本发明专利技术公开了一种肿瘤靶向药物敏感性检测试剂盒，它包括任选的用于检测MicroRNA‑31‑5p表达水平的试剂。本发明专利技术还公开了检测MicroRNA‑31‑5p表达水平的试剂在制备肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒中的用途。本发明专利技术试剂盒通过检测MicroRNA‑31‑5p的表达水平，可以判断肿瘤患者对靶向药sorafenib、sunitinib的敏感性，用于预测临床肿瘤患者的药物治疗效果，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供依据，临床应用前景良好。
Use of reagents for detecting the level of MicroRNA-31-5p expression
The invention discloses a tumor targeted drug sensitivity detection kit, which comprises an optional reagent for detecting the expression level of MicroRNA 31 5p. The invention also discloses the use of the reagent for detecting the expression level of MicroRNA 31 5p in the preparation of the sensitivity test kit for tumor targeting agents. The kit can determine the sensitivity of the tumor patients to the target drug sorafenib and sunitinib by detecting the expression level of the MicroRNA 31 5p. It can be used to predict the therapeutic effect of the clinical cancer patients, and provide the basis for the patients to take relevant treatment measures or decisions. The clinical application prospects are good.
【技术实现步骤摘要】
检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂的用途
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂在制备肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒中的用途。
技术介绍
随着分子生物学技术的发展，人们对肿瘤发病机制有了进一步认识，继而开始了针对细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的治疗，称之为“靶向治疗targetedtherapy”，因此，肿瘤靶向药也成为治疗肿瘤的重要药物。与传统化疗药物相比，肿瘤靶向药具有特异性强、疗效明显、正常组织损伤少等优点，此类药物主要有两类，单克隆抗体和小分子化合物。现已有多靶点治疗药物—索拉非尼(2005年上市，sorafenib，BAY43-9006)、舒尼替尼(2006年上市，sunitinib，SU11248)上市和多个多靶点小分子化合物处于临床试验阶段。肿瘤靶向小分子化合物药显示出广谱的抗肿瘤活性，尤其是索拉非尼、舒尼替尼上市以来显著延长肝癌、肾癌等晚期肿瘤患者的总生存，改善生活质量，而且这类药物大多具有低毒性、使用方便、可长期用药等特点，临床应用前景广阔。但仍有一部分患者对这类药物发生原发或继发耐药，导致治疗失败。如晚期肾癌患者一线接受sunitinib治疗的中位疾病无进展生存(PFS)仅为8-10个月；sorafenib治疗晚期肾癌的中位PFS只有5.8个月，阐明其耐药机制，发现耐药相关预测分子，对提高肿瘤疗效具有重要意义。另外，这类药物价格比较昂贵，精准用药将能够大大减轻患者家庭的经济负担。但目前缺乏有效的生物标记物筛选出对靶向药如索拉非尼、舒尼替尼可能有效的亚组人群。同时，也无有效的血液学标志物监控此类药物何时出现耐药，以便及时采用其他治疗措施抑制肿瘤进展。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约为17～25个核苷酸的非编码RNA，在进化中具有高度保守性，它主要通过与mRNA3’UTR端或特异序列结合发挥作用，可以促进靶基因mRNA降解或者抑制其翻译进而调节基因的表达。miR-31-5p是近年来研究较为关注的miRNA之一，已有报道发现其在不同类型的肿瘤中可能发挥不同作用，比如，在肺癌、结肠癌中，miR-31-5p的表达促进肺癌的发生，而在胃癌、甲状腺癌、前列腺癌等肿瘤中，却呈现表达下调趋势，并发挥抑癌基因功能。但是，目前尚未见MicroRNA-31-5p的表达与肿瘤靶向药索拉非尼或舒尼替尼的治疗相关的报道。
技术实现思路
