本发明专利技术描述了表达利什曼原虫A2抗原的重组病毒载体和可用作抵抗利什曼病的疫苗的疫苗组合物的用途。本发明专利技术公开了为了抵抗利什曼病对哺乳动物进行疫苗接种的目的，使用腺病毒和痘病毒载体进行初免‑加强疫苗接种的方法。该方法允许通过使用针对利什曼原虫的前鞭毛体形式的抗原通过基于ELISA或免疫荧光技术的常规检验进行测试而对经疫苗接种的个体被感染的个体进行血清学区分。
Recombinant viral vectors and vaccine compositions for leishmaniasis
The present invention describes a recombinant viral vector expressing Leishmania A2 antigen and the use of vaccine compositions that can be used as vaccines against leishmaniasis. The invention discloses the aim of vaccinating mammals against leishmaniasis, using adenovirus and poxvirus carrier to strengthen the vaccine inoculation. The method allows a serological distinction between individuals infected with vaccinated individuals through the use of an antigen in the form of a anterior flagellum for Leishmania by a routine test based on ELISA or immunofluorescence.
【技术实现步骤摘要】
用于利什曼病的重组病毒载体和疫苗组合物本申请是申请日为2009年1月16日、专利技术名称为“用于利什曼病的重组病毒载体和疫苗组合物”的专利技术专利申请No.200980105562.X的分案申请。本专利技术涉及表达利什曼原虫(Leishmania)A2抗原的重组病毒载体的构建。此外，本专利技术涉及用作抵抗利什曼病的疫苗的疫苗组合物。本专利技术还描述了一种初免-加强(prime-boost)疫苗接种的方法，其使用重组腺病毒和痘病毒来免疫哺乳动物以抵抗利什曼病。该方法还允许通过ELISA或间接免疫荧光诊断方法通过使用获自利什曼原虫的前鞭毛体形式的抗原对经疫苗接种的个体和被感染的个体进行血清学区分。术语利什曼病是指一组寄生虫疾病，其临床表现为例如皮肤或皮肤粘膜的损伤或内脏病症，其为多种属于利什曼原虫属的原生动物寄生虫种的感染所致(WorldHealthOrganization.Programforthesurveillanceandcontrolofleishmaniasis.http://who.int/emc/diseases/leish/index.html.2005)。作为一组疾病，利什曼病是88个国家的地区性疾病。在这些国家中，有72个是欠发达国家，在这一组中还包括13个具有最低的世界发展速度的国家(SUNDAR,S.&RAI,M.Clin.Diagn.Lab.Immunol.,9:2002)。皮肤性利什曼病中涉及的主要致病物种是硕大利什曼原虫(L(Leishmania.)major)、热带利什曼原虫(L.(L.)tropica)、埃塞俄比亚利什曼原虫(L.(L.)aethiopica)、墨西哥利什曼原虫(L.(L.)mexicana)、亚马逊利什曼原虫(L.(L.)amazonensis)、Viannia亚属巴西利什曼原虫(L.(Viannia)braziliensis)、巴拿马利什曼原虫(L.(V.)panamensis)、秘鲁利什曼原虫(L.(V.)peruviana)和圭亚那利什曼原虫(L.(V.)guyanensis)。与这些物种感染相关的症状是类似的，最初是在昆虫载体(沙蝇)叮咬处出现丘疹。在大约三个月内，损伤发展为溃疡，如新世界地区经常发生的。还可能发生散布的损伤和局部的淋巴结病，例如在巴西利什曼原虫引起的皮肤性利什曼病中。内脏利什曼病(VL)是由杜氏利什曼原虫(L.(L.)donovani)、婴儿利什曼原虫(L.(L.)infantum)和恰氏利什曼原虫(L.(L.)chagasi)(与婴儿利什曼原虫是同义词)引起的，如果不及时诊断并治疗的话，会成为致命的感染(MURRAY,H.W.等人.Lancet,366:1561-1577,2005)。亚马逊利什曼原虫最终可引起内脏利什曼病(WILSON,M.E.等人.Microb.Pathog.,38:147-160,2005)。被感染的狗，即使是无症状的，也会在皮肤下显示出大量的寄生虫，这会促进沙蝇载体的感染并作为可能保持向人类传播的贮存库(TESH,R.Am.J.Trop.Med.Hyg.52:287-292,1995)。有两种药物优先被用于治疗利什曼病：五价锑(首选药物)和两性霉素B，其用于妊娠和50岁以上的老年患者。