一种表达重组人神经生长因子的表达载体、体系及方法技术
Expression vector, system and method for expressing recombinant human nerve growth factor
The present invention relates to a eukaryotic expression system and method for preparing human nerve growth factor (rhNGF) protein. The recombinant lentivirus vector and the CHO cells expressing rhNGF are used. After a series of separation and purification steps, the human nerve growth factor protein with high activity and high purity is obtained, which has a market prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种表达重组人神经生长因子的表达载体、体系及方法
本专利技术涉及一种表达人神经生长因子(rhNGF)蛋白的真核细胞表达体系；本专利技术还涉及重组人神经生长因子的制备方法。
技术介绍
神经生长因子(NGF)是神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，是神经系统最重要的生物活性分子之一，它对中枢的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用，对调节神经元的生长、发育、分化、存活及损伤神经的再生修复具有重要的理论和临床意义。目前的基础研究表明NGF可应用于神经中毒、周围神经损伤、糖尿病性周围神经病变、老年痴呆病、帕金森氏病、面神经炎，以及神经损伤(包括脊髓损伤、高位截瘫、断指再植、脑损伤等中枢及外围神经系统的损伤)等神经系统疾病，是目前唯一可应用于临床的神经系统蛋白质因子。NGF基因转录后生成NGFmRNA，mRNA翻译后首先合成NGF的前体蛋白。前体蛋白有两种，一种是长的前体蛋白，一种是短的前体蛋白。编码短的前体蛋白的mRNA位于单一的外显子内，所以NGF分为两种，即7SNGF和2....
【技术保护点】
一种表达重组人神经生长因子的表达载体，其特征在于所述表达载体包括：如SEQ ID NO.1所述的重组人神经生长因子基因，和慢病毒表达载体‑pLX‑puromycin。
【技术特征摘要】
1.一种表达重组人神经生长因子的表达载体，其特征在于所述表达载体包括：如SEQIDNO.1所述的重组人神经生长因子基因，和慢病毒表达载体-pLX-puromycin。2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体还包括表达N端带有6×His标签目的蛋白的HA-His标签，所述标签用于纯化。3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述表达载体的结构如图3所示。4.一种表达重组人神经生长因子的真核细胞表达体系，其特征在于含有权利要求1所述的表达载体和CHO细胞。5.一种重组人神经生长因子的制备方法，包括：1)将重组人神经生长因子基因可操作地连接于pLX-puromycin慢病毒载体，构建如权利要求1所述的重组表达载体；2)将步骤1)构建的重组表达载体进行病毒包装；3)将步骤2)所述的病毒转染宿主细胞，培养收集病毒颗粒；4)将步骤3)所述病毒颗粒转导CHO细胞，构建表达重组人神经生长因子的真核细胞表达体系；5)培养步骤4)的所述的重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：王妍，黄志立，蒋伟，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44
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