专利技术人在肿瘤多靶点小分子抑制剂药物敏感性检测方面进行了详细研究，发现了MicroRNA-31-5p可以作为其分子标志物。其中，MicroRNA-31-5p在微囊泡中的表达水平与肿瘤靶向药sorafenib、sunitinib的药物敏感性相关。因此，通过微囊泡中的MicroRNA-31-5p表达水平，可以预测待检肿瘤患者的药物治疗效果。据此，本专利技术提供了一种肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒，以及检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂在制备肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒中的用途，并在此基础上，提供了一种增强肿瘤靶向药敏感性的药物。本专利技术提供了一种肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒，它包括任选的用于检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂。其中，所述肿瘤靶向药是索拉非尼和/或舒尼替尼。其中，所述试剂是用于检测微囊泡中MicroRNA-31-5p表达水平的试剂；和/或，所述检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂包括能特异性扩增MicroRNA-31-5p的PCR引物。本专利技术还提供了检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂在制备肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒中的用途。其中，所述肿瘤靶向药是索拉非尼和/或舒尼替尼。其中，所述试剂是用于检测微囊泡中MicroRNA-31-5p表达水平的试剂；和/或，所述检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂包括能特异性扩增MicroRNA-31-5p的PCR引物。本专利技术还提供了降低MicroRNA-31-5p表达水平的试剂在制备增强肿瘤靶向药敏感性药物中的用途。其中，所述药物为逆转肿瘤靶向药耐药性的药物。其中，所述肿瘤靶向药是索拉非尼和/或舒尼替尼；所述试剂为敲除MicroRNA-31-5p的试剂、使MicroRNA-31-5p沉默的试剂或MicroRNA-31-5p的抑制剂；其中，所述试剂为含有MicroRNA-31-5p反义链的慢病毒载体。本专利技术还提供了一种增强肿瘤靶向药敏感性的药物，它能够降低MicroRNA-31-5p的表达水平；其中，所述肿瘤靶向药是索拉非尼和/或舒尼替尼。本专利技术通过检测MicroRNA-31-5p的表达水平，可以判断不同肿瘤患者对肿瘤靶向药的敏感性，进而判断其是否适用特定的肿瘤靶向药治疗：若MicroRNA-31-5p的表达水平高，则患者对肿瘤靶向药sorafenib、sunitinib耐药，若MicroRNA-31-5p的表达水平低，则肿瘤靶向药sorafenib、sunitinib敏感性高，可用于预测临床肿瘤患者的药物治疗效果，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供依据，临床应用前景良好。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1:从Sorafenib耐药的肾癌细胞株(786-0-SorR)的培养基上清液中分离纯化微囊泡(MV)，使用电镜鉴定其形态(图1A)，并用wseternblot验证囊泡表面特异性分子CD63的表达情况(图1B)。图2:耐药细胞分泌的MV能影响其亲本细胞的药物敏感性，导致亲本细胞对Sorafenib耐药。图3:流式细胞术示耐药786-0-SorR细胞分泌的MV能影响其亲本786-0细胞的药物敏感性，导致亲本细胞对Sorafenib抵抗。图4:示耐药786-0-SorR细胞分泌的MV能增强药物敏感的786-0细胞的克隆形成能力。786-0MV：药物敏感细胞786-0分泌的微囊泡(作为对照)，786-0-SorR：Sorafenib耐药细胞分泌的微囊泡(*P＜0.05)。图5:示耐药786-0-SorR细胞分泌的MV能增强药物敏感的786-0细胞的侵袭能力。786-0MV：药物敏感细胞786-0分泌的微囊泡(作为对照)，786-0-SorR：Sorafenib耐药细胞分泌的微囊泡(*P＜0.05)。图6:定量RT-PCR证实MicroRNA-31-5p在耐药细胞及其分泌的MV中高表达；A：786-0-SorR细胞中MicroRNA-31-5p的表达较其亲本显著增加；B：MicroRNA-31-5p在786-0-SorR细胞分泌的MV中明显高表达(*P＜0.05，**P＜0.01)。图7:上调MicroRNA-31-5p的表达能介导药物敏感肿瘤细胞或HUVEC对Sorafenib耐药；A：定量PCR证实MicroRNA-31-5p在慢病毒感染后明显高表达；B：上调MicroRNA-31-5p能导致药物敏感肿瘤细胞或HUV本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测MicroRNA‑31‑5p表达水平的试剂。
【技术特征摘要】
1.一种肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述肿瘤靶向药是索拉非尼和/或舒尼替尼。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂是用于检测微囊泡中MicroRNA-31-5p表达水平的试剂；和/或，所述检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂包括能特异性扩增MicroRNA-31-5p的PCR引物。4.检测MicroRNA-31-5p表达水平的试剂在制备肿瘤靶向药敏感性检测试剂盒中的用途。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述肿瘤靶向药是索拉非尼和/或舒尼替尼。6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述试剂是用于检测微囊泡中MicroRNA-31-5p表达水平的试剂；和...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭星辰，何金兰，李平，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川,51
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