The invention discloses a method of isolation of potato rotten stem nematode in plant tissue, adding 5ml 25% (W/V) Pluronic F F aqueous solution into cell culture plate, and placing 30min in a semisolid gel at room temperature; cutting the potato block into 2 4mm thin slices, dipping into Pluronic gel on the edge of the culture plate hole and placing 2H to make the stem nematode From the plant tissue, the Pluronic gel was slowly absorbed on the other side of the plate hole with the pipette, loaded into the 2ml centrifuge tube and dissolved in 20min at 4 degrees C, then centrifugated to precipitate the nematode, abandoned the supernatant, and added 1ml to clean the stem nematode, centrifugation and retractable stem nematode, after 3 repetitions and 5 repeated cleaning and separation. After the heart was recovered, pure stem nematode suspension was obtained. This method can significantly improve the isolation efficiency and purity of stem nematodes and effectively meet the research needs of stem nematode disease.
【技术实现步骤摘要】
一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法
本专利技术涉及一种植物组织中寄生线虫的分离方法,具体涉及一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法,属农业植物保护领域。
技术介绍
马铃薯腐烂茎线虫(DitylenchusdestructorThorne)是世界范围内重要的农业害虫,其寄主范围包括100多种重要经济作物及杂草。在中国腐烂茎线虫主要为害甘薯,通常可造成甘薯减产20-50%,甚至绝收。此外,该线虫还可为害马铃薯、花生、大蒜、胡萝卜、人参等重要经济作物,现已成为众多研究项目的焦点。获取充足、纯净的实验材料是开展相关研究的基础。目前通用的腐烂茎线虫分离方法主要为漏斗法和浅盘法,操作方法可简单表述为将一个筛盘和一个盛水盘套放在一起,在筛盘上放一层滤纸或面巾纸,用水淋湿。将发病的植物组织切碎后放在滤纸上,向底部盛水盘中加水,淹没植物组织即可,室温下放置24h。由于腐烂茎线虫具有亲水性,浸泡分离期间线虫会从植物组织中游出,再由于自身的重力作用,游出的线虫会逐渐沉降到容器底部,此时收集容器底部的浸泡液即得到线虫悬浮液。上述方法的不足之处在于,首先游出的线虫需主动穿过滤纸或面巾纸才能到达容器底部,大大降低了茎线虫回收效率。其次,长时间浸泡会导致滤纸或面巾纸破损,纸的残渣和植物组织都会混入线虫悬浮液,很难获得洁净的线虫。第三,为提高茎线虫对滤纸的通过率,就只能延长浸泡提取时间。然而长时间的浸水会导致发病植物组织内杂菌的快速繁殖,增加茎线虫的死亡率。此外,为得到较为干净的茎线虫,许多实验室利用镰刀菌培养茎线虫,然而该方法从开始培养到收集需要40-50d的时间,周期很长,且 ...
【技术保护点】
一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法,其特征在于,具体包括以下步骤:1)称取一定量的Pluronic F‑127放入烧杯中,按照Pluronic F‑127浓度为25%的比例向烧杯中加入灭菌水,然后将烧杯在冰浴条件下搅拌过夜,待Pluronic F‑127完全溶解,溶液澄清透明后放入4℃冰箱保存备用;2)取灭菌的细胞培养板,向培养板的每个板孔中加入5ml Pluronic F‑127溶液,室温静置30min使Pluronic F‑127溶液形成半固态凝胶,得Pluronic胶;3)将发病薯块切成2‑4mm的薄片,用镊子夹取病薯片沿板孔一侧贴壁轻轻放入Pluronic胶中,室温下静置2h,使茎线虫从植物组织中游出;4)用移液器沿板孔另一侧吸取含有茎线虫的Pluronic胶;5)将吸取的含有茎线虫的Pluronic胶装入2ml离心管,在4℃冰箱中放置20min使Pluronic胶溶解,离心使茎线虫沉淀,弃去上层Pluronic胶溶液;6)向离心管中加入1ml预冷的灭菌水,清洗茎线虫,离心回收茎线虫,经3‑5次重复清洗、离心回收后即获得纯净的茎线虫悬浮液。
【技术特征摘要】
1.一种植物组织中马铃薯腐烂茎线虫的分离方法,其特征在于,具体包括以下步骤:1)称取一定量的PluronicF-127放入烧杯中,按照PluronicF-127浓度为25%的比例向烧杯中加入灭菌水,然后将烧杯在冰浴条件下搅拌过夜,待PluronicF-127完全溶解,溶液澄清透明后放入4℃冰箱保存备用;2)取灭菌的细胞培养板,向培养板的每个板孔中加入5mlPluronicF-127溶液,室温静置30min使PluronicF-127溶液形成半固态凝胶,得Pluronic胶;3)将发病薯块切成2-4mm的薄片,用镊子夹取病薯片沿板孔一侧贴壁轻轻放入Pluronic胶中,室温下静置2h,使茎线虫从植物组织中游出;4)用移液器沿板孔另一侧吸取含有茎线虫的Pluronic胶;...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐振,谢逸萍,孙厚俊,张成玲,杨冬静,赵永强,孙杨,孙明芳,张梅,孙厚浩,
申请(专利权)人:江苏徐淮地区徐州农业科学研究所江苏徐州甘薯研究中心,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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