植体，用自来水清洗表面的赃物，流水冲洗30min-40min，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞（质量比）滴入2滴吐温消毒6-10min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分。（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）得到的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+0.5-1.0mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.5mg/LKT+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照15h/d，相对湿度50％-60％的条件下进行诱导培养，培养3-5d基部开始萌动膨大，培养7-14d后基部周围形成团状愈伤组织。1周后统计成活苗数，污染率10.5%，成活率达到64%以上。21d后统计白菊侧芽愈伤组织诱导率达到90%以上。（3）不定芽诱导：将步骤（2）诱导形成的愈伤组织切割成0.4-0.8cm大小的切块，接种到不定芽诱导培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.05-0.1mg/LKT+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照15h/d，相对湿度50％-60％的条件下进行诱导培养，培养5-7d后愈伤组织开始分化形成不定芽。培养20-30d后统计，愈伤组织诱导不定芽分化率达到85%以上。（4）不定芽增殖：将步骤3得到的不定芽分割成2-4株为一丛，接种到增殖培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照15h/d，相对湿度50％-60％的条件下进行增殖培养。培养30-40d后，增殖可达3-5倍。（5）壮苗培养：将步骤（4）得到的增殖苗分割成2-3株为一丛，接种到壮苗培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.1-0.3mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照15h/d，相对湿度50％-60％的条件下进行壮苗培养。培养40-50d后，形成1.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白菊的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）外植体的灭菌处理：选取外植体用自来水清洗表面的赃物，流水冲洗30min‑40min，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3‑4次，再用0.1%升汞滴入2滴吐温消毒6‑10min，期间不时振荡，无菌水冲洗4‑5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分；（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）得到的消毒后的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+0.5‑1 .0mg/L6‑BA+0.01‑0.1mg/LNAA+0.1‑0.5mg/LKT+20‑30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8‑6.0，诱导培养3‑5d后外植体基部开始萌动膨大，培养 7‑14d 后基部周围形成团状愈伤组织；（3）不定芽诱导：将步骤（2）诱导形成的愈伤组织切割成0.4‑0.8cm大小的切块，接种到不定芽诱导培养基MS+0.2‑0.6mg/L6‑BA+0.01‑0.1mg/LNAA+0.05‑0.1mg/LKT+20‑30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8‑6.0，诱导培养5‑7d后愈伤组织开始分化形成不定芽；（4）不定芽增殖：将步骤（3）得到的不定芽分割成2‑4株为一丛，接种到增殖培养基MS+0.2‑0.6mg/L6‑BA+0.05‑0.2mg/LNAA+20‑30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8‑6.0，培养30‑40d后，增殖3‑5倍；（5）壮苗培养：将步骤（4）得到的增殖苗分割成2‑3株为一丛，接种到壮苗培养基MS+0.2‑0.6mg/L6‑BA+0.1‑0.3mg/LNAA+20‑30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8‑6.0，培养40‑50d后，形成1.5‑2cm的小苗株；（6）生根培养：将步骤（5）中得到的小苗株分割成单株接种到生根培养基MS+0.05‑0.1mg/L6‑BA+0.5‑1.0mg/LNAA+20‑30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8‑6.0，培养30‑40d后，得到生根苗；（7）炼苗移栽：将步骤（6）得到的生根苗移到温室内驯化5‑7d，然后取出苗洗净植株根系附着培养基，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10 min，取出放置于阴凉处晾干水分，栽植于基质中，遮光70‑80%，保持通风，相对湿度60‑80%；栽植2周后逐渐增加光照；3‑4周后，植株开始生长，发新根，得到白菊完整植株。...

【技术特征摘要】
1.一种白菊的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）外植体的灭菌处理：选取外植体用自来水清洗表面的赃物，流水冲洗30min-40min，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞滴入2滴吐温消毒6-10min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分；（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）得到的消毒后的外植体接种于愈伤组织诱导培养基MS+0.5-1.0mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.5mg/LKT+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养3-5d后外植体基部开始萌动膨大，培养7-14d后基部周围形成团状愈伤组织；（3）不定芽诱导：将步骤（2）诱导形成的愈伤组织切割成0.4-0.8cm大小的切块，接种到不定芽诱导培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.05-0.1mg/LKT+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养5-7d后愈伤组织开始分化形成不定芽；（4）不定芽增殖：将步骤（3）得到的不定芽分割成2-4株为一丛，接种到增殖培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，培养30-40d后，增殖3-5倍；（5）壮苗培养：将步骤（4）得到的增殖苗分割成2-3株为一丛，接种到壮苗培养基MS+0.2-0.6mg/L6-BA+0.1-0.3mg/LNAA+20...

【专利技术属性】
技术研发人员：李涵，曹桦，瞿素萍，田敏，陆琳，王继华，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，玉溪澄花生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53