一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，具体过程如下：将提取浓度为0.015～0.05g/L的盐肤木叶提取物加入到培养后的小球藻中。本发明专利技术利用盐肤木叶促进小球藻快速生长，过程简单，来源广泛，成本低，绿色环保，制备效果好，利用能源林剩余物作原料，开辟了一种林木剩余物利用的新途径；为工业化快速大量培养小球藻提供了新的技术思路。

A method of promoting rapid growth of Chlorella vulgaris using extracts from leaves of sumac

The invention discloses a method of promoting the rapid growth of Chlorella by using the extract of the leaf of the salt skin. The specific process is as follows: the extract of the extract of the leaf of the salt skin of 0.015 ~ 0.05g/L is added into the cultured Chlorella. The invention uses the leaf of the salt skin to promote the rapid growth of Chlorella, the process is simple, the source is wide, the cost is low, the green environment is green, the preparation effect is good. Using the energy forest residue as the raw material, it opens up a new way for the utilization of the forest residue, and provides a new technical idea for the rapid industrialization of the small algae in the industrialization.

【技术实现步骤摘要】
一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法
本专利技术涉及一种促进小球藻快速生长的方法，尤其涉及的是一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法。
技术介绍
小球藻具有光自养生长、繁殖快速稳定、培养体系不占用耕地的特点，其分布广泛、易于培养，可在高效的生物反应器中大量培养，尤其适合工业型规模化生产。目前小球藻已被报道用于生产生物柴油、不饱和脂肪酸、维生素，以及次级代谢物类胡萝卜素、虾青素和氨基酸等。尤其来自小球藻的生物活性物质提取液与普通营养肥料相复配后开发成高附值的生物药肥，是有待开发的巨大资源库，具有潜在的生产实际应用价值。此外小球藻的生物活性提取液含有多种活性氨基酸以及大量次级代谢产物，可以作为动物的有机营养饲料以及鱼类饵料添加物，具有提高动植物的免疫力，用于开发绿色有机营养价值高的农牧渔业产品，具有巨大的开发前景。然而，小球藻传统的培养方式为利用有机碳源作为主要光合作用原料积累代谢物。当采用外源刺激物作为小球藻的光合原料时，可提高其生长速率并且有效地积累大量生物代谢物，从而使其达到超高的藻密度和生物量，高效的生产力将在一定程度上抵消小球藻光合养殖培养需要的有机碳源成本，为后续小球藻的高密度培养及高附加值代谢产物的开发提供研究基础。但是目前小球藻培养周期长，不能大量工业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，利用林源植物叶的粗提物促进小球藻快速生长。本专利技术是通过以下技术方案实现的：具体过程如下：将提取浓度为0.015～0.05g/L的盐肤木叶提取物加入到培养后的小球藻中。所述盐肤木叶提取物的制备方法如下：(1)将盐肤木叶打碎成均匀颗粒，过筛；(2)将盐肤木叶片粉末与提取液按1：5～25的料液比进行热浸提、超声波辅助提取l～4次，在40～80℃的提取温度下对混合物进行1～4h处理，抽滤，离心，收集上清液后合并滤液，对滤液进行减压过滤后除去提取液中混合颗粒物质，对提取液离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。所述步骤(2)中采用不同辅助提取液对盐肤木叶进行混合提取，所述辅助提取液为水，提取温度为40～60℃，进行1～2h的超声波提取1～3次，使用与前一次提取相同条件对前一次提取离心后的残渣进行后一次提取，离心后合并两次上清液完成提取，定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，提取液离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。所述步骤(2)中采用不同辅助提取方法对盐肤木叶进行混合提取，所述辅助提取液为水，提取温度为60～80℃，进行3～4h的热浸提2～4次，定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，将提取液进行离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。所述步骤(2)中采用不同辅助提取液对盐肤木叶进行混合提取，所述辅助提取液为乙醇，提取温度为50～70℃，进行1～3h的热浸提1～2次，定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，提取液离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。所述步骤(2)中采用不同辅助提取液对盐肤木叶进行混合提取，所述辅助提取液为乙醇，提取温度为40～70℃，每2～4h的超声波提取2～4次，定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，提取液离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。所用超声波提取方法可以控制提取时间。多酚的提取率与提取时间有关，提取时间过长会导致提取液中的多酚发生氧化、降解等化学反应，反而使提取率降低。当辅助提取液为乙醇时，乙醇的体积浓度为60％。当乙醇体积分数较低时，混合液中溶解的水溶性蛋白、糖类较多；而当乙醇体积分数较高时，脂溶性物质溶解较多，都会影响混合物中多酚的提取率。小球藻培养条件为：使用经过过滤除菌的BG11培养基在经过高温高压灭菌的三角烧瓶中接种和培养，接种好的小球藻置于人工气候培养箱中培养中，温度为23±1℃，光照强度为2000～6000lx，光暗比为12h：12h，每12～16天接种一次，将小球藻均匀分布以获得足够的光照。盐肤木叶粗提物含有多个酚羟基的天然黄酮类化合物，通过一定的体外氧化模型验证其除了具有抗氧化清除细胞内自由基活性的作用之外，大部分植物来源的黄酮类物质可作为一种天然植物刺激素，影响藻细胞的生化代谢反应过程。黄酮类物质可以作为生物刺激素，促进藻细胞中乙酰胆碱的积累，影响离体叶绿体对氧的吸收，抑制光刺激的叶绿体膨胀；刺激钠离子和钾离子从叶绿体流出，调控叶绿体膜对离子的通透性及电子传递和ATP合成间的偶联。此外还可以参与调控藻细胞中磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱代谢途径，调控细胞膜对离子的通透性，产生第二信使开启钙通道提高胞内Ca2+浓度，影响藻细胞各种生理过程。同时可以激活各类依赖钙离子调控的激酶表达提高，活化与质膜结合的蛋白激酶C，激活磷酸化反应，促进藻细胞细胞增殖和分化等，从而提高小球藻生物量。本专利技术相比现有技术具有以下优点：本专利技术利用盐肤木叶促进小球藻快速生长，过程简单，来源广泛，成本低，绿色环保，制备效果好，利用能源林剩余物作原料，开辟了一种林木剩余物利用的新途径；为工业化快速大量培养小球藻提供了新的技术思路。附图说明图1是小球藻的生长对比柱状图；图2是实施例3处理前后的小球藻生长对比图。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1采集盐肤木叶片后，立即将叶片置于烘箱中，采用120℃进行杀菌处理5～10min，之后在60℃以内烘干叶片，再用粉碎机打碎成均匀的叶片颗粒，过筛至30～100目。将已得盐肤木叶片颗粒保存于棕色密闭容器中干燥收集。称取一定量盐肤木叶粉末置于1L的玻璃容器中，将溶液与盐肤木叶片粉末按1:15g/ml的物料比混合均匀，溶液为水，混匀后加热进行超声波提取，提取温度为80℃，将混合液置入超声破碎仪进行1h的超声波提取2次。使用与第一次提取相同条件对第一次提取离心后的残渣进行第二次提取，离心后合并两次上清液完成第二次提取，对破碎后的混合物定容后再减压过滤，除去提取液中混合颗粒物质，将提取液5000rpm离心20min，再用滤膜过滤除菌，保留上清。取一部分上清冷冻干燥即得盐肤木叶提取物干粉。将本实施例中，加入提取物的处理组记为CVW1。实施例2采集盐肤木叶片后，立即将叶片置于烘箱中，采用120℃进行杀菌处理5～10min，之后在60℃以内烘干叶片，再用粉碎机打碎成均匀的叶片颗粒，过筛至30～100目。将已得盐肤木叶片颗粒保存于棕色密闭容器中干燥收集。称取一定量盐肤木叶粉末置于1L的玻璃容器中，辅助提取液与盐肤木叶片粉末按1:15的比例，辅助提取液为水，提取温度为80℃，进行2h的热浸提1次。定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，最后用5000rpm将提取液进行离心20min操作，再用滤膜过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。取一部分上清冷冻干燥即得盐肤木叶提取物干粉。将本实施例中加入提取物的处理组记为CVW2。实施例3采用提取溶液与盐肤木叶片粉末的料液比为1:15g/ml，辅助提取液为60％的乙醇，在60℃的提取温度下，进行2h的热浸提2次。多酚类物质在乙醇中的溶解度可以随着温度的升高而增大，但是当温度过高时，也会导致多酚发生氧化分解等化学反应。鉴于酚类物质的热稳定性、溶剂挥发及杂质的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，其特征在于，具体过程如下：将提取浓度为0.015～0.05g/L的盐肤木叶提取物加入到培养后的小球藻中。

【技术特征摘要】
1.一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，其特征在于，具体过程如下：将提取浓度为0.015～0.05g/L的盐肤木叶提取物加入到培养后的小球藻中。2.根据权利要求1所述的一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，其特征在于，所述盐肤木叶提取物的制备方法如下：(1)将盐肤木叶打碎成均匀颗粒，过筛；(2)将盐肤木叶片粉末与提取液按1：5～25的料液比进行热浸提、超声波辅助提取l～4次，在40～80℃的提取温度下对混合物进行1～4h处理，抽滤，离心，收集上清液后合并滤液，对滤液进行减压过滤后除去提取液中混合颗粒物质，对提取液离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。3.根据权利要求2所述的一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用不同辅助提取液对盐肤木叶进行混合提取，所述辅助提取液为水，提取温度为40～60℃，进行1～2h的超声波提取1～3次，使用与前一次提取相同条件对前一次提取离心后的残渣进行后一次提取，离心后合并两次上清液完成提取，定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，提取液离心过滤除菌得到盐肤木叶粗提液。4.根据权利要求2所述的一种利用盐肤木叶提取物促进小球藻快速生长的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用不同辅助提取方法对盐肤木叶进行混合提取，所述辅助提取液为水，提取温度为60～80℃，进行3～4h的热浸提2～4次，定容后减压过滤除去提取液中混合颗粒物质，将提取液进...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽芳，马瑜晗，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：安徽,34