一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体及其制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了Zaire型埃博拉病毒检测抗体及其制备方法及应用。所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体，其特征在于，为人源单克隆抗体；其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID No.3、DDS，和SEQ ID No.5，重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID No.6、SEQ ID No.7，和SEQ ID No.8。本发明专利技术所述抗体能够很好的检测Zaire型埃博拉病毒囊膜蛋白GP，具有重要的经济和社会意义。

Zaire type Ebola virus detection antibody and preparation method and application thereof

The invention provides Zaire type Ebola virus detection antibody, a preparation method and application thereof. The Zaire type Ebola virus detection antibody is characterized by a human monoclonal antibody, and the amino acid sequences of CDR1, CDR2 and CDR3 of the light chain hypervariable regions are SEQ ID No.3, DDS, and SEQ ID No.5 No.5. No.8. The antibody described in the invention can detect the Zaire envelope protein GP of Ebola virus well, and has important economic and social significance.

【技术实现步骤摘要】
一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体及其制备方法及应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体、其制备方法及应用。
技术介绍
埃博拉病毒(Ebolavirus)1976年分别在苏丹和刚果民主共和国发现。目前，已经发5种亚型：扎伊尔型(Zaire)，苏丹型(Sudan)，本迪布焦型(Bundibugyo)，科特迪瓦型(Coted’Ivoire)，以及莱斯顿型(Reston)，其中前4个亚型对人类具有致病性。最近一次埃博拉病毒感染事件暴发始于2014年2月，死亡率可高达90％，致死原因主要为中风、心肌梗塞、低血容量性休克或器官衰竭。埃博拉病毒在自然界的起源及宿主尚未确定，有证据表明该病毒是动物源性病毒，蝙蝠可能是其潜在的自然宿主。埃博拉病毒具有很强的传染性，感染病人的血液、精液、汗液，唾液及分泌物均具有感染性，可通过皮肤、结膜或呼吸道等途径感染密切接触者。埃博拉病毒感染细胞由囊膜蛋白GP介导，GP经过furin或furin-like蛋白酶加工，形成GP1和GP2两个亚单位，GP1和GP2由一对二硫键连接形成异源二聚体，形成成熟的三聚体形式。GP1亚基负责将病毒锚定于靶细胞，GP2亚基负责病毒包膜与细胞膜的融合，进而将病毒基因组释放进入宿主细胞，此过程需要内源性半胱氨酸蛋白酶参与完成。GP在埃博拉病毒的致病性方面发挥重要作用，可选择性地降低细胞表面与细胞粘附和免疫功能相关的大分子的表达，从而导致细胞的脱落死亡。此外，sGP通过CD16b结合至中性粒细胞，与宿主免疫系统相互作用，改变FcγRIIIB和CR3之间物理性和功能性的相互作用，进而抑制早期中性粒细胞对病毒的清除，从而引起免疫逃逸。目前，市场上仅有台北Abnova和北京义翘神州两家公司生产、销售相关鼠源及兔源单(多)抗。常用的抗体筛选方法有噬菌体展示抗体文库筛选、单个B细胞测序技术、B细胞永生化和人源化小鼠杂交瘤细胞筛选等等，我们利用噬菌体展示抗体文库筛选方法获得了一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体。本专利技术利用正常人的PBMC所构建的噬菌体展示抗体文库，采用亲和筛选的方式获得具有亲和力的单克隆抗体基因序列，简化了抗体的筛选流程，也为抗体药物的研发提供了一个捷径。
技术实现思路
针对现有市场供应量的不足及实际需求，本专利技术的目的是提供Zaire型埃博拉病毒检测抗体、其制备方法及应用。本专利技术提供的Zaire型埃博拉病毒检测抗体，为埃博拉病毒感染诊断以及埃博拉病毒抗原GP的检测提供了新的选择，具有重要的经济和社会意义。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体，其特征在于，为人源单克隆抗体；其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.3或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、DDS(E-1C1CDR-L2，AspAspSer)或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，和SEQIDNo.5或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.6或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、SEQIDNo.7或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，和SEQIDNo.8或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。优选地，所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.1或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.2或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。优选地，所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体的轻链框架区FR1、FR2和FR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.9或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、SEQIDNo.10或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、和SEQIDNo.11或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；重链框架区FR1、FR2和FR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.12或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、SEQIDNo.13或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、和SEQIDNo.14或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。优选地，所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体的编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列分别为SEQIDNo.15或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列、和SEQIDNo.16或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列。本专利技术还提供了一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体包含SEQIDNo.15或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列、以及SEQIDNo.16或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列中的至少一个。本专利技术还提供了一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含上述表达载体。本专利技术还提供了上述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将SEQIDNo.15-SEQIDNo.20及上述序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列中的至少一个与表达载体连接，扩增，转染293T细胞，收取293T细胞上清，挂proA柱，洗脱，得到Zaire型埃博拉病毒检测抗体。优选地，所述的表达载体为哺乳动物表达载体。更优选地，所述的哺乳动物表达载体为pFuse-Fc和pCAGGS哺乳动物表达载体。本专利技术还提供了上述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体在制备对埃博拉病毒GP抗原具有亲和力、对埃博拉病毒的检测中的应用。在本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体，所述抗体为人源单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，抗体的轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNo.3、DDS(E-1C1CDR-L2，AspAspSer)、SEQIDNo.5所示；其重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNo.6、SEQIDNo.7、SEQIDNo.8所示。所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。序列可以包含某些生物学功能等同的氨基酸或“保守性替代”，其它序列可以包含功能非等同的氨基酸或“非保守性替代”，其经基因工程改造以改进CDR或含CDR抗体的特性。前面所述的氨基酸序列如下：SEQIDNo.1(E-1C1L)：YVLTQPPSVSV本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体，其特征在于，为人源单克隆抗体；其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID No.3或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、DDS或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，和SEQ ID No.5或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID No.6或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、SEQ ID No.7或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，和SEQ ID No.8或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种Zaire型埃博拉病毒检测抗体，其特征在于，为人源单克隆抗体；其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.3或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、DDS或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，和SEQIDNo.5或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.6或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、SEQIDNo.7或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，和SEQIDNo.8或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体，其特征在于，所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.1或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.2或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体，其特征在于，所述的Zaire型埃博拉病毒检测抗体的轻链框架区FR1、FR2和FR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.9或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、SEQIDNo.10或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列、和SEQIDNo.11或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；重链框架区FR1、FR2和FR3的氨基酸序列分别为SEQIDNo.12或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨光，高福，黄超宾，校海霞，曲志虎，路希山，郭天玲，庞雪飞，
申请(专利权)人：上海科技大学，中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31