有两种含锑药物可用于治疗：N-甲基葡糖胺锑和葡萄糖酸锑钠。治疗由20-30天缓慢给予(优选静脉内给予)20mg锑/Kg患者/天的剂量组成。给药后需要休息。副作用有关节痛、肌肉疼痛、厌食、恶心、呕吐，在更严重的情况下有肾脏和心脏的并发症，这需要治疗中断(MinistériodaSaúde.GuiadeEpidemiológica.2005,Brasil)。两性霉素B治疗需要患者住院，因为可能发生严重的变化。推荐的剂量是0.5mg两性霉素B/Kg患者/天，持续14天，通过缓慢静脉内注射，与葡萄糖血清一起输注4-6小时。虽然两性霉素B具有极好的杀利什曼原虫活性，但是其对于血管内皮细胞具有高度毒性，经常导致各种副作用，例如发烧、厌食、恶心、呕吐、静脉炎、低钾血、肾功能不全、贫血、白血球减少症、和心脏变化。新的两性霉素B制剂减少了副作用，但是其高成本仍然阻碍了在发展中国家的常规医疗救助中的使用(MinistériodaSaúdeFUNASA.ManualdeControledaLeishmanioseTegumentarAmericana.2000)。犬内脏利什曼病(CVL)的治疗，无论使用何种药物，均不是足够的或有效的疾病控制措施，因为其非常昂贵，而且即使是临床治愈的狗，除了抗性寄生虫株的选择的可能性增加之外，还仍然是载体感染和寄生虫传播的贮存库(GRAMICCIA,M.&GRADONI,L.Int.J.Parasitol.35:1169-1180,2005)。这个事实，以及在无治疗的情况下人类VL的致命性，使得国际卫生组织(WHO)推荐消灭对于利什曼原虫抗原呈现血清反应阳性的狗，以此作为控制措施，这是由巴西卫生部采纳的做法。因此，最常用的控制VL的一种做法是杀死那些通过血清学检验或根据CVL的临床症状的存在而被检测为血清反应阳性的狗。但是，除了其它困难，例如诊断和处死之间的延迟之外，该程序引起宠物主人的严重悲伤和愤怒，有时候他们宁愿不对他们的动物进行诊断，直至动物死去，从而这些动物同时成为寄生虫的重要的贮存库(TESH,R.Am.J.Trop.Med.Hyg.52:287-292,1995)。在这种情况下，疫苗将是改善疾病控制效率的替代性工具。集中于疫苗开发的多数研究都是基于鉴定寄生虫分子或能够诱导Th1细胞免疫反应的免疫方案，Th1细胞免疫反应对于诱导抵抗利什曼病的保护是必不可少的。在小鼠中，抵抗内脏利什曼病种类例如杜氏利什曼原虫抗性的获得依赖于Th1反应的诱导。该抗性由激活巨噬细胞和T细胞的细胞因子，例如白细胞介素12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)介导。这些细胞因子启动并诱导Th1细胞免疫反应，引起组织肉芽肿的产生，其中包容有细胞内寄生虫并被IFN-γ激活的单核的吞噬细胞消灭(MURRAYH.W.等人.InfectionandImmunity.70:6284-6293,2002)。在抗性小鼠中，寄生虫仍然被禁锢在感染位点及周围淋巴结中。响应于无鞭毛体和内源激动剂例如CD40L和IFN-γ的积累，树突状细胞被激活，增加了CD40和其它共刺激分子的表达并产生IL-12。在该环境下T细胞的激活引起Th1细胞表型，其特征在于效应CD4+T细胞的产生，效应CD4+T细胞产生高水平的IFN-γ和肿瘤坏死因子(TNF)。这些细胞因子促成一氧化氮(NO)合成酶基因(iNOS)的激活，其引起巨噬细胞杀微生物活性的增加。CD8+T细胞也通过产生IFN-γ并通过表现细胞毒活性(可能是通过Fas-Fas配体(FasL)机制)而参与感染的控制。在损害消除之后，少量的无鞭毛体仍然留在感染位点，这可能是由于分泌IL-10的调节性T细胞的存在所致(SACKSD.&NOBEN-TRAUTHN.Nat.RevImmunol.2:845-858,2002)。调节反应似乎是极其重要的，因为它们能够加剧炎性反应并加重损害(MURRAY本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含SEQ ID NO:01的重组病毒载体。
【技术特征摘要】
2008.01.17 BR PI0800485.41.包含SEQIDNO:01的重组病毒载体。2.权利要求1的重组病毒载体，其包含编码来自利什曼原虫的A2抗原的核苷酸序列，该序列是天然形式或修饰形式。3.权利要求1的重组病毒载体，其中病毒是腺病毒和/或痘苗病毒。4.用于治疗或预防利什曼病的疫苗组合物，其由含有有效诱导抵抗利什曼病之保护性免疫反应的量的权利要求1－3中任一项所述重组病毒载体的医学制备物组成。5.权利要求4的用于治疗或预防利什曼病的疫苗组合物，其与其它治疗性组合物、抗原性或免疫原性疫苗共同施用或依次施用。6....
【专利技术属性】
技术研发人员：R·托斯特斯伽兹尼利，O·B·罗梅罗，F·圭马拉斯达方瑟卡，M·S·杜特拉，
申请(专利权)人：米纳斯吉拉斯联合大学，
类型：发明
国别省市：巴西,BR
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