用于纳米粒冷冻干燥物形式的组合物及方法技术

本发明专利技术提供用于制备一种或多种核酸活性剂的固体冷冻干燥物的组合物，其可以复原成药品。所述组合物可以包括：脂质纳米粒在药学上可接受的溶液中的含水悬浮液，其中所述脂质纳米粒封装一种或多种核酸活性剂；糊精化合物；和糖类化合物。所述核酸活性剂可为能够介导RNA干扰的RNAi分子以及其它RNA和寡核苷酸。

Compositions and methods for nanoparticle lyophilization

The invention provides a solid freeze-drying composition for preparing one or more nucleic acid active agents, which can be recovered into medicine. The composition may include: an aqueous suspension of lipid nanoparticles in a pharmaceutically acceptable solution, in which the lipid nanoparticles encapsulate one or more nucleic acid active agents; a dextrin compound; and a saccharide compound. The nucleic acid active agent can be a RNAi molecule capable of mediating RNA interference, as well as other RNA and oligonucleotides.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于纳米粒冷冻干燥物形式的组合物及方法相关申请本申请要求于2015年7月22日提交的标题为用于纳米粒冷冻干燥物形式的组合物及方法的美国临时专利申请62/195,356的优先权，将其内容整体援引加入本文。
本专利技术涉及由基于核酸的分子组成的生物药物及治疗剂的领域。更特别地，本专利技术涉及用于核酸治疗组合物的冷冻干燥物形式(lyophileforms)的方法及组合物。专利技术背景基于核酸化合物的治疗剂包括各种RNA形式，如siRNA、反义RNA或微RNA，以及各种形式的DNA及质粒、杂合寡核苷酸及适配体等。核酸治疗剂及其它剂的转染是通过将活性分子封装于脂质纳米粒中而完成的。由于纳米粒或其封装的内容物的降解，此方法的缺点包括不能储存组合物以供后续使用。例如，封装siRNA分子的脂质纳米粒组合物在25℃下可能仅能保持稳定几分钟或几小时，且在4℃下可能仅能保持稳定几天或几周。进一步的缺点包括需要在非常低的温度下储存该脂质纳米粒组合物。一种提供治疗组合物长期储存的方法为制备成冷冻干燥物形式，其可被储存并被复原以提供用于给药治疗剂的制剂。然而，通常不可能产生含有核酸剂的脂质纳米粒的冷冻干燥物形式，使得该脂质纳米粒可以与封装的核酸剂再生以形成稳定的制剂。冷冻干燥过程可破坏该纳米粒和/或核酸剂。一些方法涉及将保护基团或组分化学连接于脂质纳米粒或核酸剂，这是不利的。其它方法可能使用脂质体作为辅剂，不提供核酸剂的封装。持续需要提供能够复原具有良好性质的纳米粒的冷冻干燥物形式的组合物及方法，这些性质包括转染活性、颗粒尺寸、储存时间和递送各种核酸剂的血清稳定性。需要用于形成能以固体冷冻干燥物形式储存的脂质纳米粒的稳定溶液或悬浮液的组合物和化合物，其中该纳米粒封装核酸剂。专利技术概述本专利技术提供用于由基于核酸的分子组成的治疗剂的方法及组合物。更特别地，本专利技术提供用于基于核酸的治疗组合物的冷冻干燥物形式的方法及组合物。本专利技术还提供可复原成有效的治疗组合物的纳米粒的冷冻干燥物形式，其可用于递送用于转染的治疗核酸剂。在一些方面，本专利技术提供用于形成在冷冻干燥过程中稳定的治疗脂质纳米粒的溶液或悬浮液的组合物及化合物。该治疗脂质纳米粒可封装核酸剂，且能以固体冷冻干燥物形式转换和储存。该冷冻干燥物形式可被复原以提供具有封装的核酸剂的治疗脂质纳米粒。该复原的脂质纳米粒具有惊人有利的转染性质，包括颗粒尺寸和分布。本专利技术的实施方案包括一系列用于形成治疗脂质纳米粒的溶液或悬浮液的组合物及化合物，该治疗脂质纳米粒可经冷冻干燥过程以提供稳定的固体冷冻干燥物形式而用于长期储存核酸治疗剂。本专利技术的实施方案包括以下：用于制备包含一种或多种核酸活性剂的脂质纳米粒的固体冷冻干燥物的组合物，所述组合物包含：所述脂质纳米粒在药学上可接受的溶液中的含水悬浮液，其中所述脂质纳米粒封装所述一种或多种核酸活性剂；糊精化合物；和糖类糖(saccharidesugar)化合物。如上所述的组合物，其中所述糊精化合物和糖化合物的总量为所述组合物的2％至20％(w/v)。