肾素(原)受体(P)RR基因及其抑制剂的应用制造技术

本发明专利技术公开肾素(原)受体[(pro)renin receptor,(P)RR]抑制剂在非酒精性脂肪肝和肥胖疾病中的功能和应用。以C57小鼠背景下的，(P)RR受体肝脏特异性敲除/敲降小鼠为实验对象，通过高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型，结果表明肝脏(P)RR受体敲除小鼠体型明显较瘦，且体内脂肪组织显著减少，而且在给予高脂饮食后，该种小鼠的体重增加幅度不大，不发生肥胖，血糖不高，油红染色及肝脏脂质测定等结果均说明肝脏肾素(原)受体敲除小鼠肝功能显著优于对照肥胖小鼠，小鼠脂肪肝病变明显改善，脂质蓄积显著减少，血糖降低。因此，(P)RR可作为筛选治疗II型糖尿病、非酒精性脂肪肝和肥胖的药物靶标，其抑制剂可用于制备治疗II型糖尿病、非酒精性脂肪肝和肥胖的药物。

Application of renin (P) RR gene and its inhibitors

The present invention discloses the function and application of renin (original) receptor [(pro) renin receptor receptor (P) RR] inhibitor in non-alcoholic fatty liver disease and obesity. In the background of C57 mice, (P) RR receptor liver specific knockout / knockdown mice, the obese mice model induced by high fat diet showed that the liver (P) RR receptor knockout mice were significantly thinner, and the body fat tissue decreased significantly, and the weight of the mice increased after the high fat diet was given. The results showed that the liver function of the liver renin receptor knockout mice was significantly better than that of the control obese mice, the liver disease of the mice was significantly improved, the lipid accumulation was significantly reduced, and the blood sugar decreased. Therefore, (P) RR can be used as a drug target for screening type II diabetes, nonalcoholic fatty liver and obesity, and its inhibitors can be used in the preparation of drugs for the treatment of type II diabetes, non-alcoholic fatty liver and obesity.

