The invention discloses a method of using tea tree cytochrome P450 to identify the tea tree variety, including the following steps: extracting the bud and leaf bud of the tea tree, extracting the total RNA, reverse transcription of the total RNA as a cDNA template for qRT PCR, and design the primers for qRT PCR based on the nucleotide sequence of CYP71A26 and CYP71B34. The nucleotide sequences of CYP71A26 and CYP71B34 were shown as SEQ ID No:1 and SEQ ID No:2, respectively. The relative expression ratio of the cytochrome P450 gene in the same tea tree was detected and calculated using the cDNA template and primers, and the ratio of the cytochrome P450 gene to the same tea tree was detected and calculated, and the varieties of the tea tree were identified by the relative table ratio value. Compared with the existing technology, the method has the advantages of simple operation, high identification efficiency and accurate identification results.
【技术实现步骤摘要】
一种利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法
本专利技术涉及分子生物学领域，具体及一种利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法。
技术介绍
茶树(Camelliasinensis[L.]O.Kuntze)属多年生常绿木本植物，是我国重要的经济作物之一。目前通过审定的国家级品种已有100多个，各产茶省区审定通过的省级品种则更多。由此，有必要掌握茶树品种间的识别方法，在茶树引种栽培时辨别品种真伪，防止品种间混杂。传统的识别茶树品种方法，包括以下步骤：S1、察看树相，树相包括树型和树姿两方面：树型有灌木、小乔木、乔木三种，树姿又分开展、半开展和直立三种类型；S2、观察叶片，包括叶片大小、叶的形状、叶面的隆起性、叶的着生角度、叶的颜色等内容；此外，芽叶茸毛的多少、形状、大小、萌芽期早晚等亦作为茶树品种识别的参考依据。因此，传统茶树品种鉴定方法较为复杂，需要具备一定的感性认识和长时间的经验积累才能够对茶树进行准确的鉴定。福云6号、金观音、丹桂、黄旦是福建各茶区具有代表性的品种，特别在福建闽东地区种植面积较广，但4个品种从形态学上较难快速辨别出来，而分子生物学技术具有客观...
【技术保护点】
一种利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、摘取待鉴别茶树的一芽一叶树芽，提取总RNA；S2、将上述总RNA反转录为用于qRT‑PCR的cDNA模板，根据CYP71A26和CYP71B34的核苷酸序列，设计qRT‑PCR的引物，所述CYP71A26和CYP71B34的核苷酸序列分别如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示；S3、利用上述cDNA模版和引物进行qRT‑PCR，检测并计算细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34在同一茶树品种中的相对表达比值，通过相对表达比值判别茶树的品种。
【技术特征摘要】
1.一种利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、摘取待鉴别茶树的一芽一叶树芽，提取总RNA；S2、将上述总RNA反转录为用于qRT-PCR的cDNA模板，根据CYP71A26和CYP71B34的核苷酸序列，设计qRT-PCR的引物，所述CYP71A26和CYP71B34的核苷酸序列分别如SEQIDNo:1和SEQIDNo:2所示；S3、利用上述cDNA模版和引物进行qRT-PCR，检测并计算细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34在同一茶树品种中的相对表达比值，通过相对表达比值判别茶树的品种。2.根据权利要求1所述的利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法，其特征在于：所述引物需满足以下条件：C1、引物长度在18bp～23bp之间；C2、荧光定量产物总长度介于100bp-150bp之间；C3、引物退火温度TM值介于58℃-62℃之间；C4、引物碱基分布均匀，避开T/C，A/G连续结构，引物中G+C的含量介于45％-55％之间；C5、引物自身不能出现连续4个互补碱基。3.根据权利要求2所述的利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法，其特征在于：所述CYP71A26的上游引物序列为：5’-TAGGCAACGGCAAGCAATAC-3’，下游引物序列为：5’-GCAATGGAATAGGAGGATGTAGG-3’，所述CYP71A26的上游引物和下游引物的序列分别如SEQIDNo:3和SEQIDNo:4所示。4.根据权利要求2所述的利用茶树细胞色素P450鉴别茶树品种的方法，其特征在于：所述CYP71B34的上游引物序列为：5’-GCTTCCTGCTCTCATCATCCT-3’，下游引物序列为：5’-TGCCGAGTTGGTGGAGGTT-3’，所述CYP71B34的上游引物和下游引物的序列分别如SEQIDNo:5和SEQIDNo:6所示。5.根据权利要求1所述的利用茶...
【专利技术属性】
技术研发人员：单睿阳，李良德，陈常颂，钟秋生，陈志辉，林郑和，游小妹，
申请(专利权)人：福建省农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35
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