如上所述的组合物，其中所述糊精化合物为所述糊精化合物和糖化合物的总量的40％至70％(w/v)。如上所述的组合物，其中所述糊精化合物为所述糊精化合物和糖化合物的总量的40％至55％(w/v)。如上所述的组合物，其中所述糊精化合物为所述糊精化合物和糖化合物的总量的40％至45％(w/v)。如上所述的组合物，其中所述组合物经冷冻干燥和复原，所述纳米粒的平均尺寸在其于初始组合物中的尺寸的10％以内。如上所述的组合物，其中所述组合物经冷冻干燥、储存和复原，所述纳米粒的平均尺寸在其于初始组合物中的尺寸的10％以内。如上所述的组合物，其中所述冷冻干燥的组合物在5℃下储存至少一个月。如上所述的组合物，其中所述冷冻干燥的组合物在-20℃下储存至少一个月。如上所述的组合物，其中所述纳米粒具有45nm至110nm的平均直径。如上所述的组合物，其中所述核酸活性剂的浓度为1mg/mL至10mg/mL，或为3mg/mL至5mg/mL。如上所述的组合物，其中所述一种或多种核酸活性剂为能够介导RNA干扰的RNAi分子。如上所述的组合物，其中所述RNAi分子为siRNA、shRNA、ddRNA、piRNA或rasiRNA。如上所述的组合物，其中所述一种或多种核酸活性剂为miRNA、反义RNA、质粒、杂合寡核苷酸或适配体。如上所述的组合物，其中所述药学上可接受的溶液为HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或含有三(羟甲基)氨基甲烷的缓冲液。如上所述的组合物，其中所述糊精化合物为环糊精。如上所述的组合物，其中所述环糊精化合物的2、3和6羟基位置中的一个或多个被以下基团取代：磺烷基、苯磺烷基、乙酰烷基、羟烷基、琥珀酸羟烷酯基、丙二酸羟烷酯基、戊二酸羟烷酯基、己二酸羟烷酯基、羟烷基、马来酸羟烷酯基、草酸羟烷酯基、富马酸羟烷酯基、柠檬酸羟烷酯基、酒石酸羟烷酯基、苹果酸羟烷酯基或柠康酸羟烷酯基。如上所述的组合物，其中所述环糊精化合物为(2-羟丙基)-β-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精琥珀酸酯、(2-羟丙基)-γ-环糊精或2-羟丙基-γ-环糊精琥珀酸酯。如上所述的组合物，其中所述环糊精化合物为磺丁基醚β-环糊精或磺丁基醚γ-环糊精。如上所述的组合物，其中所述环糊精化合物为甲基-β-环糊精或甲基-γ-环糊精。如上所述的组合物，其中所述环糊精化合物连接至聚合物链或网状结构。如上所述的组合物，其中所述环糊精化合物包括被吸附化合物。如上所述的组合物，其中所述被吸附化合物选自：胆固醇、羊毛甾醇、酵母固醇、二氢酵母固醇(zymostenol)、链甾醇、豆甾烷醇、二氢羊毛甾醇、7-脱氢胆固醇、聚乙二醇化胆固醇、胆固醇乙酸酯、胆固醇花生四烯酸酯、胆固醇丁酸酯、胆固醇己酸酯、胆固醇肉豆蔻酸酯、胆固醇棕榈酸酯、胆固醇山嵛酸酯、胆固醇硬脂酸酯、胆固醇辛酸酯、胆固醇正癸酸酯、胆固醇十二烷酸酯、胆固醇神经酸酯、胆固醇壬酸酯、胆固醇正戊酸酯、胆固醇油酸酯、胆固醇反油酸酯、胆固醇芥酸酯、胆固醇庚酸酯、胆固醇反亚油酸酯、胆固醇亚油酸酯、β-谷甾醇、菜油甾醇、麦角固醇、菜籽固醇、δ-7-豆固醇和δ-7-燕麦甾醇。如上所述的组合物，其中所述糖类糖化合物为单糖或二糖糖化合物。如上所述的组合物，其中所述糖化合物选自：蔗糖、乳糖、乳果糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、曲二糖、糖化曲二糖、异麦芽糖、槐糖、昆布二糖、龙胆二糖、松二糖、麦芽酮糖、异麦芽酮糖、龙胆二酮糖、甘露二糖、蜜二糖、车前二糖和木二糖。用于制备一种或多种核酸活性剂的固体冷冻干燥物的方法，所述方法包括将如上所述的组合物进行冷冻干燥。本专利技术还涵盖通过上述方法制备的固体冷冻干燥物，以及通过复原上述固体冷冻干燥物而制备的药品。本专利技术还包括用于制备核酸药品的方法，所述方法包括：合成脂质纳米粒，其中所述脂质纳米粒封装一种或多种核酸活性剂；提供所述脂质纳米粒在药学上可接受的溶液中的含水悬浮液；向所述含有所述脂质纳米粒的溶液加入糊精化合物；向所述含有所述脂质纳米粒的溶液加入糖类糖化合物；冷冻干燥所述含有所述脂质纳米粒的溶液，从而形成固体冷冻干燥物；在药学上可接受的载体中复原所述冷冻干燥物，从而形成核酸药品。如上所述的方法，其中所述糊精化合物和糖类糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制备包含一种或多种核酸活性剂的脂质纳米粒的固体冷冻干燥物的组合物，所述组合物包含：所述脂质纳米粒在药学上可接受的溶液中的含水悬浮液，其中所述脂质纳米粒封装所述一种或多种核酸活性剂；糊精化合物；和糖类糖化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.22 US 62/195,3561.