【技术实现步骤摘要】
肾素(原)受体(P)RR基因及其抑制剂的应用
本专利技术属于基因的功能与应用领域，特别涉及一种肾素(原)受体(P)RR基因及其抑制剂作为靶基因在制备预防、缓解和/或治疗II型糖尿病、非酒精性脂肪肝和肥胖病的药物中应用。
技术介绍
随着我国居民饮食结构的西化以及多坐少动生活方式的流行，使得包括肥胖和糖尿病在内的代谢综合症的患者大幅增加。据最新的流行病学调查统计，我国2型糖尿病的发病率高达11.6％，超重和肥胖患病率高达23％,各种脂代谢紊乱疾病发病率高达12％。这类代谢综合征的多发，也直接导致我国非酒精性脂肪肝(NAFLD)的发病率大幅增加。这表明非酒精性脂肪肝和肥胖症不仅是世界范围内的健康杀手，也已经成为影响我国居民健康的重要疾病。肥胖症，是一种多因素引起的慢性代谢性疾病，以体内脂肪细胞的体积和细胞数增加致体脂占体重的百分比异常增高并在某些局部过多沉积脂肪为特点。已有研究表明超重和肥胖是心血管疾病、糖尿病、某些癌症及炎症代谢类疾病的重要危险因素。非酒精性脂肪肝是一种以肝细胞弥漫性脂肪变性为主的疾病，它与多种因素有关如肥胖、胰岛素抵抗等，主要包括单纯非酒精性脂肪肝(non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)及其进展的非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis，NASH)。NASH表现为肝脏炎症及细胞气球样变；随着NASH的进展，肝脏纤维化可能继续加重，并最终进展为肝硬化并出现相关并发症，如门静脉高压和肝癌等。肥胖、高血压、高脂血症和2型糖尿病在内的一系列代谢异常疾病，都是引起NAFLD和NASH的主要原因，其中，肥胖是非酒精性脂肪肝最常见的危险因素。减肥是肥胖症和非酒精性脂肪肝的主治疗方式，患者通过改变生活方式，平衡膳食和适当的体育锻炼还有药物和手术治疗。对于改变生活方式和饮食锻炼治疗而言，患者从医性差，使治疗大都以失败告终。同时，不得不面对的事实是：至今为止，仍然没有治疗肥胖和脂肪肝的特异性药物。只有少数药物处于临床试验阶段。另有些将药物研究的靶点放在不同的通路以治疗肥胖和脂肪肝，比如代谢因子，炎症，氧化应激和肝脏纤维化。目前药物治疗的主要缺点是，易产生较多副作用，且治疗效果不显著。例如治疗肥胖的Beloranlb等药物出现血栓栓塞死亡事件，维他命E药物治疗脂肪肝因缺少标准化可能造成患者死亡。手术治疗缺点是患者恢复慢，易反弹，且手术风险较大。肾素(原)[(pro)reninreceptor,(P)RR]受体是由ATP6AP2基因编码，一种由350个氨基酸组成的跨膜蛋白。由于最初被发现N端结构的(P)RR受体可结合肾素和前肾素而得名。目前已有研究发现(P)RR具有多重身份：ATP酶、质子泵载体、溶酶体辅助蛋白2、内质网I型跨膜接头前体，在心血管疾病，肾脏疾病，细胞增殖分化、炎症及代谢性疾病中扮演着重要作用。同时，(P)RR在糖尿病和动脉粥样硬化等多种糖脂代谢异常疾病中有重要作用,前期研究中我们发现(P)RR可调节脂代谢相关蛋白，但关于(P)RR对脂肪生成及其在肥胖和脂肪肝中的作用仍不清楚,因此，研究(P)RR，解决(P)RR基因表达与肥胖、非酒精性脂肪肝之间的具体作用关系，提供一种治疗肥胖、脂肪肝的治疗方案成为可能。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术在对(P)RR基因的表达与肥胖、脂肪肝之间的相互作用关系进行研究的基础上，提供一类可用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的靶基因抑制剂和用于治疗肥胖、脂肪肝的治疗方案。本专利技术以C57小鼠实验对象，采取敲除和敲降两种实验方法。其中，敲除方法中对照组为C57小鼠，实验组为由Alb-cre+/+小鼠和(P)RRFlox/WT小鼠杂交并经基因型鉴定得到的肝脏特异性敲除(P)RRC57小鼠。敲降方法中对照组为尾静脉注射PBS和乱序序列的普通C57小鼠，实验组为尾静脉注射肝脏特异性的(P)RR反义寡核苷酸药物的普通C57小鼠。通过高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型，研究肝脏(P)RR基因的功能。结果发现与对照组相比，实验组肝脏特异性敲除或敲降(P)RR小鼠耗氧量增加，体重明显减轻，体内脂肪含量减少。进一步观察肝脏变化，发现肝脏质量减轻，脂质含量减少。并且实验组肝脏特异性敲除或敲降(P)RR小鼠空腹血糖降低，通过糖耐量实验检测，实验组肝脏特异性敲除或敲降(P)RR小鼠对葡萄糖耐受能力明显改善。这表明肝脏特异性敲除或敲降(P)RR基因会减缓小鼠肥胖，非酒精性脂肪肝及II型糖尿病的发生。根据本专利技术的一个方面，提供(P)RR基因作为药物靶标在筛选用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。根据本专利技术的另一个方面，提供(P)RR基因在制备用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。根据本专利技术的另一个方面，提供能够降低(P)RR基因表达的试剂在制备用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。在一些实施方案中，降低(P)RR基因表达的试剂是特异性结合(P)RR基因的蛋白；特异性干扰(P)RR基因表达或加工的干扰分子；能够表达所述干扰分子的表达载体；或者用于特异性敲除(P)RR基因的试剂。在一些实施方案中，所述特异性干扰(P)RR基因表达或加工的干扰分子是dsRNA分子、siRNA分子、shRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸。根据本专利技术的另一个方面，提供筛选用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物的方法，包括如下步骤：(1)用候选药物处理表达(P)RR基因的细胞；(2)检测细胞中(P)RR基因的表达水平；(3)如果候选药物使细胞中(P)RR基因表达降低，则该候选药物是用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的潜在药物。根据本专利技术的另一个方面，提供用于治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物组合物，其包含降低(P)RR基因表达的试剂。在一些实施方案中，降低(P)RR基因表达的试剂是特异性结合(P)RR基因的蛋白；特异性干扰(P)RR基因表达或加工的干扰分子；能够表达所述干扰分子的表达载体；或者用于特异性敲除(P)RR基因的试剂。在一些实施方案中，所述特异性干扰(P)RR基因表达或加工的干扰分子是dsRNA分子、siRNA分子、shRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸。附图说明：图1是对照组和实验组肝脏特异性敲除(P)RR小鼠的体重和脂肪肌肉含量结果：其中，对照组小鼠为(P)RRWT/YAlb-cre+/0，肝脏特异性敲除的实验组小鼠为(P)RRFlox/YAlb-cre+/0。A为小鼠体重统计结果；B为小鼠对比图；C为小鼠4种脂肪组织采样结果：腹股沟脂肪、性腺脂肪、棕色脂肪和腹膜后脂肪图片，其中1为对照组小鼠组织，2为实验组小鼠组织；D为4种脂肪组织的重量统计结果；E,F分别为体脂仪检测的肥肉和瘦肉组织的重量；H为小鼠耗氧量比较图((*:p<0.05,**:p<0.01)。图2是对照组和实验组肝脏特异性敲除(P)RR小鼠血糖和肝脏相关指标：其中，对照组小鼠为(P)RRWT/YAlb-cre+/0，肝脏特异性敲除的实验组小鼠为(P)RRFlox/YAlb-cre+/0。A为小鼠空腹血糖结果；B为小本文档来自技高网...

【技术保护点】
(P)RR基因作为药物靶标在筛选用于预防、缓解和/或治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.(P)RR基因作为药物靶标在筛选用于预防、缓解和/或治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。2.(P)RR基因在制备用于预防、缓解和/或治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。3.降低(P)RR基因表达的试剂在制备用于预防、缓解和/或治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/或II型糖尿病的药物中的应用。4.权利要求3的应用，其中降低(P)RR基因表达的试剂是特异性结合(P)RR基因的蛋白；特异性干扰(P)RR基因表达或加工的干扰分子；能够表达所述干扰分子的表达载体；或者用于特异性敲除(P)RR基因的试剂。5.权利要求4的应用，其中特异性干扰(P)RR基因表达或加工的干扰分子是dsRNA分子、siRNA分子、shRNA分子、miRNA分子或反义寡核苷酸。6.筛选用于预防、缓解和/或治疗肥胖、非酒精性脂肪肝和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢玺峰，何永成，谭仑波，孙源，任丽伟，王娜，林惠，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44