一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法技术

一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法，根据转基因玉米Bt11外源基因草丁膦乙酰转移酶基因PAT及玉米基因组连接区域的序列，设计了RPA引物，该RPA引物包括正向引物F和反向引物R，具体序列为：F：5’‑CTGGGAGGCCAAGGTATCTAATCAGCCATCCC‑3’；R：5’‑CTGCTGTAGCTGGCCTAATCTCAACTGGTCTCC‑3’，建立了基于重组酶聚合酶等温扩增技术的快速检测方法，对转基因玉米Bt11品系进行快速鉴定，特异性强，灵敏度高，短时间内即能实现对目的片段的指数扩增，对环境设备要求低，操作简便，在转基因产品成分检测领域具有广阔的推广应用前景。

A RPA primer for detection of transgenic maize Bt11 strain and its detection method

A RPA primer and detection method for detecting the transgenic maize Bt11 strain was designed. The RPA primers were designed according to the sequence of the gene PAT of the transgenic maize Bt11 and the sequence of the maize genome junction. The RPA primers included the positive primer F and the reverse primer R, with the body sequence of F:5 'CTGGGAGGCCAAGGTATCTA. ATCAGCCATCCC 3 '; R:5' CTGCTGTAGCTGGCCTAATCTCAACTGGTCTCC 3 ', a rapid detection method based on recombinant enzyme polymerase isothermal amplification was established for rapid identification of genetically modified maize Bt11 strains, with high specificity and high sensitivity. The preparation is low in requirement and easy to operate, and has broad application prospects in the field of detection of genetically modified products.

【技术实现步骤摘要】
一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法
本专利技术属于植物分子生物学领域，具体涉及一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法。
技术介绍
随着转基因技术研究与应用的快速发展，转基因产品检测技术的研究已成为全球转基因生物安全管理的重要组成部分。PCR技术在转基因检测中有着广泛的应用，但是，常规的PCR检测需要精密的热循环仪以及复杂的实验程序，难以满足非实验室环境下转基因核酸成分快速筛查和检测的需求。近年来，核酸等温扩增技术得到了较快的发展，与常规PCR相比，核酸等温扩增技术不再需要热循环仪器，可在恒温条件下快速扩增出目的片段，快速、简便、灵敏。目前，主要的等温扩增技术有环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)、滚环扩增技术(Rollingcircleamplification，RCA)以及重组酶聚合酶扩增技术(Recombinaseploymeraseamplification，RPA)等。RPA技术原理是模拟生物体内DNA复制，由重组酶介导、在37℃下即可对目标片段进行等温扩增，实现单分子核酸检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物，其包括正向引物F和反向引物R，具体序列如下：F：5’‑CTGGGAGGCCAAGGTATCTAATCAGCCATCCC‑3’；R：5’‑CTGCTGTAGCTGGCCTAATCTCAACTGGTCTCC‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物，其包括正向引物F和反向引物R，具体序列如下：F：5’-CTGGGAGGCCAAGGTATCTAATCAGCCATCCC-3’；R：5’-CTGCTGTAGCTGGCCTAATCTCAACTGGTCTCC-3’。2.一种用于检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的RPA引物。3.根据权利要求2所述的RPA检测试剂盒，其特征在于，其包含RPA反应体系，该RPA反应体系中，各成分的终浓度为：RPA引物的正向引物、反向引物各为0.4-1.0μmol/L，且，正向引物、反向引物的比例为0.5-2：1，DNA模板100-1000ng/μL，醋酸镁10-16mmol/L。4.一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测方法，包括：1)提取待测样品的DNA作为模板；2)将权利要求1的RPA引物对加入到RPA扩增反应体系中，进行RPA扩增反应，扩增温度32-42℃，反应时间15～25分钟；3)然后通过琼脂糖凝胶电泳，若得到片段大小为188bp的条带，则证明待测样品中含有转基因玉米Bt11品系...

【专利技术属性】
技术研发人员：武国干，唐雪明，潘爱虎，孙宇，李鹏，吴潇，吕贝贝，蒋玮，王金斌，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31