用于制备包含一种或多种核酸活性剂的脂质纳米粒的固体冷冻干燥物的组合物，所述组合物包含：所述脂质纳米粒在药学上可接受的溶液中的含水悬浮液，其中所述脂质纳米粒封装所述一种或多种核酸活性剂；糊精化合物；和糖类糖化合物。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述糊精化合物和糖化合物的总量为所述组合物的2％至20％(w/v)。3.如权利要求1所述的组合物，其中所述糊精化合物为所述糊精化合物和糖化合物的总量的40％至70％(w/v)。4.如权利要求1所述的组合物，其中所述糊精化合物为所述糊精化合物和糖化合物的总量的40％至55％(w/v)。5.如权利要求1所述的组合物，其中所述糊精化合物为所述糊精化合物和糖化合物的总量的40％至45％(w/v)。6.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物经冷冻干燥和复原，所述纳米粒的平均尺寸在其于初始组合物中的尺寸的10％以内。7.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物经冷冻干燥、储存和复原，所述纳米粒的平均尺寸在其于初始组合物中的尺寸的10％以内。8.如权利要求7所述的组合物，其中所述冷冻干燥的组合物在5℃下储存至少一个月。9.如权利要求7所述的组合物，其中所述冷冻干燥的组合物在-20℃下储存至少一个月。10.如权利要求1所述的组合物，其中所述纳米粒具有45nm至110nm的平均直径。11.如权利要求1所述的组合物，其中所述核酸活性剂的浓度为1mg/mL至10mg/mL。12.如权利要求1所述的组合物，其中所述脂质纳米粒包含选自化合物A6、化合物A9、化合物AA、化合物AB、化合物C2、化合物F5、化合物F7和化合物C24的化合物。13.如权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种核酸活性剂为能够介导RNA干扰的RNAi分子。14.如权利要求13所述的组合物，其中所述RNAi分子为siRNA、shRNA、ddRNA、piRNA或rasiRNA。15.如权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种核酸活性剂为miRNA、反义RNA、质粒、杂合寡核苷酸或适配体。16.如权利要求1所述的组合物，其中所述药学上可接受的溶液为HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液或含有三(羟甲基)氨基甲烷的缓冲液。17.如权利要求1所述的组合物，其中所述糊精化合物为环糊精。18.如权利要求17所述的组合物，其中所述环糊精化合物的2、3和6羟基位置中的一个或多个被以下基团取代：磺烷基、苯磺烷基、乙酰烷基、羟烷基、琥珀酸羟烷酯基、丙二酸羟烷酯基、戊二酸羟烷酯基、己二酸羟烷酯基、羟烷基、马来酸羟烷酯基、草酸羟烷酯基、富马酸羟烷酯基、柠檬酸羟烷酯基、酒石酸羟烷酯基、苹果酸羟烷酯基或柠康酸羟烷酯基。19.如权利要求17所述的组合物，其中所述环糊精化合物为(2-羟丙基)-β-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精琥珀酸酯、(2-羟丙基)-γ-环糊精或2-羟丙基-γ-环糊精琥珀酸酯。20.如权利要求17所述的组合物，其中所述环糊精化合物为磺丁基醚β-环糊精或磺丁基醚γ-环糊精。21.如权利要求17所述的组合物，其中所述环糊精化合物为甲基-β-环糊精或甲基-γ-环糊精。22.如权利要求17所述的组合物，其中所述环糊精化合物连接至聚合物链或网状结构。23.如权利要求17所述的组合物，其中所述环糊精化合物包括被吸附化合物。24.如权利要求23所述的组合物，其中所述被吸附化合物选自：胆固醇、羊毛甾醇、酵母固醇、二氢酵母固醇、链甾醇、豆甾烷醇、二氢羊毛甾醇、7-脱氢胆固醇、聚乙二醇化胆固醇、胆固醇乙酸酯、胆固醇花生四烯酸酯、胆固醇丁酸酯、胆固醇己酸酯、胆固醇肉豆蔻酸酯、胆固醇棕榈酸酯、胆固醇山嵛酸酯、胆固醇硬脂酸酯、胆固醇辛酸酯、胆固醇正癸酸酯、胆固醇十二烷酸酯、胆固醇神经酸酯、胆固醇壬酸酯、胆固醇正戊酸酯、胆固醇油酸酯、胆固醇反油酸酯、胆固醇芥酸酯、胆固醇庚酸酯、胆固醇反亚油酸酯、胆固醇亚油酸酯、β-谷甾醇、菜油甾醇、麦角固醇、菜籽固醇、δ-7-豆固醇和δ-7-燕麦甾醇。25.如权利要求1所述的组合物，其中所述糖类糖化合物为单糖或二糖糖化合物。26.如权利要求25所述的组合物，其中所述糖化合物选自：...

【专利技术属性】
技术研发人员：应文斌，R·阿达米，王宇伟，尹海清，王莉萍，刘东，
申请(专利权)人：日东电工株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP