一种准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法技术
A method for accurately counting the abundance of microorganisms in invertebrate hemolymph
The invention discloses a method for accurately counting the abundance of microorganisms in invertebrate hemolymph. Step: 75% ethanol was used to sterilize the blood site and haemolymph was extracted with 1 mL syringe, and the hemolymph was mixed with ACD anticoagulant at the volume ratio of 1:1. The blood cells in hemolymph were removed by 5 - M pore membrane filtration, and the filtrate was then filtered for 0.2 - M pore size membrane. Using SYBR
【技术实现步骤摘要】
一种准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法
本专利技术涉及计数微生物丰度的方法，具体地说是一种准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法。
技术介绍
拟穴青蟹（Scyllaparamamosain，简称青蟹）是广盐广温性的海洋经济甲壳动物，它是我国青蟹属的优势种，其个体大、肉味甘美，营养与经济价值高。青蟹主要分布于广东、福建、浙江、广西和海南沿岸海域，是我国最重要的海水养殖蟹类之一（林琪等，2007），目前青蟹年产量超过14万吨、年产值愈100亿，在我国海水鱼类和海水甲壳动物养殖产量中位居第二（王桂忠等，2016）。凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）原产于太平洋西岸的拉丁美洲，其甲壳较薄，虾体呈青灰色或青蓝色。凡纳滨对虾食性广，环境适应能力强，能在温度13~40℃，盐度2-34的环境中存活（徐国方，2008）。凡纳滨对虾是我国养殖产量最大的虾类，2015年我国凡纳滨对虾养殖产量占当年对虾总产量的85.85%，达到162.524万吨（2016年《渔业统计年鉴》）。葡萄牙牡蛎（Crassostreaangulata）属软体动物门（Mollus...
【技术保护点】
一种准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制ACD抗凝剂，调节pH至4.6，高压蒸汽灭菌后在低温中保存；(2)无脊椎动物消毒，重复多次；(3)在无脊椎动物合适部位抽取血淋巴，迅速与ACD抗凝剂混合；(4)用含有5μm孔径滤膜过滤，收集滤液；(5)用含有0.2μm孔径滤膜过滤，将滤膜转移至干净的培养皿中；(6)避光向滤膜滴加荧光染液染色，移除荧光染液后滴加甘油溶液；(7)荧光显微镜观察计数，根据如下公式计算血淋巴微生物的丰度：
【技术特征摘要】
1.一种准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制ACD抗凝剂，调节pH至4.6，高压蒸汽灭菌后在低温中保存；(2)无脊椎动物消毒，重复多次；(3)在无脊椎动物合适部位抽取血淋巴，迅速与ACD抗凝剂混合；(4)用含有5μm孔径滤膜过滤，收集滤液；(5)用含有0.2μm孔径滤膜过滤，将滤膜转移至干净的培养皿中；(6)避光向滤膜滴加荧光染液染色，移除荧光染液后滴加甘油溶液；(7)荧光显微镜观察计数，根据如下公式计算血淋巴微生物的丰度：2.根据权利要求1所述准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法，其特征在于，步骤（1）所述配制ACD抗凝剂配方为，氯化钠450mM，葡萄糖100mM，柠檬酸26mM，柠檬酸钠30mM，调节pH为4.6，在1.05kg/cm2压力下用121oC的蒸汽灭菌20min后在4℃中保存。3.根据权利要求1所述准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法，其特征在于，步骤（3）所述无脊椎动物包括拟穴青蟹，凡纳滨对虾或葡萄牙牡蛎的一种或多种。4.根据权利要求1或3所述准确计数无脊椎动物血淋巴中微生物的丰度的方法，其特征在于，所述无脊椎动物抽取血淋巴的部位如下：拟穴青蟹...
【专利技术属性】
技术研发人员：李升康，张新旭，张明，张旭昇，孙再桥，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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